果蝇唾腺染色体的制备与观察
【摘要】
多线染色体广泛存在于双翅目、弹尾目昆虫的消化道及消化腺细胞中，是遗传研究的良好材料。本实验以果蝇三龄幼虫唾腺为实验材料，对进行唾腺剥离、染色和制片后置于高倍镜下观察。由于在操作中难以真正做到均匀分散，所以得到的染色体多为臂与臂相互纠缠或为完全伸展, 但可以观察到较为清晰的横纹结构。
【引言】
多线染色体最早是1881年在摇蚊（ Chironomus）幼虫的唾腺中发现。研究表明，巨大染色体的形成机制是这样的：果蝇幼虫的唾腺细胞发育到一定阶段后，停止在间期，但紧密配对的同源染色体（实为伸展的染色质丝），仍能不断复制，复制后的子染色体彼此不分开，复制可达9次之多，因此一对染色体最终可产生 2*29 =1024条染色质丝，它们集结在一起形成了一条多线染色体。 多线染色体的特点可归纳为以下几点。第一，染色体巨大。第二，核内有丝分裂：果蝇幼虫的唾腺细胞在发育过程中，细胞核内的DNA 多次复制（210-215），但并未发生细胞核分裂，复制后的子染色体彼此不分开，形成了多线染色体。第三，体细胞配对：同源染色体相互靠拢在一起呈现一种联会状态，使其比一般的体细胞染色体粗大。第四，横纹结构：染色质丝的不同部位螺旋化程度不同。其中螺旋化程度较高的形成染色较深的暗纹，螺旋化程度较低的部位形成了染色较浅的明纹。横纹数量巨大，在黑腹果蝇中可达5000多条。这些深浅不一，疏密各异的带纹遍布整条唾腺染色体。唾腺染色体的每一臂上所有的横纹的大小和位置是恒定的，即具有种的特征。根据染色体臂末端的形态、臂上的横纹及蓬突等可以将特定的唾腺染色体臂识别出来。
多线染色体在许多消化道及消化腺组织中存在，但多采用幼虫的唾腺，因为唾腺易于剥取且其中染色体较大。压片法不仅程序简单，且细胞核中内容物压片后都将集中在玻片上不会丢失，较之切片法效果更好。果蝇唾腺染色体的制备是遗传学实验中必须掌握的技能。
【实验材料和方法】
实验材料：果蝇的三龄幼虫、载玻片、盖玻片、吸水纸、解剖针、显微镜、解剖镜、改良苯酚品红、生理盐水（0.7%NaCl溶液）、蒸馏水、1mol/L HCl溶液
实验方法：
1）分离唾腺；
将幼虫放在含有一滴生理盐水的洁净载玻片上。在解剖镜下观察：双手各持一枚解剖针，用左手解剖针扎住幼虫体前1/3处，用右手解剖针压住幼虫口沟部位向外迅速拉开，一对唾腺随着口器被扯出。（唾腺是一对透明的棒状腺体，通常每个腺体上附着一个白色的脂肪体，是鉴别唾腺的重要标志。细胞轮廓清楚，其上有一层黑色脂肪细胞）将唾腺以外的其他部分以及脂肪体去除备用。
2）解离：在唾腺组织上滴加一滴1M 盐酸解离2-3min ，使组织松软，吸去HCl 。
3）水洗：用水冲洗3次，前两次每次浸泡1-2分钟，最后一次停留20min 。用滤纸小心吸去多余蒸馏水。
4）染色：滴加改良苯酚品红染液，染色10min 。（染色时间不可过长）
4）压片：染色完成后盖上盖玻片，并覆盖一层滤纸，用解剖针垂直轻敲盖玻片使细胞分散，最后用大拇指垂直用力按压，并横向揉几次。
5）镜检：显微镜下寻找分散较好唾腺染色体，观察唾腺染色体的特
点。
【实验结果】
间纹
图片1 图片2 横纹
X 蓬突
图片3（来源：同组同学赵菲）
2L ? 3L
X 3R?2R 3L ？3R
2R ？2L
图片4（来源：生技班同学）
【讨论】
1. 图1、2为实验者所制，发现染色体臂未展开，分析原因应是压
片时力度不够导致。但染色体横纹清晰可见。
2. 从图4分析：该图中染色体的展开效果较好，可清晰地分辨出五
条长臂和第四号染色体，但是有一条染色体的末端未完全展开。 通过分析课本上的果蝇唾腺染色体形态图，发现2L 和3L 臂末端没有带纹或带纹不明显，且2L 臂中浅染的明纹较3L 臂中明纹宽（此特点是对照课本上的图分析得来，我不是很肯定是否有这个规律，希望老师给予指点）；而2R 和3R 臂的末端有深染的暗纹，且3R 臂末端深染的横纹较2R 臂多。对各条臂的判断如图标示。
3. 在实验中发现，剥离果蝇唾腺时解剖针要固定在体前1/3或更前
端，否则容易拉出其他消化器官及生殖器，给实验增加难度。且剥离时注意保持唾腺浸润在生理盐水中，由于解剖镜较热，水易蒸发干导致唾腺脱水。
4. 在染色时要注意不要把玻片上的蒸馏水吸干，可以用来稀释染
液；且注意控制染色时间以免染色过度，使背景着色给观察带来困难。
5. 在用滤纸吸去溶液时容易将唾腺吸走，我采用了课本的方法效果较好：吸取溶液时，将玻片稍微倾斜，液体顺着玻片往下流，腺体则附着在玻片上。肉眼辨别唾腺位置，在距唾腺一定距离的下游小心吸走液体。
【参考文献】
[1]遗传学实验. 杨大翔.2. 科学出版社.2011.1
[2]中国D. virilis 果蝇唾腺染色体的初步观察. 戴灼华，韩文智. 遗传[J].1986.8(2).23-24
果蝇唾腺染色体的制备与观察
【摘要】
多线染色体广泛存在于双翅目、弹尾目昆虫的消化道及消化腺细胞中，是遗传研究的良好材料。本实验以果蝇三龄幼虫唾腺为实验材料，对进行唾腺剥离、染色和制片后置于高倍镜下观察。由于在操作中难以真正做到均匀分散，所以得到的染色体多为臂与臂相互纠缠或为完全伸展, 但可以观察到较为清晰的横纹结构。
【引言】
多线染色体最早是1881年在摇蚊（ Chironomus）幼虫的唾腺中发现。研究表明，巨大染色体的形成机制是这样的：果蝇幼虫的唾腺细胞发育到一定阶段后，停止在间期，但紧密配对的同源染色体（实为伸展的染色质丝），仍能不断复制，复制后的子染色体彼此不分开，复制可达9次之多，因此一对染色体最终可产生 2*29 =1024条染色质丝，它们集结在一起形成了一条多线染色体。 多线染色体的特点可归纳为以下几点。第一，染色体巨大。第二，核内有丝分裂：果蝇幼虫的唾腺细胞在发育过程中，细胞核内的DNA 多次复制（210-215），但并未发生细胞核分裂，复制后的子染色体彼此不分开，形成了多线染色体。第三，体细胞配对：同源染色体相互靠拢在一起呈现一种联会状态，使其比一般的体细胞染色体粗大。第四，横纹结构：染色质丝的不同部位螺旋化程度不同。其中螺旋化程度较高的形成染色较深的暗纹，螺旋化程度较低的部位形成了染色较浅的明纹。横纹数量巨大，在黑腹果蝇中可达5000多条。这些深浅不一，疏密各异的带纹遍布整条唾腺染色体。唾腺染色体的每一臂上所有的横纹的大小和位置是恒定的，即具有种的特征。根据染色体臂末端的形态、臂上的横纹及蓬突等可以将特定的唾腺染色体臂识别出来。
多线染色体在许多消化道及消化腺组织中存在，但多采用幼虫的唾腺，因为唾腺易于剥取且其中染色体较大。压片法不仅程序简单，且细胞核中内容物压片后都将集中在玻片上不会丢失，较之切片法效果更好。果蝇唾腺染色体的制备是遗传学实验中必须掌握的技能。
【实验材料和方法】
实验材料：果蝇的三龄幼虫、载玻片、盖玻片、吸水纸、解剖针、显微镜、解剖镜、改良苯酚品红、生理盐水（0.7%NaCl溶液）、蒸馏水、1mol/L HCl溶液
实验方法：
1）分离唾腺；
将幼虫放在含有一滴生理盐水的洁净载玻片上。在解剖镜下观察：双手各持一枚解剖针，用左手解剖针扎住幼虫体前1/3处，用右手解剖针压住幼虫口沟部位向外迅速拉开，一对唾腺随着口器被扯出。（唾腺是一对透明的棒状腺体，通常每个腺体上附着一个白色的脂肪体，是鉴别唾腺的重要标志。细胞轮廓清楚，其上有一层黑色脂肪细胞）将唾腺以外的其他部分以及脂肪体去除备用。
2）解离：在唾腺组织上滴加一滴1M 盐酸解离2-3min ，使组织松软，吸去HCl 。
3）水洗：用水冲洗3次，前两次每次浸泡1-2分钟，最后一次停留20min 。用滤纸小心吸去多余蒸馏水。
4）染色：滴加改良苯酚品红染液，染色10min 。（染色时间不可过长）
4）压片：染色完成后盖上盖玻片，并覆盖一层滤纸，用解剖针垂直轻敲盖玻片使细胞分散，最后用大拇指垂直用力按压，并横向揉几次。
5）镜检：显微镜下寻找分散较好唾腺染色体，观察唾腺染色体的特
点。
【实验结果】
间纹
图片1 图片2 横纹
X 蓬突
图片3（来源：同组同学赵菲）
2L ? 3L
X 3R?2R 3L ？3R
2R ？2L
图片4（来源：生技班同学）
【讨论】
1. 图1、2为实验者所制，发现染色体臂未展开，分析原因应是压
片时力度不够导致。但染色体横纹清晰可见。
2. 从图4分析：该图中染色体的展开效果较好，可清晰地分辨出五
条长臂和第四号染色体，但是有一条染色体的末端未完全展开。 通过分析课本上的果蝇唾腺染色体形态图，发现2L 和3L 臂末端没有带纹或带纹不明显，且2L 臂中浅染的明纹较3L 臂中明纹宽（此特点是对照课本上的图分析得来，我不是很肯定是否有这个规律，希望老师给予指点）；而2R 和3R 臂的末端有深染的暗纹，且3R 臂末端深染的横纹较2R 臂多。对各条臂的判断如图标示。
3. 在实验中发现，剥离果蝇唾腺时解剖针要固定在体前1/3或更前
端，否则容易拉出其他消化器官及生殖器，给实验增加难度。且剥离时注意保持唾腺浸润在生理盐水中，由于解剖镜较热，水易蒸发干导致唾腺脱水。
4. 在染色时要注意不要把玻片上的蒸馏水吸干，可以用来稀释染
液；且注意控制染色时间以免染色过度，使背景着色给观察带来困难。
5. 在用滤纸吸去溶液时容易将唾腺吸走，我采用了课本的方法效果较好：吸取溶液时，将玻片稍微倾斜，液体顺着玻片往下流，腺体则附着在玻片上。肉眼辨别唾腺位置，在距唾腺一定距离的下游小心吸走液体。
【参考文献】
[1]遗传学实验. 杨大翔.2. 科学出版社.2011.1
[2]中国D. virilis 果蝇唾腺染色体的初步观察. 戴灼华，韩文智. 遗传[J].1986.8(2).23-24