甲壳素和壳聚糖蛋白质检测方法（适用于含氮产品检测）
1．标准溶液配制：
1．1标准贮备液的配制：
精密称定25.0mg 牛血清蛋白V 标准于50mL 容量瓶中，加30mL 0.1moL/L的氢氧化钠溶液使其溶解，然后再加0.1moL/L的氢氧化钠溶液稀释至刻度并摇匀，冷藏后备用。
1．2系列标准的配制：
分别精密移取1mL 、2mL 、3mL 、4mL 和5mL 的标准贮备液至5个25mL 容量瓶中，加0.1moL/L的氢氧化钠溶液稀释至刻度，标准浓度分别为20µg/mL、40µg/mL、60µg/mL、80µg/mL、100µg/mL。
2．样品溶液的配制：
精密称定已经粉碎好的样品（甲壳素称取0.50g ，阿拉斯加雪蟹和壳聚糖称取5.0g ）于100mL 容量瓶中，加约65℃ 0.1moL/L的氢氧化钠溶液至刻度并摇匀，置于水浴温度为65℃的水浴锅中，浸泡样品一小时后用定性滤纸过滤，弃去初滤液，取续滤液备用。
3．空白溶液为0.1moL/L的氢氧化钠溶液。
4．碱性酒石酸铜溶液的配制：
4．1溶液A ：精密称定酒石酸钾钠200mg 于10mL 容量瓶中，加5mL 纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
4．2溶液B ：精密称定硫酸铜（CuSO 4·5H 2O ）100mg 于10mL 容量瓶中，加5mL 纯
化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
4．3溶液C ：称取2.0g 的无水碳酸钠于100mL 容量瓶中，加60mL 0.1moL/L的氢氧化钠溶液使其溶解，再加0.1moL/L的氢氧化钠溶液稀释至刻度并摇匀。
4．4碱性酒石酸铜溶液：分别精密移取1mL 溶液A 和mL 溶液B 混合在干燥洁净的小烧杯中，将此混合液缓缓注入到100mL 的溶液C 中，摇匀即得。（注：此溶液需现配现用，不可超过24小时使用）
5．FOlin-酚溶液：精密移取市售的FOlin-酚试剂5mL 于25mL 容量瓶中，加纯化水稀释至刻度并摇匀。
6．检样操作：
6．1分别精密移取1mL 空白溶液、1mL 样品溶液和1mL5个系列标准于25mL 干燥洁净的纳氏比色管中；
6．2在各个管中按每分钟一个加入碱性酒石酸铜溶液1mL ，并立即混合均匀，并开始记时，10分钟后再按时间先后加入0.5mL FOlin-酚溶液，并立即混合均匀。 30分钟后（按第一个计时时间）依次在准备好的紫外分光光度计上在750nm 处检测其吸光度，同时用空白校正。
6．3数据测出后，按线性方程计算蛋白质的浓度，浓度算出后按下列公式计算蛋白质的百分比含量。
X%=（C ×10）×100×100%/M（1-W ）
C--蛋白质的浓度, µg/mL；
100—样品的稀释倍数；
M--称取样品的质量，g ；
W--样品中水分的百分含量。 -6
甲壳素和壳聚糖蛋白质检测方法（适用于含氮产品检测）
1．标准溶液配制：
1．1标准贮备液的配制：
精密称定25.0mg 牛血清蛋白V 标准于50mL 容量瓶中，加30mL 0.1moL/L的氢氧化钠溶液使其溶解，然后再加0.1moL/L的氢氧化钠溶液稀释至刻度并摇匀，冷藏后备用。
1．2系列标准的配制：
分别精密移取1mL 、2mL 、3mL 、4mL 和5mL 的标准贮备液至5个25mL 容量瓶中，加0.1moL/L的氢氧化钠溶液稀释至刻度，标准浓度分别为20µg/mL、40µg/mL、60µg/mL、80µg/mL、100µg/mL。
2．样品溶液的配制：
精密称定已经粉碎好的样品（甲壳素称取0.50g ，阿拉斯加雪蟹和壳聚糖称取5.0g ）于100mL 容量瓶中，加约65℃ 0.1moL/L的氢氧化钠溶液至刻度并摇匀，置于水浴温度为65℃的水浴锅中，浸泡样品一小时后用定性滤纸过滤，弃去初滤液，取续滤液备用。
3．空白溶液为0.1moL/L的氢氧化钠溶液。
4．碱性酒石酸铜溶液的配制：
4．1溶液A ：精密称定酒石酸钾钠200mg 于10mL 容量瓶中，加5mL 纯化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
4．2溶液B ：精密称定硫酸铜（CuSO 4·5H 2O ）100mg 于10mL 容量瓶中，加5mL 纯
化水使其溶解，然后再加纯化水稀释至刻度并摇匀。
4．3溶液C ：称取2.0g 的无水碳酸钠于100mL 容量瓶中，加60mL 0.1moL/L的氢氧化钠溶液使其溶解，再加0.1moL/L的氢氧化钠溶液稀释至刻度并摇匀。
4．4碱性酒石酸铜溶液：分别精密移取1mL 溶液A 和mL 溶液B 混合在干燥洁净的小烧杯中，将此混合液缓缓注入到100mL 的溶液C 中，摇匀即得。（注：此溶液需现配现用，不可超过24小时使用）
5．FOlin-酚溶液：精密移取市售的FOlin-酚试剂5mL 于25mL 容量瓶中，加纯化水稀释至刻度并摇匀。
6．检样操作：
6．1分别精密移取1mL 空白溶液、1mL 样品溶液和1mL5个系列标准于25mL 干燥洁净的纳氏比色管中；
6．2在各个管中按每分钟一个加入碱性酒石酸铜溶液1mL ，并立即混合均匀，并开始记时，10分钟后再按时间先后加入0.5mL FOlin-酚溶液，并立即混合均匀。 30分钟后（按第一个计时时间）依次在准备好的紫外分光光度计上在750nm 处检测其吸光度，同时用空白校正。
6．3数据测出后，按线性方程计算蛋白质的浓度，浓度算出后按下列公式计算蛋白质的百分比含量。
X%=（C ×10）×100×100%/M（1-W ）
C--蛋白质的浓度, µg/mL；
100—样品的稀释倍数；
M--称取样品的质量，g ；
W--样品中水分的百分含量。 -6