●技术与方法
文章编号:100021336(2003) 0220149203
《生命的化学》2003年23卷2期
CHE MISTRY OF LIFE 2003, 23(2)
・149・
DNA 甲基化方法研究现状
沈佳尧 侯 鹏 祭美菊 李 松 陆祖宏 何农跃
(东南大学生物医学与科学工程系吴建雄实验室, 南京210096)
摘要:DNA的异常甲基化与肿瘤的发生发展密切相关。DNA 甲基化已成为研究热点, 有关研究方法发展迅速。甲基化研究方法大抵分为两大类:1.基因组DNA 的甲基化检测;2. 特定DNA 片段的甲基化检测。目前的研究重点已转移到特定基因尤其是抑癌基因的甲基化。关键词:甲基化; 抑癌基因; 微阵列技术中图分类号:Q75
在肿瘤发生发展过程中, 基因功能的改变包括
基因机制和后生机制(epigenetic ) [1DNA 。这种方法较为, 。1. 3 高效液相色谱(HP LC ) 法 将DNA 用酸或酶裂解为碱基, 通过色谱柱分离出各种碱基, 由波长260nm 的紫外光测定其吸收峰并定量, 灵敏度为碱
人类基因组中约, 其
中很多C p G 密切相关[1]。因此,DNA 甲基化已成为目前的研究热点。近年来甲基化分析方法发展迅速, 大致可以分为两大类:基因组DNA 及特定DNA 片段的甲基化检测。
1. 基因组DNA 的甲基化检测
肿瘤组织中癌基因异常表达, 基因组DNA 的甲基化程度一般较相应的正常组织低。检测方法主要有以下三种。这些方法只能检测基因组DNA 的甲基化, 并不能具体到特定的基因和位点。1. 1 限制性内切酶酶解法 采用不能切割含5mC p G 片段(5mC 为5甲基胞嘧啶) 的甲基化敏感的限制性内切酶分别消化处理肿瘤和正常组织DNA , 经琼脂糖凝胶电泳检测, 正常组织DNA 酶解后小片段会多于肿瘤组织DNA , 且呈弥散状[2]。这种方法较为粗略, 要求两组的甲基化程度有明显的区别, 而且这种方法只能考察限制酶识别序列内的C p G 位点, 假阳性较高。
1. 2 甲基化酶温育法 在一定条件下用甲基化酶催化甲基基团由3H 2S 2腺苷甲硫氨酸(3H 2S AM ) 掺
基[4]。由积分面积5mC/(5mC +C ) 的百分数检测基因组DNA 中5mC 的含量, 即DNA 甲基化的水平。此法是目前测定基因组DNA 中5mC 总量最标准的方法。
2. 特定DNA 片段的甲基化检测
近年来人们发现在癌变组织中抑癌基因低表达甚至不表达, 甲基化程度比正常组织明显增高[5]。DNA 甲基化异常不仅能促进染色体缺失、重排和突
变, 还可直接灭活抑癌基因。典型的抑癌基因p 16、
Rb 和VH L 等C p G 位点甲基化普遍存在于多种缺乏
突变和丢失的肿瘤中, 因而DNA 异常甲基化可能是肿瘤中抑癌基因失活的重要机制[6]。
特定DNA 片段的甲基化检测方法有以下几种。2. 1 DNA 印迹 采用甲基化敏感及非甲基化敏) 分别消化待测DNA , 感的限制酶(Hpa Ⅱ
和Msp Ⅰ
再进行DNA 印迹杂交。消化后的DNA 片段经琼脂糖凝胶分离后转印到纤维素膜上, 再与靶序列互补的探针杂交。利用放射自显影技术检测靶序列的甲基化位点[7]。这个方法的原理是根据非甲基化敏感的限制酶不能切割含5mC p G 片段的特性, 判断被测DNA 序列中的一个或多个C p G 位点的甲基化状态。
入待测DNA 。由于反应是过量的, 可最大限度地
掺入甲基, 故可推知掺入前DNA 样本的甲基化情况, 并以肿瘤区与正常区cpm 值之差了解该样本基
收稿日期:2002211211
国家973计划(G 1998051204) 和江苏省高新技术资助项目
(BG 2001010) 资助
) , 女, 硕士生; 何农跃, 通讯联系人。作者简介:沈佳尧(1979—
[3]
缺点在于:(1) 仅限于限制酶识别序列内的
C p G 位点; (2) 要求甲基化的等位基因的比例达到
μ百分之一以上; (3) 要求每个DNA 样品的量5210g ; (4) 不完全酶切可能导致假阳性。
2. 2 限制性内切酶2PCR 利用甲基化敏感的限
・150・
《生命的化学》2003年23卷2期CHE MISTRY OF LIFE 2003, 23(2)
●Technique s and Methods
制酶与PCR 联用的策略, 把PCR 引物设计在酶切位点的两侧,DNA 被酶切后, 只有发生甲基化不被切割的DNA 才能被PCR 扩增[8]。此法检测C p G 岛异常甲基化灵敏度高, 可用过量的酶量(40单位/μg DNA ) 完全消化组织DNA 以避免酶切不完全出现的假阳性, 但这种方法也只限于检测限制酶所能识别的C p G 位点。2. 3 测序法 Frommer 等[9]采用了亚硫酸氢盐对DNA 进行化学修饰的方法, 为研究DNA 甲基化提供了一种全新的思路。其原理是单链DNA 中未发生甲基化的胞嘧啶可被亚硫酸氢盐脱氨基而转变成尿嘧啶, 而甲基化的胞嘧啶保持不变。然后, 利用PCR 技术对所需要的那段序列进行扩增, 将尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最后, 对PCR 并且与未经修饰的序列比较, G 是否发生甲基化因控制区C p G 导大量出现[10,11]。序, 较为繁琐、昂贵。2. 4 甲基化特异的PCR (MSP ) MSP 是Herman 等[12]首先提出的。它的原理是在设计的引物中包含多个C p G 位点, 一对引物是针对C p G 位点发生甲基化设计的, 另一对是针对C p G 位点未甲基化设计的。MSP 是一种分析给定DNA 序列是否甲基化的快速定性的方法。
如果引物设计的不合理, 总DNA 的不完全亚硫酸氢盐修饰可能会导致甲基化胞嘧啶的假阳性, 可通过限制性内切酶酶解法检测PCR 产物作进一步的判断[13]。同时, 由于甲基化特异引物所包含的C p G 位点有限, 也会丢失一些甲基化信息。2. 5 甲基化敏感性单链核苷酸引物延伸(Methyla 2tion 2sensitive single nucleotide primer extension , MS 2SnuPE ) G onzalg o 和Jones [14]改进了检测突变的
等[15]借鉴了DHP LC 检测点突变的方法, 把发生甲
基化的多个C p G 位点作为多位点突变, 原理为, 先用亚硫酸氢盐修饰DNA , 再用PCR 扩增含C p G 位点的靶序列, 用DHP LC 在部分变性温度下测定靶序列的保留时间。靶序列发生甲基化后, 其保留时间比未甲基化的靶序列明显增长。
此方法可快速检测C p G 岛甲基化, 但是能否通过测定变性温度的上升幅度或保留时间的延长程度来进行甲基化程度的定量测定还有待研究。而且, 这种方法最大的不足在于它无法检测特定位点的甲基化模式。
2. 7) DNA 微阵。这种基于杂交的寡DNA 。主要有整个基因组范围内扫描的差异甲基化杂交(DMH ) 及针对某个基因检测的甲基化特异性微阵列(MS O ) 等。
(1) 差异甲基化杂交(DMH ) , 首先是1999年由Huang 等[16]提出的, 包括C p G 岛微阵列的制备、标
记靶序列的制备以及扫描图谱的分析。
DMH 的优点在于能够在整个基因组范围检测
甲基化的发生模式, 高度实现了微阵列技术的高通量优势。缺陷在于只能局限于酶切位点的甲基化发生情况, 遗漏了很多信息, 而且由于是整个基因组范围内的杂交, 假阳性的几率较大。
(2) 甲基化特异性微阵列(MS O ) 是由G itan 等[17]发展的一种DNA 甲基化分析技术。该方法利用亚硫酸氢盐处理的方法, 结合PCR 技术将基因组DNA 中未甲基化的C 全部转变为T , 而5mC 保持不变。根据这种变化, 设计甲基化与非甲基化探针来检测C p G 位点的甲基化状态。然后, 将经Sss Ⅰ甲基化酶处理的阳性样本与未处理的阴性样本按不同比例混合后与MS O 微阵列杂交, 以此作为DNA 甲基化定量分析的标准曲线。根据标准曲线来确定多个C p G 岛的甲基化改变, 但该微阵列无法确定所研究C p G 岛的甲基化模式
。
Adorj án 等[18]在此基础上对探针的设计做了一些改进, 他们所设计的探针只包含一个C p G 位点, 并采用这个方法检测了p 15、p 16、hMLH Ⅰ等大量基因。该微阵列虽然能确定甲基化模式, 但只是针对单个的C p G 位点, 只能检测抑癌基因启动子区很有限的几个C p G 位点, 对于抑癌基因C p G 位点密集区的甲基化研究意义并不是太大。
本实验室是国内研究开发基因芯片技术最早、
单链核苷酸引物延伸法, 并用于特定C p G 位点的甲基化定量研究。原理为, 经亚硫酸氢盐修饰DNA 后, 用相应的引物扩增出目标序列, 所得的目标序列作为MS 2SnuPE 反应的模板。设计引物的末端要求在C p G 位点前一个核苷酸结束。延伸时掺入同位素标记的dCTP 和dTTP , 加入DNA 聚合酶。如果目标位点发生了甲基化,C 就会在核苷酸延伸时连上去, 反之则会连上T 。根据掺入C 和T 的量能判断目标位点的甲基化程度。所以, 引物的设计和DNA 的修饰是关键。
2. 6 变性高效液相色谱法(DHP LC ) 邓大君
●技术与方法
《生命的化学》2003年23卷2期
CHE MISTRY OF LIFE 2003, 23(2)
[4] 房静远等. 上海医学,1996, 19(1) :1—4[5] P ogribny IP et al. Cancer Lett , 1997, 115:31—38[6] Huang Y et al. Cancer Res , 1992, 52:6525—6530
・151・
最成熟的实验室之一, 目前已在这方面开展了一些
工作并已取得了一定的进展, 在拥有成熟的制备基因芯片技术的基础上, 对前人的DNA 甲基化研究方法做了较大的改进。我们以典型的抑癌基因p 16为研究对象, 针对较为复杂的C p G 位点, 设计了组合探针(包括所有的甲基化模式) , 该微阵列能够准确的确定几个相邻C p G 位点的甲基化模式。具体内容将另文发表。
参考文献
[1] 李士谔. 基础医学与临床, 1996, 16(5) :321—340[2] 白坚石等. 中国科学(C 辑) , 2000, 30(1) :108—112[3] Schmitt F et al. J Biol Chem , 1997, 272:1534—1540
[7] Bickle T A et al. Microbiol Rev , 1993, 57:434—450[8] K ane MF et al. Cancer Res , 1997, 57:808—811[9] Frommer M et al. PNAS , 1992, 89:1827—1831
[10] H iltunen M O et al. Int J Cancer , 1997
, 70(6) :644—648[11] M elki JR et al. Cancer Res , 1999, 59(15) :3730—3740[12] Herman J G et al. PNAS , 1996, 93:9821—9826[13] Li Q et al. Oncogene , 1999, 18:3284—3289
[14] G onzalg o M L et al. Nucleic Acids Res , 1997, 25:2529—2531[15] 邓大君等. 中华医学杂志, 2001, 81(3) :158—162
[16] Huang TH M et al. Human G enetic , 1999, 8(3) :459—
[17]itan al. G ,12:158—164P Acids Res , 2002, 30(5) :21—29
—学术研讨会
(第一轮通知)
会议目的:由血脂紊乱导致的高血脂症及动脉硬化性疾病已成为危害人类健康的最重要危险因素之一。降低血脂水平、减少高血脂症对人类健康的危害, 已经成为临床医学、预防医学和药学工作者迫切的研究任务。
目前已被广泛应用的(S tadin ) 他汀类和贝特类(Fibrate ) 药物可以有效的降低胆固醇和甘油三酯, 起到了有益的作用。但是, 目前应用的药物还不能达到人们预期的效果。随着基础科学的深入研究, 已经发现了不少的新的药物作用靶点, 不仅能降低有害的胆固醇和甘油三脂水平, 而且还可以升高高密度脂蛋白的水平。这些新的药物作用靶点不仅涉及到肝细胞域的研究非常活跃, 而且也取得了相当程度的进展。
为了推动基础研究与药物研究的密切结合, 推动我国降血脂药物的联合研究(合成的化学药、基因工程药和中药) , 以及在这些领域研究现状信息的交流, 中国生物化学与分子生物学会脂蛋白专业委员会(筹) 与中华医学会中华心血管病杂志编委会特组织以降血脂药物为主题的学术研讨会。本次会议将邀请在该领域有造诣的专家教授, 进行专题性的综述报告, 深入地介绍某一方面的研究现状; 还将邀请临床医生就当前降脂药物的作用效果和建议作会议介绍, 会议还将邀请从事中医药研究的有关专家就中药在降脂药研究现状进行综合介绍。会议以大会综述报告为主, 并进行深入的讨论, 以达到充分了解国内、外降血脂药物的研究现状, 动态和发展方向, 为国内从事该研究领域的朋友补充新的信息,
增加创新决心, 为我国研发新类型的降血脂药物奠定理论基础。会议报告内容将汇集成册, 发给参加会议的代表。欢迎临床医生参加学术交流; 欢迎医药生产厂家参加会议, 展出产品。
会议时间:2003年11月下旬或12月上旬会议地点:海南省, 海口市
主办单位:中国生物化学与分子生物学会脂蛋白专业委员会
(筹)
承办单位:海南医学院生化系
征文内容:1.有关降血脂药物的新靶点;
2. 有关核受体在降脂药筛选中的应用; 3. 有关脂酶抑制剂的研究现状; 4. 有关中药降血脂的研究进展;
5. 有关应用新技术筛选降脂药的新动态。
稿件截止日期:2003年9月30日止。
E 2m ail :hyqsy @public. hk. hi. cn
联系方式:中国医学科学院基础所生物化学室 陈保生 电
话:[1**********]3 传真:[1**********]9
海南省海南医学院生化系 钱士匀 电话:08982
66773781
中国生物化学与分子生物学会
脂蛋白专业委员会(筹) 海南医学院生化系
2003年3月2日
●技术与方法
文章编号:100021336(2003) 0220149203
《生命的化学》2003年23卷2期
CHE MISTRY OF LIFE 2003, 23(2)
・149・
DNA 甲基化方法研究现状
沈佳尧 侯 鹏 祭美菊 李 松 陆祖宏 何农跃
(东南大学生物医学与科学工程系吴建雄实验室, 南京210096)
摘要:DNA的异常甲基化与肿瘤的发生发展密切相关。DNA 甲基化已成为研究热点, 有关研究方法发展迅速。甲基化研究方法大抵分为两大类:1.基因组DNA 的甲基化检测;2. 特定DNA 片段的甲基化检测。目前的研究重点已转移到特定基因尤其是抑癌基因的甲基化。关键词:甲基化; 抑癌基因; 微阵列技术中图分类号:Q75
在肿瘤发生发展过程中, 基因功能的改变包括
基因机制和后生机制(epigenetic ) [1DNA 。这种方法较为, 。1. 3 高效液相色谱(HP LC ) 法 将DNA 用酸或酶裂解为碱基, 通过色谱柱分离出各种碱基, 由波长260nm 的紫外光测定其吸收峰并定量, 灵敏度为碱
人类基因组中约, 其
中很多C p G 密切相关[1]。因此,DNA 甲基化已成为目前的研究热点。近年来甲基化分析方法发展迅速, 大致可以分为两大类:基因组DNA 及特定DNA 片段的甲基化检测。
1. 基因组DNA 的甲基化检测
肿瘤组织中癌基因异常表达, 基因组DNA 的甲基化程度一般较相应的正常组织低。检测方法主要有以下三种。这些方法只能检测基因组DNA 的甲基化, 并不能具体到特定的基因和位点。1. 1 限制性内切酶酶解法 采用不能切割含5mC p G 片段(5mC 为5甲基胞嘧啶) 的甲基化敏感的限制性内切酶分别消化处理肿瘤和正常组织DNA , 经琼脂糖凝胶电泳检测, 正常组织DNA 酶解后小片段会多于肿瘤组织DNA , 且呈弥散状[2]。这种方法较为粗略, 要求两组的甲基化程度有明显的区别, 而且这种方法只能考察限制酶识别序列内的C p G 位点, 假阳性较高。
1. 2 甲基化酶温育法 在一定条件下用甲基化酶催化甲基基团由3H 2S 2腺苷甲硫氨酸(3H 2S AM ) 掺
基[4]。由积分面积5mC/(5mC +C ) 的百分数检测基因组DNA 中5mC 的含量, 即DNA 甲基化的水平。此法是目前测定基因组DNA 中5mC 总量最标准的方法。
2. 特定DNA 片段的甲基化检测
近年来人们发现在癌变组织中抑癌基因低表达甚至不表达, 甲基化程度比正常组织明显增高[5]。DNA 甲基化异常不仅能促进染色体缺失、重排和突
变, 还可直接灭活抑癌基因。典型的抑癌基因p 16、
Rb 和VH L 等C p G 位点甲基化普遍存在于多种缺乏
突变和丢失的肿瘤中, 因而DNA 异常甲基化可能是肿瘤中抑癌基因失活的重要机制[6]。
特定DNA 片段的甲基化检测方法有以下几种。2. 1 DNA 印迹 采用甲基化敏感及非甲基化敏) 分别消化待测DNA , 感的限制酶(Hpa Ⅱ
和Msp Ⅰ
再进行DNA 印迹杂交。消化后的DNA 片段经琼脂糖凝胶分离后转印到纤维素膜上, 再与靶序列互补的探针杂交。利用放射自显影技术检测靶序列的甲基化位点[7]。这个方法的原理是根据非甲基化敏感的限制酶不能切割含5mC p G 片段的特性, 判断被测DNA 序列中的一个或多个C p G 位点的甲基化状态。
入待测DNA 。由于反应是过量的, 可最大限度地
掺入甲基, 故可推知掺入前DNA 样本的甲基化情况, 并以肿瘤区与正常区cpm 值之差了解该样本基
收稿日期:2002211211
国家973计划(G 1998051204) 和江苏省高新技术资助项目
(BG 2001010) 资助
) , 女, 硕士生; 何农跃, 通讯联系人。作者简介:沈佳尧(1979—
[3]
缺点在于:(1) 仅限于限制酶识别序列内的
C p G 位点; (2) 要求甲基化的等位基因的比例达到
μ百分之一以上; (3) 要求每个DNA 样品的量5210g ; (4) 不完全酶切可能导致假阳性。
2. 2 限制性内切酶2PCR 利用甲基化敏感的限
・150・
《生命的化学》2003年23卷2期CHE MISTRY OF LIFE 2003, 23(2)
●Technique s and Methods
制酶与PCR 联用的策略, 把PCR 引物设计在酶切位点的两侧,DNA 被酶切后, 只有发生甲基化不被切割的DNA 才能被PCR 扩增[8]。此法检测C p G 岛异常甲基化灵敏度高, 可用过量的酶量(40单位/μg DNA ) 完全消化组织DNA 以避免酶切不完全出现的假阳性, 但这种方法也只限于检测限制酶所能识别的C p G 位点。2. 3 测序法 Frommer 等[9]采用了亚硫酸氢盐对DNA 进行化学修饰的方法, 为研究DNA 甲基化提供了一种全新的思路。其原理是单链DNA 中未发生甲基化的胞嘧啶可被亚硫酸氢盐脱氨基而转变成尿嘧啶, 而甲基化的胞嘧啶保持不变。然后, 利用PCR 技术对所需要的那段序列进行扩增, 将尿嘧啶全部转化成胸腺嘧啶。最后, 对PCR 并且与未经修饰的序列比较, G 是否发生甲基化因控制区C p G 导大量出现[10,11]。序, 较为繁琐、昂贵。2. 4 甲基化特异的PCR (MSP ) MSP 是Herman 等[12]首先提出的。它的原理是在设计的引物中包含多个C p G 位点, 一对引物是针对C p G 位点发生甲基化设计的, 另一对是针对C p G 位点未甲基化设计的。MSP 是一种分析给定DNA 序列是否甲基化的快速定性的方法。
如果引物设计的不合理, 总DNA 的不完全亚硫酸氢盐修饰可能会导致甲基化胞嘧啶的假阳性, 可通过限制性内切酶酶解法检测PCR 产物作进一步的判断[13]。同时, 由于甲基化特异引物所包含的C p G 位点有限, 也会丢失一些甲基化信息。2. 5 甲基化敏感性单链核苷酸引物延伸(Methyla 2tion 2sensitive single nucleotide primer extension , MS 2SnuPE ) G onzalg o 和Jones [14]改进了检测突变的
等[15]借鉴了DHP LC 检测点突变的方法, 把发生甲
基化的多个C p G 位点作为多位点突变, 原理为, 先用亚硫酸氢盐修饰DNA , 再用PCR 扩增含C p G 位点的靶序列, 用DHP LC 在部分变性温度下测定靶序列的保留时间。靶序列发生甲基化后, 其保留时间比未甲基化的靶序列明显增长。
此方法可快速检测C p G 岛甲基化, 但是能否通过测定变性温度的上升幅度或保留时间的延长程度来进行甲基化程度的定量测定还有待研究。而且, 这种方法最大的不足在于它无法检测特定位点的甲基化模式。
2. 7) DNA 微阵。这种基于杂交的寡DNA 。主要有整个基因组范围内扫描的差异甲基化杂交(DMH ) 及针对某个基因检测的甲基化特异性微阵列(MS O ) 等。
(1) 差异甲基化杂交(DMH ) , 首先是1999年由Huang 等[16]提出的, 包括C p G 岛微阵列的制备、标
记靶序列的制备以及扫描图谱的分析。
DMH 的优点在于能够在整个基因组范围检测
甲基化的发生模式, 高度实现了微阵列技术的高通量优势。缺陷在于只能局限于酶切位点的甲基化发生情况, 遗漏了很多信息, 而且由于是整个基因组范围内的杂交, 假阳性的几率较大。
(2) 甲基化特异性微阵列(MS O ) 是由G itan 等[17]发展的一种DNA 甲基化分析技术。该方法利用亚硫酸氢盐处理的方法, 结合PCR 技术将基因组DNA 中未甲基化的C 全部转变为T , 而5mC 保持不变。根据这种变化, 设计甲基化与非甲基化探针来检测C p G 位点的甲基化状态。然后, 将经Sss Ⅰ甲基化酶处理的阳性样本与未处理的阴性样本按不同比例混合后与MS O 微阵列杂交, 以此作为DNA 甲基化定量分析的标准曲线。根据标准曲线来确定多个C p G 岛的甲基化改变, 但该微阵列无法确定所研究C p G 岛的甲基化模式
。
Adorj án 等[18]在此基础上对探针的设计做了一些改进, 他们所设计的探针只包含一个C p G 位点, 并采用这个方法检测了p 15、p 16、hMLH Ⅰ等大量基因。该微阵列虽然能确定甲基化模式, 但只是针对单个的C p G 位点, 只能检测抑癌基因启动子区很有限的几个C p G 位点, 对于抑癌基因C p G 位点密集区的甲基化研究意义并不是太大。
本实验室是国内研究开发基因芯片技术最早、
单链核苷酸引物延伸法, 并用于特定C p G 位点的甲基化定量研究。原理为, 经亚硫酸氢盐修饰DNA 后, 用相应的引物扩增出目标序列, 所得的目标序列作为MS 2SnuPE 反应的模板。设计引物的末端要求在C p G 位点前一个核苷酸结束。延伸时掺入同位素标记的dCTP 和dTTP , 加入DNA 聚合酶。如果目标位点发生了甲基化,C 就会在核苷酸延伸时连上去, 反之则会连上T 。根据掺入C 和T 的量能判断目标位点的甲基化程度。所以, 引物的设计和DNA 的修饰是关键。
2. 6 变性高效液相色谱法(DHP LC ) 邓大君
●技术与方法
《生命的化学》2003年23卷2期
CHE MISTRY OF LIFE 2003, 23(2)
[4] 房静远等. 上海医学,1996, 19(1) :1—4[5] P ogribny IP et al. Cancer Lett , 1997, 115:31—38[6] Huang Y et al. Cancer Res , 1992, 52:6525—6530
・151・
最成熟的实验室之一, 目前已在这方面开展了一些
工作并已取得了一定的进展, 在拥有成熟的制备基因芯片技术的基础上, 对前人的DNA 甲基化研究方法做了较大的改进。我们以典型的抑癌基因p 16为研究对象, 针对较为复杂的C p G 位点, 设计了组合探针(包括所有的甲基化模式) , 该微阵列能够准确的确定几个相邻C p G 位点的甲基化模式。具体内容将另文发表。
参考文献
[1] 李士谔. 基础医学与临床, 1996, 16(5) :321—340[2] 白坚石等. 中国科学(C 辑) , 2000, 30(1) :108—112[3] Schmitt F et al. J Biol Chem , 1997, 272:1534—1540
[7] Bickle T A et al. Microbiol Rev , 1993, 57:434—450[8] K ane MF et al. Cancer Res , 1997, 57:808—811[9] Frommer M et al. PNAS , 1992, 89:1827—1831
[10] H iltunen M O et al. Int J Cancer , 1997
, 70(6) :644—648[11] M elki JR et al. Cancer Res , 1999, 59(15) :3730—3740[12] Herman J G et al. PNAS , 1996, 93:9821—9826[13] Li Q et al. Oncogene , 1999, 18:3284—3289
[14] G onzalg o M L et al. Nucleic Acids Res , 1997, 25:2529—2531[15] 邓大君等. 中华医学杂志, 2001, 81(3) :158—162
[16] Huang TH M et al. Human G enetic , 1999, 8(3) :459—
[17]itan al. G ,12:158—164P Acids Res , 2002, 30(5) :21—29
—学术研讨会
(第一轮通知)
会议目的:由血脂紊乱导致的高血脂症及动脉硬化性疾病已成为危害人类健康的最重要危险因素之一。降低血脂水平、减少高血脂症对人类健康的危害, 已经成为临床医学、预防医学和药学工作者迫切的研究任务。
目前已被广泛应用的(S tadin ) 他汀类和贝特类(Fibrate ) 药物可以有效的降低胆固醇和甘油三酯, 起到了有益的作用。但是, 目前应用的药物还不能达到人们预期的效果。随着基础科学的深入研究, 已经发现了不少的新的药物作用靶点, 不仅能降低有害的胆固醇和甘油三脂水平, 而且还可以升高高密度脂蛋白的水平。这些新的药物作用靶点不仅涉及到肝细胞域的研究非常活跃, 而且也取得了相当程度的进展。
为了推动基础研究与药物研究的密切结合, 推动我国降血脂药物的联合研究(合成的化学药、基因工程药和中药) , 以及在这些领域研究现状信息的交流, 中国生物化学与分子生物学会脂蛋白专业委员会(筹) 与中华医学会中华心血管病杂志编委会特组织以降血脂药物为主题的学术研讨会。本次会议将邀请在该领域有造诣的专家教授, 进行专题性的综述报告, 深入地介绍某一方面的研究现状; 还将邀请临床医生就当前降脂药物的作用效果和建议作会议介绍, 会议还将邀请从事中医药研究的有关专家就中药在降脂药研究现状进行综合介绍。会议以大会综述报告为主, 并进行深入的讨论, 以达到充分了解国内、外降血脂药物的研究现状, 动态和发展方向, 为国内从事该研究领域的朋友补充新的信息,
增加创新决心, 为我国研发新类型的降血脂药物奠定理论基础。会议报告内容将汇集成册, 发给参加会议的代表。欢迎临床医生参加学术交流; 欢迎医药生产厂家参加会议, 展出产品。
会议时间:2003年11月下旬或12月上旬会议地点:海南省, 海口市
主办单位:中国生物化学与分子生物学会脂蛋白专业委员会
(筹)
承办单位:海南医学院生化系
征文内容:1.有关降血脂药物的新靶点;
2. 有关核受体在降脂药筛选中的应用; 3. 有关脂酶抑制剂的研究现状; 4. 有关中药降血脂的研究进展;
5. 有关应用新技术筛选降脂药的新动态。
稿件截止日期:2003年9月30日止。
E 2m ail :hyqsy @public. hk. hi. cn
联系方式:中国医学科学院基础所生物化学室 陈保生 电
话:[1**********]3 传真:[1**********]9
海南省海南医学院生化系 钱士匀 电话:08982
66773781
中国生物化学与分子生物学会
脂蛋白专业委员会(筹) 海南医学院生化系
2003年3月2日