实验二 质粒DNA转化大肠杆菌
一、实验目的
掌握质粒DNA转化大肠杆菌的方法技术
二、实验原理
转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程，其原理是细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物，粘附于细胞表面，经42℃短时间热击，促进细胞吸收DNA复合物，将细菌放置在培养箱中保温一段时间，促使在转化过程中获得新的表型得到表达，然后将细菌培养物涂在含有Amp的选择培养基中。
三、实验仪器及药品
仪器：超净工作台、恒温摇床、制冰机、恒温培养箱、-70℃冰箱、水浴锅 材料：大肠杆菌JM109、pUC19质粒、离心管
试剂：LB固体培养基、20mg/mL X-gal、20mg/mL IPTG
四、实验内容
1、取200μL新制备的感受态细胞，加入DNA 2 μL（50 ng）混匀，冰浴30min，同时用pUC19做两个对照。
1）受体菌对照：200μL感受态细胞 + 2 μL 无菌水
2）质粒对照：200μL 0.1mol / L CaCl2溶液+ 2 μL 质粒DNA
2、将管放在42℃水浴90s。
3、立即冰浴2 min。
4、每管中加入800μL 的LB液体培养基，培养45min~60min（140rpm）。
5、向两个转化平板中先加入40μL IPTG，再加入40μL X-gal，并用灭过菌的涂布棒将这两样药品涂满平板。
6、然后将适当体积（100μL）转化的感受态细胞涂匀平板。
7、倒置平皿37℃培养12~16 h，出现菌落。
五、实验结果
各实验组观察并记录皿内菌落大的生长状况并进行结果分析。
六、思考题
如何提高转化率？
实验二 质粒DNA转化大肠杆菌
一、实验目的
掌握质粒DNA转化大肠杆菌的方法技术
二、实验原理
转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程，其原理是细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物，粘附于细胞表面，经42℃短时间热击，促进细胞吸收DNA复合物，将细菌放置在培养箱中保温一段时间，促使在转化过程中获得新的表型得到表达，然后将细菌培养物涂在含有Amp的选择培养基中。
三、实验仪器及药品
仪器：超净工作台、恒温摇床、制冰机、恒温培养箱、-70℃冰箱、水浴锅 材料：大肠杆菌JM109、pUC19质粒、离心管
试剂：LB固体培养基、20mg/mL X-gal、20mg/mL IPTG
四、实验内容
1、取200μL新制备的感受态细胞，加入DNA 2 μL（50 ng）混匀，冰浴30min，同时用pUC19做两个对照。
1）受体菌对照：200μL感受态细胞 + 2 μL 无菌水
2）质粒对照：200μL 0.1mol / L CaCl2溶液+ 2 μL 质粒DNA
2、将管放在42℃水浴90s。
3、立即冰浴2 min。
4、每管中加入800μL 的LB液体培养基，培养45min~60min（140rpm）。
5、向两个转化平板中先加入40μL IPTG，再加入40μL X-gal，并用灭过菌的涂布棒将这两样药品涂满平板。
6、然后将适当体积（100μL）转化的感受态细胞涂匀平板。
7、倒置平皿37℃培养12~16 h，出现菌落。
五、实验结果
各实验组观察并记录皿内菌落大的生长状况并进行结果分析。
六、思考题
如何提高转化率？