摘要：目的建立气相色谱法同时测定麝香祛风湿膏中桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚等7组分的含量。方法用挥发油提取法提取样品中的挥发性成分制备供试品溶液，以石英毛细管柱（安捷伦 DB-WAX，长15 m，内径0.53 mm，涂层0.5μm）为色谱柱，氮气为载气，FID检测器的温度为250 ℃，柱温为程序升温。结果在该色谱条件下桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的分离度和线性关系良好，平均回收率（n＝6）分别为98.7 %（RSD＝1.1 ％）、99.0 %（RSD＝1.0 ％）、99.4 %（RSD＝0.8 ％）、99.7 %（RSD＝0.4 ％）、99.6 %（RSD＝0.5 ％）、99.5 %（RSD＝0.8 ％）、99.5 %（RSD＝0.9 ％）。结论本法简便快捷，准确性和重复性均好，可用于麝香祛风湿膏的质量控制。 关键词：薄荷脑；水杨酸甲酯；丁香酚；麝香祛风湿膏；气相色谱法；含量测定 中图分类号：R914.1文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)09-0051-03 Determination of Menthol, Eugenol and Other Constituents in Shexiang Qufengshi Adhesive Plasters by GC Method YANG Jing-jing1, GUO Jian-gu 1, LIU Xian-yang 1, ZHANG Xiao-shan 2 (1. Shantou Wuhuan Pharmacy Factory Co., Ltd, Shantou 515041, China; 2. The Advanced Instrument Analysis & Testing Center, Shantou University, Shantou 515041, China) Abstract：Objective To determine the contents of eucalyptol, camphor, synthetic borneol, menthol, methyl salicylate, cinnamaldehyde and eugenol in Shexiang Qufengshi Adhesive Plasters by GC method. Methods The sample solution was prepared by distillation with an essential oil collector. The GC system consisted of a quartz capillary column（Agilent DB-WAX, 15 m, 0.53 mm, 0.5 μm） as stationary phase, nitrogen as carrier gas, FID detector at 250 ℃ and programmed heating method. Results The resolution and linearity of eucalyptol, camphor, synthetic borneol, menthol, methyl salicylate, cinnamaldehyde and eugenol were good with the recovery rate of eucalyptol at 98.7 % (RSD=1.1 %) camphor at 99.0 % (RSD=1.0 %), synthetic borneol at 99.4 % (RSD=0.8 %), menthol at 99.7 % (RSD=0.4 %), methyl salicylate at 99.6 % (RSD=0.5 %), cinnamaldehyde at 99.5 % (RSD=0.8 %), eugenol at 99.5 % (RSD=0.9 %), respectively. Conclusion This method is convenient, rapid, accurate and reproducible, and can be used for the quality control of Shexiang Qufengshi Adhesive Plasters. Key words：menthol; methyl salicylate; eugenol; Shexiang Qufengshi Adhesive Plasters; GC; assaying 麝香祛风湿膏[1]是由麝香、血竭、薄荷脑、樟脑等14味中西药制成的橡胶膏剂，为我国卫生部药品质量标准中药成方制剂第15册收载的品种，其处方中含有挥发性成分桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚，具有祛风湿、活血、镇痛、消肿等功效，用于治疗风湿痛、筋骨痛、跌打肿痛等。卫生部药品标准中仅对薄荷脑、桂皮醛进行TLC鉴别，相关各成分的含量均无检测。为了提高本品的质量控制标准，作者采用气相色谱法对麝香祛风湿膏中的挥发性成分进行了定量测定[2，3]。采用程序升温，以萘作为内标，同时测定了桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚7组分的含量，本方法简便快捷，结果准确。 1仪器和试药 4890D气相色谱仪（安捷伦）及配套工作站。石英毛细管柱（安捷伦 DB-WAX，长15 m，内径0.53 mm ，涂层0.5 μm）。麝香祛风湿膏（汕头五环制药厂，批号： 070901，071101，080101；规格：10 cm×6 cm）。对照品：桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚（中国药品生物制品检定所）。内标物：萘（批号：20040401）、无水乙醇（批号：20040304），均为分析纯，上海凌峰化学试剂公司。纯化水。 2色谱条件 以石英毛细管柱为色谱柱；柱温为程序升温，80 ℃保持2 min后开始升温，以5 ℃/min升温至140 ℃，保持12 min后再次以5 ℃/min升温至180 ℃；检测器为氢火焰离子化检测器（FID），温度为250 ℃，进样口温度为200 ℃，载气为氮气，进样量为1 μL；分流比50∶1；理论板数按薄荷脑峰计算不低于50 000。 3溶液的制备 3.1内标溶液 取萘适量，精密称定，加无水乙醇制成含萘8 mg/mL的溶液，作为内标溶液。 3.2对照品溶液 取对照品桉油精72 mg、樟脑64 mg、冰片72 mg、薄荷脑162 mg、水杨酸甲酯220 mg、桂皮醛30 mg、丁香酚30 mg，精密称定，置于25 mL量瓶中，加无水乙醇溶解，精密加入内标溶液5 mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。 3.3供试品溶液 取麝香祛风湿膏5片，剪成小条，去除外衬，置于500 mL平底烧瓶中，加水200 mL，连接挥发油提取器，自提取器上端加水使充满刻度，并溢流入烧瓶为止；连接回流冷凝管，加热回流3 h，放冷，分取油层，用铺有无水硫酸钠的漏斗滤过至25 mL量瓶中，精密加入内标溶液5 mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
4线性关系考察 取对照品桉油精600 mg、樟脑525 mg、冰片600 mg、薄荷脑1 250 mg、水杨酸甲酯1 750 mg、桂皮醛250 mg、丁香酚250 mg，精密称定，置于25 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并定容；再分别精密量取1.5，2.5，3.0，4.0，5.0 mL至25 mL量瓶中，各精密加入内标溶液5 mL，再加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；各取1μL进样，记录色谱图，其中冰片峰以龙脑峰面积计，以对照品峰面积与相应内标峰面积之比为纵坐标（Y），对照品浓度与相应内标浓度之比为横坐标（X）进行线性回归，得各组分线性回归方程，见表1。结果表明，桉油精浓度在1.44～4.8 mg/mL、樟脑浓度在1.26～4.2 mg/mL、冰片浓度在1.44～4.8 mg/mL、薄荷脑浓度在3.0～10.0 mg/mL、水杨酸甲酯浓度在4.2～14.0 mg/mL、桂皮醛浓度在0.6～2.0 mg/mL、丁香酚浓度在0.6～2.0 mg/mL范围内均呈良好的线性关系。 5空白试验 取无桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的阴性样品，按“3.3”项下方法制备阴性样品溶液，依法测定。结果在桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚保留时间处无杂质峰干扰，表明样品中其他成分不干扰测定，方法专属性强，见图1。 6精密度试验 取同一份对照品溶液，精密量取1μL进样，重复进样6次，每次测得桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的峰面积与相应内标峰面积之比的RSD分别为1.0 ％，0.7 ％，0.5 ％，0.3 ％，0.3 ％，0.4 ％，0.9 ％。 7重复性试验 取同一批号麝香祛风湿膏6份，每份5片，按“3.3”项下方法制备供试品溶液，按“10”项下方法测定含量，结果6份样品平均含量RSD分别为桉油精1.0 ％、樟脑0.9 ％、冰片0.9 ％ 、薄荷脑0.4 ％、水杨酸甲酯0.4 ％、桂皮醛0.7 ％、丁香酚0.8 ％。 8溶液的稳定性试验 在本试验条件下，取供试品溶液分别在室温避光处放置0，2，4，6，8，12，24 h后依法测定，按对照峰面积与内标峰面积之比计算桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的RSD分别为1.6 ％，1.0 ％，0.8 ％，0.4 ％，0.9 ％，0.4 ％，0.6 ％，表明本品的测定溶液在24 h内基本稳定。 9回收率试验 取缺桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的阴性样品适量（相当于5片样品量）共6份，分别加入对照品桉油精72 mg、樟脑64 mg、冰片72 mg、薄荷脑162 mg、水杨酸甲酯220 mg、桂皮醛30 mg、丁香酚30 mg，精密称定，按“3.3”项下方法制备所需溶液，按“10”项下方法测定含量计算平均回收率（n＝6），结果为桉油精98.7 %（RSD＝1.1 ％）、樟脑99.0 %（RSD＝1.0 ％）、冰片99.4 %（RSD＝0.8 ％）、薄荷脑99.7 %（RSD＝0.4 ％）、水杨酸甲酯99.6 %（RSD＝0.5 ％）、桂皮醛99.5 %（RSD＝0.8 ％）、丁香酚99.5 %（RSD＝0.9 ％）。 10样品含量测定 按“3”项下方法制备对照品溶液、供试品溶液，各精密量取1 μL注入气相色谱仪，记录色谱图，对照品见图2，供试品见图3，按内标法计算含量（其中冰片以龙脑峰面积计算），3批供试品的含量数据见表2。 11讨论 由于麝香祛风湿膏为橡胶膏制剂，普通溶剂难以溶解，现行的麝香祛风湿膏标准采用乙醚溶解提取主药成分，主药与基质难分离。曾试用索氏抽提法，加无水乙醇提取，结果主药成分长时间加热，使回收率偏低，同时有易溶于乙醇的其他杂质干扰检测。选用挥发油提取法，通过试验，提取3 h，各组分即可提取到100 ％，其他杂质成分少，经试验对含量检测无干扰。 由于麝香祛风湿膏中组分多，等温检测时各组分无法全部分离，故采用程序升温法。由于桉油精、樟脑沸点较低，桂皮醛、丁香酚沸点较高，采用程序升温初始温度高于100 ℃时，难以将桉油精与溶剂分离，经试验以80 ℃为佳；曾设一次程序升温方法，即80 ℃保持2 min后开始升温，升温速率5 ℃/min，升温至200 ℃保持4 min，此条件下样品中的麝香草酚与丁香酚无法分离。经多次试验，改用二次程序升温方法，即80 ℃保持2 min后开始升温，升温速率5 ℃/min升温至140 ℃保持12 min后再次升温，升温速率5 ℃/min 升温至180 ℃，此条件下，各峰分离能达到要求。 麝香祛风湿膏主药成分多又且具有挥发性，通过定量测定麝香祛风湿膏主药成分含量，达到了提高外用中药制剂 质量标准的目的。 参考文献 [1]WS3-B-3021-98麝香祛风湿膏[S]. 国家卫生部药品质量标准. 北京. [2]WS3-B-1708-94-2004风油精[S]. 国家卫生部药品质量标准. 北京. [3]傅应华，王金观，徐宏祥. 气相色谱法同时测定麝香解痛膏中樟脑、冰片和桂皮醛三组分的含量[J]. 药物分析杂志，2007，27（9）：1434-1436.
摘要：目的建立气相色谱法同时测定麝香祛风湿膏中桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚等7组分的含量。方法用挥发油提取法提取样品中的挥发性成分制备供试品溶液，以石英毛细管柱（安捷伦 DB-WAX，长15 m，内径0.53 mm，涂层0.5μm）为色谱柱，氮气为载气，FID检测器的温度为250 ℃，柱温为程序升温。结果在该色谱条件下桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的分离度和线性关系良好，平均回收率（n＝6）分别为98.7 %（RSD＝1.1 ％）、99.0 %（RSD＝1.0 ％）、99.4 %（RSD＝0.8 ％）、99.7 %（RSD＝0.4 ％）、99.6 %（RSD＝0.5 ％）、99.5 %（RSD＝0.8 ％）、99.5 %（RSD＝0.9 ％）。结论本法简便快捷，准确性和重复性均好，可用于麝香祛风湿膏的质量控制。 关键词：薄荷脑；水杨酸甲酯；丁香酚；麝香祛风湿膏；气相色谱法；含量测定 中图分类号：R914.1文献标识码：A文章编号：1672-979X(2008)09-0051-03 Determination of Menthol, Eugenol and Other Constituents in Shexiang Qufengshi Adhesive Plasters by GC Method YANG Jing-jing1, GUO Jian-gu 1, LIU Xian-yang 1, ZHANG Xiao-shan 2 (1. Shantou Wuhuan Pharmacy Factory Co., Ltd, Shantou 515041, China; 2. The Advanced Instrument Analysis & Testing Center, Shantou University, Shantou 515041, China) Abstract：Objective To determine the contents of eucalyptol, camphor, synthetic borneol, menthol, methyl salicylate, cinnamaldehyde and eugenol in Shexiang Qufengshi Adhesive Plasters by GC method. Methods The sample solution was prepared by distillation with an essential oil collector. The GC system consisted of a quartz capillary column（Agilent DB-WAX, 15 m, 0.53 mm, 0.5 μm） as stationary phase, nitrogen as carrier gas, FID detector at 250 ℃ and programmed heating method. Results The resolution and linearity of eucalyptol, camphor, synthetic borneol, menthol, methyl salicylate, cinnamaldehyde and eugenol were good with the recovery rate of eucalyptol at 98.7 % (RSD=1.1 %) camphor at 99.0 % (RSD=1.0 %), synthetic borneol at 99.4 % (RSD=0.8 %), menthol at 99.7 % (RSD=0.4 %), methyl salicylate at 99.6 % (RSD=0.5 %), cinnamaldehyde at 99.5 % (RSD=0.8 %), eugenol at 99.5 % (RSD=0.9 %), respectively. Conclusion This method is convenient, rapid, accurate and reproducible, and can be used for the quality control of Shexiang Qufengshi Adhesive Plasters. Key words：menthol; methyl salicylate; eugenol; Shexiang Qufengshi Adhesive Plasters; GC; assaying 麝香祛风湿膏[1]是由麝香、血竭、薄荷脑、樟脑等14味中西药制成的橡胶膏剂，为我国卫生部药品质量标准中药成方制剂第15册收载的品种，其处方中含有挥发性成分桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚，具有祛风湿、活血、镇痛、消肿等功效，用于治疗风湿痛、筋骨痛、跌打肿痛等。卫生部药品标准中仅对薄荷脑、桂皮醛进行TLC鉴别，相关各成分的含量均无检测。为了提高本品的质量控制标准，作者采用气相色谱法对麝香祛风湿膏中的挥发性成分进行了定量测定[2，3]。采用程序升温，以萘作为内标，同时测定了桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚7组分的含量，本方法简便快捷，结果准确。 1仪器和试药 4890D气相色谱仪（安捷伦）及配套工作站。石英毛细管柱（安捷伦 DB-WAX，长15 m，内径0.53 mm ，涂层0.5 μm）。麝香祛风湿膏（汕头五环制药厂，批号： 070901，071101，080101；规格：10 cm×6 cm）。对照品：桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚（中国药品生物制品检定所）。内标物：萘（批号：20040401）、无水乙醇（批号：20040304），均为分析纯，上海凌峰化学试剂公司。纯化水。 2色谱条件 以石英毛细管柱为色谱柱；柱温为程序升温，80 ℃保持2 min后开始升温，以5 ℃/min升温至140 ℃，保持12 min后再次以5 ℃/min升温至180 ℃；检测器为氢火焰离子化检测器（FID），温度为250 ℃，进样口温度为200 ℃，载气为氮气，进样量为1 μL；分流比50∶1；理论板数按薄荷脑峰计算不低于50 000。 3溶液的制备 3.1内标溶液 取萘适量，精密称定，加无水乙醇制成含萘8 mg/mL的溶液，作为内标溶液。 3.2对照品溶液 取对照品桉油精72 mg、樟脑64 mg、冰片72 mg、薄荷脑162 mg、水杨酸甲酯220 mg、桂皮醛30 mg、丁香酚30 mg，精密称定，置于25 mL量瓶中，加无水乙醇溶解，精密加入内标溶液5 mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。 3.3供试品溶液 取麝香祛风湿膏5片，剪成小条，去除外衬，置于500 mL平底烧瓶中，加水200 mL，连接挥发油提取器，自提取器上端加水使充满刻度，并溢流入烧瓶为止；连接回流冷凝管，加热回流3 h，放冷，分取油层，用铺有无水硫酸钠的漏斗滤过至25 mL量瓶中，精密加入内标溶液5 mL，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。
4线性关系考察 取对照品桉油精600 mg、樟脑525 mg、冰片600 mg、薄荷脑1 250 mg、水杨酸甲酯1 750 mg、桂皮醛250 mg、丁香酚250 mg，精密称定，置于25 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并定容；再分别精密量取1.5，2.5，3.0，4.0，5.0 mL至25 mL量瓶中，各精密加入内标溶液5 mL，再加无水乙醇稀释至刻度，摇匀；各取1μL进样，记录色谱图，其中冰片峰以龙脑峰面积计，以对照品峰面积与相应内标峰面积之比为纵坐标（Y），对照品浓度与相应内标浓度之比为横坐标（X）进行线性回归，得各组分线性回归方程，见表1。结果表明，桉油精浓度在1.44～4.8 mg/mL、樟脑浓度在1.26～4.2 mg/mL、冰片浓度在1.44～4.8 mg/mL、薄荷脑浓度在3.0～10.0 mg/mL、水杨酸甲酯浓度在4.2～14.0 mg/mL、桂皮醛浓度在0.6～2.0 mg/mL、丁香酚浓度在0.6～2.0 mg/mL范围内均呈良好的线性关系。 5空白试验 取无桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的阴性样品，按“3.3”项下方法制备阴性样品溶液，依法测定。结果在桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚保留时间处无杂质峰干扰，表明样品中其他成分不干扰测定，方法专属性强，见图1。 6精密度试验 取同一份对照品溶液，精密量取1μL进样，重复进样6次，每次测得桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的峰面积与相应内标峰面积之比的RSD分别为1.0 ％，0.7 ％，0.5 ％，0.3 ％，0.3 ％，0.4 ％，0.9 ％。 7重复性试验 取同一批号麝香祛风湿膏6份，每份5片，按“3.3”项下方法制备供试品溶液，按“10”项下方法测定含量，结果6份样品平均含量RSD分别为桉油精1.0 ％、樟脑0.9 ％、冰片0.9 ％ 、薄荷脑0.4 ％、水杨酸甲酯0.4 ％、桂皮醛0.7 ％、丁香酚0.8 ％。 8溶液的稳定性试验 在本试验条件下，取供试品溶液分别在室温避光处放置0，2，4，6，8，12，24 h后依法测定，按对照峰面积与内标峰面积之比计算桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的RSD分别为1.6 ％，1.0 ％，0.8 ％，0.4 ％，0.9 ％，0.4 ％，0.6 ％，表明本品的测定溶液在24 h内基本稳定。 9回收率试验 取缺桉油精、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯、桂皮醛、丁香酚的阴性样品适量（相当于5片样品量）共6份，分别加入对照品桉油精72 mg、樟脑64 mg、冰片72 mg、薄荷脑162 mg、水杨酸甲酯220 mg、桂皮醛30 mg、丁香酚30 mg，精密称定，按“3.3”项下方法制备所需溶液，按“10”项下方法测定含量计算平均回收率（n＝6），结果为桉油精98.7 %（RSD＝1.1 ％）、樟脑99.0 %（RSD＝1.0 ％）、冰片99.4 %（RSD＝0.8 ％）、薄荷脑99.7 %（RSD＝0.4 ％）、水杨酸甲酯99.6 %（RSD＝0.5 ％）、桂皮醛99.5 %（RSD＝0.8 ％）、丁香酚99.5 %（RSD＝0.9 ％）。 10样品含量测定 按“3”项下方法制备对照品溶液、供试品溶液，各精密量取1 μL注入气相色谱仪，记录色谱图，对照品见图2，供试品见图3，按内标法计算含量（其中冰片以龙脑峰面积计算），3批供试品的含量数据见表2。 11讨论 由于麝香祛风湿膏为橡胶膏制剂，普通溶剂难以溶解，现行的麝香祛风湿膏标准采用乙醚溶解提取主药成分，主药与基质难分离。曾试用索氏抽提法，加无水乙醇提取，结果主药成分长时间加热，使回收率偏低，同时有易溶于乙醇的其他杂质干扰检测。选用挥发油提取法，通过试验，提取3 h，各组分即可提取到100 ％，其他杂质成分少，经试验对含量检测无干扰。 由于麝香祛风湿膏中组分多，等温检测时各组分无法全部分离，故采用程序升温法。由于桉油精、樟脑沸点较低，桂皮醛、丁香酚沸点较高，采用程序升温初始温度高于100 ℃时，难以将桉油精与溶剂分离，经试验以80 ℃为佳；曾设一次程序升温方法，即80 ℃保持2 min后开始升温，升温速率5 ℃/min，升温至200 ℃保持4 min，此条件下样品中的麝香草酚与丁香酚无法分离。经多次试验，改用二次程序升温方法，即80 ℃保持2 min后开始升温，升温速率5 ℃/min升温至140 ℃保持12 min后再次升温，升温速率5 ℃/min 升温至180 ℃，此条件下，各峰分离能达到要求。 麝香祛风湿膏主药成分多又且具有挥发性，通过定量测定麝香祛风湿膏主药成分含量，达到了提高外用中药制剂 质量标准的目的。 参考文献 [1]WS3-B-3021-98麝香祛风湿膏[S]. 国家卫生部药品质量标准. 北京. [2]WS3-B-1708-94-2004风油精[S]. 国家卫生部药品质量标准. 北京. [3]傅应华，王金观，徐宏祥. 气相色谱法同时测定麝香解痛膏中樟脑、冰片和桂皮醛三组分的含量[J]. 药物分析杂志，2007，27（9）：1434-1436.