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ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９—－０００２．２００９．０５．０２９
综述
原核生物中小ＲＮＡ的功能及研究进展
李娜１，２朱力１，王恒棵１
１．军事医学科学院生物工程研究所，北京１０００７１；２．海军总医院检验科，北京１０００３７
［摘要】在原核生物基因组中，除了ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ和ｍＲＮＡ这３种我们很熟悉的ＲＮＡ以外，目前已经知道还含有许多编码
非常规调控的ＲＮＡ。这些ＲＮＡ的长度为５０～４００核苷酸，通常由原核生物的基因间区编码，但并不翻译成蛋白质，因此被称
为非编码小ＲＮＡ（ｓＲＮＡ），简称小ＲＮＡ或非编码ＲＮＡ。近年来，随着生物信息学和分子生物学技术的不断发展，在原核生物体内陆续发现了上百种ｓＲＮＡ分子，这些ｓＲＮＡ分子具有多样的生物学功能，作为一类新发现的基因表达调控子已经引起
了高度的重视。
［关键词】小ＲＮＡ；原核生物；基因表达调控
［文献标识码】Ａ
【中图分类号】Ｑ７５［文章编号】１００９－０００２（２００９）０５－０６９９—０４
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原核生物非编码小ＲＮＡ（ｎｏｎ—ｃｏｄｉｎｇ
ｓｍａｌｌ
ＲＮＡ）是一类长记和染色、功能基因筛选、与蛋白质共纯化、鸟枪克隆法、微阵列检测、生物信息学搜寻、基因组ＳＥＬＥＸ等【１１，每种搜寻ｓＲＮＡ的方法均有其优缺点。
１．１
度为５０－４００核苷酸（ｎｔ）、不能翻译成蛋白质的ＲＮＡ，简称小
ＲＮＡ（ｓｍａｌｌＲＮＡ，ｓＲＮＡ）或非编码ＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）Ｉｌｌ。Ｇｒｉｆ！Ｉｉｎ等在
１９７１年首先在大肠杆菌中发现了ｓＲＮＡ分子，但这些ＲＮＡ分子的编码基因以及它们的功能都不清楚［２１。原核生物８ＲＮＡ长期以来被人们忽视，直到２０世纪８０年代早期，才知道这些ｓＲＮＡ分子是反式编码反义ＲＮＡ（ｔｒａｎｓ—ｅｎｃｏｄｅｄ
ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
ＲＮＡ标记和染色网
ＲＮＡ标记和染色，就是对细胞总提取物进行同位素标记或化学染色标记、凝胶分离、切胶回收所需条带，最后利用核酸酶酶切ＲＮＡ进行分析。这种方法是最早用于寻找ｓＲＮＡ基因的方法，通过这种方法可以发现细胞内丰富的ｓＲＮＡ，但是不能区分ｓＲＮＡ和ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ，而且实验中需要操作放射性标记的细菌培养基。
１．２
ＲＮＡ）。近年来
人们发现ｓＲＮＡ在原核生物中广泛存在，比如在大肠杆菌中被确认的非编码ＲＮＡ的数量已经超过了７０种翻。除此之外，大肠杆菌中还有不少疑似非编码ＲＮＡ有待确认，随着研究的深入，估计大肠杆菌的非编码ＲＮＡ数量还会增加。
通常认为原核生物中基因表达的调控主要发生在转录水平上，因为原核生物的转录和翻译是偶联的，与转录后调节相比，基因表达在转录水平上的调节更为有效。而大多数ｓＲＮＡ是通过与ｍＲＮＡ碱基配对，在转录后水平调控靶基因抑制或活化，如ｓＲＮＡ与靶ＲＮＡ结合，导致靶ＲＮＡ的降解；ｓＲＮＡ负性调节靶ＲＮＡ的翻译；ｓＲＮＡ激活靶ｍＲＮＡ的翻译等。还有一些ｓＲＮＡ具有特定的调控蛋白的功能ｐｔ－Ｓｌ。ｓＲＮＡ在细菌的物质代谢、环境适
功能性遗传筛选（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｔｉｃｓｃｒｅｅｎｓ）闱
功能性遗传筛选的方法是通过建立多拷贝质粒文库识别ｓＲＮＡ，这种方法可以直接鉴定ｓＲＮＡ的功能，能够利用现已建立的遗传学方法。然而，这种筛选很少是专门针对ｓＲＮＡ基因的，为了丰富ｓＲＮＡ基因文库，最好克隆较小的ＤＮＡ片段，即分离ＤＮＡ之后用限制性酶进行切割。大肠杆菌的ＭｉｃＦ和ＤｓｒＡ
ＲＮＡ
就是通过功能性遗传筛选发现的嘲。但是，当研究的ｓＲＮＡ基因是必需的或者当过量表达有毒性时不能使用这种方法。另外，有些ｓＲＮＡ只在特定压力条件下发生自调控、正调控或转录活化抑制，因而这种方法可能无法发现在特殊环境下起作用的ｓＲＮＡ。
应、群体感应和细菌毒力【咩方面发挥了重要的调节作用。
１原核生物ｓＲＮＡ的发现
［收稿日期】２００９－０３—１８［作者简介］李娜（一），女，硕士研究生
用于在原核生物中寻找ｓＲＮＡ及其基因的方法包括ＲＮＡ标
ｉ通信作者ｊ王恒操，（Ｅ—ｍａｉｌ）ｗａｎｇｈｌ＠ｎｉｃ．ｂｉｌ９７９
ｍ．∞．ｃｎ
万方数据
７００
此外，这种方法需要非常繁重的筛选工作。
１．３
与ＢＲＮＡ结合蛋白共纯化【１０ｌ
很多研究表明ｓＲＮＡ是通过与蛋白结合来发挥转录后水平调控功能的，如Ｈｆｑ就是一种ｓＲＮＡ结合蛋白，许多ｓＲＮＡ通过与Ｈｆｑ蛋白结合来调控靶ｍＲＮＡ的降解和翻译。因此，我们可以用靶蛋白及其抗体将ｓＲＮＡ免疫共沉淀下来。Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ等【ｌｌ】利用含有抗Ｈｆｑ抗体的微阵列，将单核细胞增多性利斯特菌中的ｓＲＮＡ免疫共沉淀出来，然后测序获得３个ｓＲＮＡ。这种方法的优点是能够指示出ｓＲＮＡ与蛋白质的相互作用和活性形式，但是在整个纯化过程中都要求ｓＲＮＡ与蛋白质牢固结合，共纯化蛋白要有高度特异性抗体。
１．４鸟枪克隆法（也称为ＲＮＡ组学）
ＲＮＡ组学（ＲＮｏｍｉｃｓ）方法是分离细菌ｓＲＮＡ建立ｃＤＮＡ库，通过文库筛选和序列测定而获得ｓＲＮＡ的方法。Ｖｏｇｅｌ等１１２１在大肠杆菌中利用ＲＮＡ组学技术，以ＲＮＡ长度为５０－５００ｎｔ为目标，筛选出１１个ｓＲＮＡ，其中包括已有报道验证的３个ｓＲＮＡ。这种方法能够检测在一定时间点上表达的、在一定长度范围内的所有的ｓＲＮＡ，不需要预先知道ｓＲＮＡ的特征，能够自动化，能够检测种特异性和不规范的ｓＲＮＡ，能够检测到初级转录本和处理后的ｓＲＮＡ。但是这种方法涉及到对大量克隆的测序，因而花费非常昂贵，也有繁重的工作量；此外，由于ｓＲＮＡ结构的不同，在ｃＤＮＡ合成时可能造成文库的偏性。１．５基因芯片技术（微阵列法）【廿】
基因芯片技术（ＤＮＡ微阵列）是在整个基因组范围内同时测
定基因表达的有力工具。Ｗａｓｓａｒｍａｎ等Ｉ噘合使用基因芯片技术
和比较基因组学，分析筛选了大肠杆菌中大量的ｓＲＮＡ。这种方法能够平行地得到许多ｓＲＮＡ基因的转录特性，快速检测到条件依赖性ｓＲＮＡ表达模式，能够检测种特异性ｓＲＮＡ转录。但这种方法要求具备包括所有基因间区序列的微阵列，费用昂贵，且通常会产生与Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交信号不一致的ｓＲＮＡ检测结果。目前发展了一种新的应对方法，利用ＤＮＡ—ＲＮＡ杂交体的特异性抗体可以解决标记问题，提高灵敏度ｆｌｓＪ。１．６生物信息学方法【坷
持续增长的细菌基因组序列及越来越多的ｓＲＮＡ被发现，为在全基因组内进行ｓＲＮＡ的计算机预测奠定了基础。ｓＲＮＡ一般来源于５０－２５０ｎｔ的带有苇环结构的前体转录本，通常在亲缘相近的种属基因组中高度保守，而且ｓＲＮＡ前体都具有典型特征，因此町以通过生物信息学方法预测新的ｓＲＮＡ。生物信息方法预测ｓＲＮＡ的优点是能够迅速得到许多可能的ｓＲＮＡ候选基因列表，能够与近缘细菌的基因组进行进化比较。但这种方法需要预先知道ｓＲＮＡ的特征，并需要对许多候选位点进行验证。１．７基因组ＳＥＬＥＸ
指数式富集的配体系统进化（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇａｎｄｓ
ｂｙ
ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ
ｅｎｆｉｃｈｍｅｍ，ＳＥＬＥＸ）是２０世纪９０年代发展起来
的一项组合化学技术。利用该技术可以从随机单链核酸序列库中筛选到特异性与靶物质高度亲和的核酸配体，具有靶分子范围广、筛选出的配体亲和力和特异性高等特点。Ｌｏｒｅｎｚ等【１７）用基于ｓＲＮＡ与Ｈｆｑ结合的ＳＥＬＥＸ方法筛选与Ｉ－Ｉｆｑ结合的ｓＲＮＡ。Ｗｉｎｄｂｉｃｈｌｅｒｔｌ８】通过亲和层析纯化并验证得到了ｓＲＮＡ结合因子，如ＲＮＡ聚合酶Ｂ亚单位、Ｈｆｑ和核糖体蛋白Ｓ１及其他一些结合因子，并且通过基因组ＳＥＬＥＸ获得了大量与它们结合的ｓＲＮＡ。
万方数据
生ＬＥｎ，热Ｉ带ＢＩＯＴ术ＥＣＨＮ通ＯＬＯＧ讯Ｙ…Ｖ０１．２０一一Ｎｏ．５
ＴｒＥＲＳ
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Ｓ—ｅｐ．，２００９
．，
２原核生物ｓＲＮＡ的验证
２．１
Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹
Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹是利用带标记的ＤＮＡ探针与ＲＮＡ进行分子
杂交来检测特异性ＲＮＡ的技术。目前多数研究者将Ｎｏｎｈｅｍ印迹作为鉴定ｓＲＮＡ的金标准。但Ｎｏｌ－ｔｈｅｍ印迹的最大缺点是对样品的需求较多，需要微克级样品才能避免假阴性，有时样品量达到４０斗ｇ才会出现明显的杂交信号。然而细菌的ｓＲＮＡ样品往往较难获得，从而导致易出现假阴性结果。Ｐａｔｒｉｃｉａ等【１９１使用夹板
连接法（ｓｐｌｉｎｔｅｄｌｉｇａｔｉｏｎ），解决了Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹样品需求量大这
个难题，此方法可以直接标记和定最测定，已经成功地从纳克到微克水平不等的总ＲＮＡ中测定了各种不同的ｓＲＮＡ。
２．２实时定量ＰＣＲ
目前，许多研究者将实时定量ＰＣＲ用于定量检测ｓＲＮＡ，与Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹相比，ＰＣＲ方法可以高度灵敏地检测出低丰度表达的靶分子，并适于高通量筛选。简要过程如下：首先，将纯化的小分子量ＲＮＡ与特异的ｓＲＮＡ引物混合，经变性、复性过程使引物与模板配对；然后加入包含逆转录酶、底物、ＤＴＩ＇及ＲＮＡ酶抑制剂的混合物，逆转录生成ｃＤＮＡ；再以ｃＤＮＡ为模板，进行实时定
量ＰＣＲ刚。
３原核生物ｓＲＮＡ调控机制的研究
功能分析表明ｓＲＮＡ是细菌调控研究中一直被忽略的一环。最新认识到的ｓＲＮＡ的生理功能已经部分填补了我们对细菌离子动态平衡、糖代谢和生长依赖性外膜蛋白表达调控知识的空白。传统理论认为ＲＮＡ分子是把遗传信息从基因带到翻译系统的调节者，现在发现的ｓＲＮＡ在细菌中所起的作用更为广泛，它们涉及到的功能包括从结构调节到催化作用。影响各种各样的加工过程，如质粒复制、噬菌体发育、细菌毒性、压力反应、发育控制、ＲＮＡ剪切和修饰、ｍＲＮＡ稳定性及蛋白质降解等。ｓＲＮＡ发挥调控功能的机制主要分为以下３种。
３．１
原核生物ｓＲＮＡ可以与目标ｍＲＮＡ结合进行表达调控［２１１通常。细菌ｓＲＮＡ与目标ｍＲＮＡ的结合是通过不完全序列
互补。多数情况下细菌ｓＲＮＡ结合在ｍＲＮＡ的５’端，抑制翻译起始；也有些ｓＲＮＡ结合在ｍＲＮＡ的３’端，起到稳定ｍＲＮＡ的作用。ｓＲＮＡ还可以结合在ｍＲＮＡ的茎环结构上，使茎环结构打开，从而起到促进翻译的作用。调控通常还伴随着核酸酶介导的ｍＲＮＡ裂解，比如当Ｒ丫ｈＢ结合到ｓｏｄＢ基因的ｍＲＮＡ上时，
ＲＮａｓｅ
Ｅ就裂解它；当ＩｓｔＲ—ｌ结合到ｔｉｓＡＢ基因的ｍＲＮＡ上时，
ＲＮａｓｅⅢ就会裂解该ｍＲＮＡ分子。
３．２原核生物ｓＲＮＡ分子能够与细胞内蛋白质相互作用而调节
它们的活性阎
这类ｓＲＮＡ主要通过与蛋白质相互作用来影响这些蛋白质
的生物学功能。例如６ＳＲＮＡ在原核生物中高度保守，并且在稳
定期逐渐积聚，它与矿ｏ－ＲＮＡ聚合酶相互作用并改变它对启动子识别的特异性。ＣｓｒＢＲＮＡ和ＣｓｒＣＲＮＡ能够与全局转录后调控因子ＣｓｒＡ蛋白相互作用形成一个调控反应回路，在这个回路中，这２个ＲＮＡ分子作为ＣｓｒＡ蛋白的拮抗物，严紧地调控着该
蛋白的活性。
３．３
专门行使持家功能的ｓＲＮＡ
李娜等：原核生物中小ＲＮＡ的功能及研究进展
Ｍ１
ＲＮＡ具有酶催化活性并形成ＲＮａｓｅＰ的催化亚单位，
该酶是ｔＲＮＡ５’端成熟所必需的酶。第２个持家ｓＲＮＡ是转移信使ＲＮＡ（ｔｒａｎｓｆｅｒｍｅｓｓｅｎｇｅｒＲＮＡ，ｔｍＲＮＡ，或ＳｓｒＡ），这类ＲＮＡ具
有独特的特征，包含一个模仿ｔＲＮＡ的结构域和一个编码短肽标签的结构域。当核糖体在一个损伤的ｍＲＮＡ分子上延迟时，新生的肽链被转移到ｔｍＲＮＡ上，以ｔｍＲＮＡ分子中的ｍＲＮＡ片段为模板继续进行翻译（反式翻译）。这种反式翻译具有２种功能：使阻滞的核糖体解放出来，以及标记这个蛋白以便被特定的水解酶识别阿。第３个持家ｓＲＮＡ是４．５ＳＲＮＡ，它是核糖核蛋白（ｒｉ—ｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＮＰ）复合物的一部分，该复合物对蛋白分泌具有必不可少的功能。在几乎所有目前完成测序的细菌基因组中，这３种持家ｓＲＮＡ的基因编码序列都已经得到鉴定。
４
ｓＲＮＡ的功能研究
对未知功能的ｓＲＮＡ功能线索的获得，主要依赖于在特定细
胞或动物模型内外源性抑制或表达相应的ｓＲＮＡ基因，再通过报告基因系统验证后检测特定细胞或动物模型发育过程中的生化或分子变化来实现，并同时利用报告基因系统对ｓＲＮＡ的靶基因进行验证。４．１靶标预测
研究发现，大多己知功能的ｓＲＮＡ都能特异性地与ｍＲＮＡ或蛋白结合，调节基因表达，因此预测ｓＲＮＡ特异性的靶标在揭
示研究ｓＲＮＡ的调控基因表达功能中起到重要的作用。但是与
ｓＲＮＡ基因预测相比，靶基因的预测具有更大的难度。目前，不同
研究小组已开发多个ｓＲＮＡ靶基因预测软件，Ｔｊａｄｅｎ等Ｉ蝴开发
了一个ＴａｒｇｅｔＲＮＡ软件，通过动态规划算法（ｄｙｎａｍｉｃ
ｐｍｇｒａｍ—
ｍｉｎｇ
ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）在基因组中寻找与特定ｓＲＮＡ可能配对结合的
ｍＲＮＡ，已经证实ＴａｒｇｅｔＲＮＡ软件能够有效地预测细菌ｓＲＮＡ的靶基因。
４．２
ｓＲＮＡ抑制
对ｓＲＮＡ功能的深入探索，仍然主要依赖于在特定细胞或组织中外源性抑制或过表达目的ｓＲＮＡ后，检测其引起的相关生理学或病理学变化。目前，主要有２种方法可以阻断ｓＲＮＡ的作用：一是敲除ｓＲＮＡ基因或其在靶基因上的结合位点，二是ｓＲＮＡ的序列特异性抑制。我们课题组应用入一Ｒｅｄ同源莺组系统，成功构建了几个痢疾杆菌的ｓＲＮＡ缺失突变体，以此来研究未知功能的ｓＲＮＡ在痢疾杆菌中的调控功能。因为Ｈｆｑ通常是ｓＲＮＡ的稳定
及其与靶ｍＲＮＡ相互作用所需要的，因此怕基因缺失在许多
细菌中都表现出复杂的表型，从不能应对多样性的压力到致病菌株毒力减弱或降低。许多研究小组都通过敲除Ｈｆｑ的ｓＲＮＡ结合位点来研究与其结合发挥调控功能的ｓＲＮＡ。有研究者使用２＂－氧甲基化修饰的反义寡核苷酸抑制剂阻断ｓＲＮＡ的作用闭。这种抑制剂是体外化学合成的可与特异性ｓＲＮＡ完全互补的反义ＲＮＡ，其核糖２７一氧的甲基化修饰能保证反义ＲＮＡ分子在体内的稳定性，在借助转染试剂进入目的细胞后，能快速并稳定地与内源性成熟ｓＲＮＡ分子互补结合，从而阻止了内源性ｓＲＮＡ分
子与靶基因配对。
４．３小ＲＮＡ的过表达
与常规ｍＲＮＡ的功能研究相似，对ｓＲＮＡ的过表达研究也是探讨ｓＲＮＡ功能的一种主要方式。可以通过构建ｓＲＮＡ表达载
万方数据
７０１
体、转入目的细胞等２种方式来实现。Ｖｏｇｅｌ等唧构建ｓＲＮＡ表达载体并融合绿色荧光蛋白，研究了大肠杆菌中ｓＲＮＡ在不同条件下和不同生长时期对靶ｍＲＮＡ的抑制或激活，这些表达载体可进一步用于研究其他细菌ｓＲＮＡ的功能。
５结语
作为一类原核生物中新发现的调控子，ｓＲＮＡ已引起研究者极大的兴趣。随着研究技术和方法的日新月异，原核生物中越来越多灼ｓＲＮＡ被发现并验证。但是，研究ｓＲＮＡ的方法仍有不足，需要改善，如需要减少ｓＲＮＡ预测中的假阳性和ｓＲＮＡ验证中的假阴性等。另一方面，ｓＲＮＡ作为一种新的调控子，在原核生物的物质代谢、环境适应、群体感应和细菌毒力等方面发挥了重要的调节作用。尽管现在细菌中发现的ｓＲＮＡ在迅速增加，但其大部分功能还未知，从目前积累的知识分析，原核生物可能借助于这
些ｓＲＮＡ对它们的生理系统进行精细调控，以便适应迅速变化的环境。因此，深入认识这些ｓＲＮＡ可能开辟一个新的研究领域，因为它们可能代表着一个新层次上的基因表达调控方式。
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３３（２０）：ｅ１７９．
［２１】ＳｔｏｒｚＧ，ＯｐｄｙｋｅＪＡ，ＺｈａｎｇＡ．ＣｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇｍＲＮＡｓｔａｂｉｌｉｔｙａｎｄ
ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｗｉｔｈｓｍａｌｌ，ｎｏｎｃｏｄｉｎｇＲＮＡｓ叨．ＣｕｒｒＯｐｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，
２００４．７：１４０－１４４．
【１３】ＳｅｌｉｎｇｅｒＤＷ，ＣｈｅｕｎｇＫＪ，ＭｅｉＲ，ｅｔａ１．ＲＮＡ
ｕｓｉｎｇ
ａ
ａｎａｌｙｓｉｓ
３０ｂａｓｅ
ｐａｉｒ
ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｅｏｌｉ
ａｒｒａｙ叨．
ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０００，１８：１２６２—１２６８．
【１４１ＷａｓｓａｒｍａｎＫＭ，ＲｅｐｏｉｌａＦ＇ＲｏｓｅｎｏｗＣ，ｅｔａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ
ｎｏｖｅｌｓｍａｌｌ
ＲＮＡｓ
ｕｓｉｎｇ
【２２】ＢａｒｒｉｃｋＪＥ，ＳｕｄａｒｓａｎＮ，ＲｕｚｚｏＷＡ．６ＳＲＮＡ
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆ
ｉｓａ
ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ
ａｎ
ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｎｎｏｍｉｃｓ
ａｎｄ
ｍｉｃｒｏａｒｔａｙｓ叨．
ｅａｂａｃｔｅｒｉａｌＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｔｈａｔ
ｒｅｓｅｍｂｌｅｓ
ｏｐｅｎ
ＧｅｎｅｓＤｃｖ，２００１，１５：１６３７－１６５１．
ｐｒｏｍｏｔｅｒ［Ｊ】．ＲＮＡ，２００５，１１：７７４－７８４．
【２３】ＫｅｉｌｅｒＫＣ，ＷａｌｌｅｒＰＲＳａｎｅｒＲＴ．Ｒｏｌｅｏｆ
ｓｙｓｔｅｍｓａｇｅｒ
ｉｎ
ａ
【１５】Ｈｕ
Ｚ
Ｌ’ＺｈａｎｇＡＸ，ＳｔｏｒｚＧ，ｅｔａ１．Ａｎａｎｔｉｂｅｄｙ－ｂａｓｅｄｍｉｃｒｏａｃｒａｙ
ｆｏｒｓｍａｌｌＲＮＡ
ｐｅｐｔｉｄｅｔａｇｇｉｎｇ
ｄａｍａｇｅｄ
ｍｅｓ－
ａｓｓａｙ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ叨．Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓ，２００６，３４（７）：
ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｆｒｏｍ
ｅ５２．
ＲＮＡ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９６，２７１：９９０－９９３．
【１６］ＡｒｇｍｎａｎＬ’ＨｅｒｓｈｂｅｒｇＲ＇ＶｏｇｅｌＪ，ｅｔａ１．ＮｏｖｅｌｓｍａｌｌＲＮＡ－ｅｎｃｅｄ・
ｉｎｇ
ｇｅｎｅｓ
［２４】ＴｊａｄｅｎＢ，ＧｏｏｄｗｉｎＳＳ，ＯｐｄｙｋｅＪＡ，ｅｔａ１．Ｔａｒｇｅｔｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｆｏｒ
ｓｍａｌｌ，ｎｏｎｃｅｄｉｎｇＲＮＡ暑ｉｎｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ，２００６，３４（９）：２７９１－２８０２．
ｉｎｔｈｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｅｒｅｇｉｏｎｓｏｆＥｓｃｈｅｆｉｃｈｉａｃｏｌｉｍ．ＣｕｒｔＢｉ－
ｏｌ，２００Ｉ，ｌＩ：９４１—９５１．
【１７】ＬｏｒｅｎｚＣ，ｙｏｎＰｅｌｃｈｒｚｉｍＦ，ＳｅｈｒｏｅｄｅｒＲ．Ｇｅｎｏｍｉｃ
ｌｕｔｉｏｎｏｆ
ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
ｅｖｏ－
【２５】ＴｊａｄｅｎＢ．ＴａｒｇｅｔＲＮＡ：ａｔｏｏｌｆｏｒｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ
ａｃｔｉｏｎ
ｔａｒｇｅｔｓ
ｏｆｓｍａｌｌＲＮＡ
ｌｉｇａｎｄｓｂｙｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ（ＧｅｎｏｍｉｃＳＥＬＥＸ）ｆｏｒ
ｅｘ－
ｉｎ
ｂａｃｔｅｒｉａ［ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ，２００８．３６（ＷｅｂＳｅｒｖｅｒｉｓ－
ｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎ－ｏｍｄｉｎｇＲＮＡｓｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｏｆｔｈｅｉｒｓｕｅ）：Ｗ１０９－Ｗ１１３．
ｆ２６】ＨｕｔｖａｇｎｅｒＧ，ＳｉｍａｒｄＭＪ，ＭｅｌｌｏＣＣ，ｅｔａ１．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ
ｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌＲＮＡ
ｉｎ—
ｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．ＮａｔＰｒｏｔｏｃ，２００６，１（５）：２２０４－２２１２．
【１８】ＷｉｎｄｂｉｃｈｌｅｒＮ，ｙｏｎＰｅｌｃｈｒｚｉｍＦ，Ｍａｙｅｒ０，ｅｔａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌ
ＲＮＡ—ｂｉｎｄｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍＥ．ｃｏｌｉ：ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｆｒｅｑｕｅｎｔｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ
ｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐ【届Ｂｉｏｌ，２００４，２（４）：ｅ９８．
ｔａｒｇｅｔ
【２７】ＵｒｂａｎＪＨ，ＶｏｇｅｌＪ．Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｃｏｎｔｒｏｌａｎｄ
Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｅｏｌｉ
ｓｍａｌｌＲＮＡｓ
ｉｎ
ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｂｙ
ｏｆＲＮＡｓｗｉｔＩＩＲＮＡ
ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ叨．ＲＮＡＢｉｏｌ，２００８，５（Ｉ）：３０－－４０．ｖｉｖｏ［Ｊ］．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ，２００７，
【１９】ＭａｒｏｎｅｙＰＡ，Ｃｈａｍｎｏｎｇｐｏｌｓ＇ＳｏｕｒｅｔＦ，ｅｔａ１．Ｄｉｒｅｃｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆ
３５（３）：１０１８—１０３７．
（上接第６８２页）
【１０】Ｈｕａｎｇｘ，Ｅ１一Ｓａｙｅｄ
ｐｈｏｔｏｔｈｅｎｎａｌ
ｔｈｅｒａｐｙ
７７：７２０４－７２１１．
Ｄｕｙｎｅ
【１６】ＨａｅｓＡＪ，ｖａｎ
Ｉ
ＲＰ．Ａ
ｎａｎｏｓｃａｌｅｏｐｔｉｃａｌｂｉｏｓｅｎｓｏｒ．ｓｅｎｓｉｔｉｖ－
ｏｎ
Ｈ，Ｑｉａｎｗ，ｅｔａ１．Ｃａｎｃｅｒｃｅｌｌ
ｉｎ
ｉｍａｇｉｎｇ
ａｎｄ
ｇｏｌｄ
ｉｔｙａｎｄｐｌａｓｍｏｎ
ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙｏｆ
ｒｅｓｏｎａｎｃｅ
ａｎａｐｐｒｏａｃｈｂａｓｅｄ
ｔｈｅｌｏｃａｌｉｚｅｄｓｕｒｆａｃｅ
ｔｈｅｎｅａｒ－ｉｎｆｒａｒｅｄ
ｒｅｇｉｏｎｂｙｕｓｉｎｇ
ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙｏｆｔｒｉａｎｇｕｌａｒｓｉｌｖｅｒｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．
ｎ∞∞Ｄｄ８叨．ＡｍＣｈｅｍＳｏｃ，２００６，１２８（６）：２１１５—２１２０．
【ｌｌ】ＵＣＺ，ＭａｌｅＫＢ，ＬｕｏｎｇＪＨＴ．ｅｔａ１．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆ
ｇｏｌｄｎａｎｏｌ∞ｄｓａｎｄｔｈｅｉｒａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｏｒ２００５。３ｈ３９２４—３９２６．
ＡｍＣｈｅｍ
Ｓｅｅ，２００２，ｉ２４：１０５９６－－１０６０４．
ｌｒａｎｓ－
【１７】ＭａｒｅＨ，ＪａｃｑｕｅｌｉｎｅＲ．Ｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄ，ａｕｓｅｆｕｌｌ姐ｒｋｅｒｆｏｒ
ｍｉｓｓｉｏｎ
ＤＮＡ叨．ＣｈｅｍＣｏｍｍｕｎ，
ａｎｄ
ｓｃａｎｎｉｎｇ
ｅｌｅｃｔｒｏｎ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］．ＨｈｉｄｔｏｃｈｅｍＣｙｔｅｃｈｅｍ，
１９７７，２５（４）：２９５—３０２．【１８１
ＬｅｅＫＳ，ＥＩ－ＳａｙｅｄＭＡ．Ｇｏｌｄａｎｄｓｉｌｖｅｒｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ｉｎ
ｓｅｎｓｉｎｇ
【１２】ＥｌｑｈａｎｉａｎＲＳｔ喇ｅｆｔＪＪ，ＭｕｃｉｃＲＣ，ｅｔａ１．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃａｌ
ｐｅｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｂａｓｅｄ
ｏｎ
ｔｈｅ
ｄｉｓｔａｎｃｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｏｐｔｉ—
ａｎｄｉｍａｇｉｎｇ：ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｍｅｔａｌ
ｔｏ
ｓｉｚｅ，ｓｈａｐｅ，ａｎｄ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ田．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７７（２２）：１０７８—
ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＰｈｙｓＣｈｅｍＢ，２００６，１１０（３９）：１９２２０－１９２２５．
Ｅｕｓｔｉｓ
１０８１．
【１９】ＪａｉｎＰＫ
Ｓ，Ｅｌ－ＳａｙｅｄＭＡ．Ｐｌａｓｍｏｎｃｏｕｐｌｉｎｇ
ｉｎ
ｎａｎｏｒｅｄ
【１３１ＰａｔｒｉｃｋＥ，ＡｎｎｅＶＨ，ＪｏｓｅｐｈＶ．Ｒａｐｉｄｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
ｆｏｒｈｕｍａｎｆｅｒｒｉｔｉｎ
ｐｏｒｔｅｒ
ａｓｓｅｍｂｌｉｅｓ：ｏｐｔｉｃａｌａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，ｄｉｓｃｒｅｔｅｄｉｐｏｌｅａｐｐｒｏｘｉｍａｔｉｏｎｓｉｍｕｌａ－
ｉｎｔｈｅｃｏｂａｓｍｉｒａｕｓｉｎｇｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄａｓ
ｔｈｅ
ｒｅ－
ｔｉｏｎ，ａｎｄｅｘｃｉｔｏｎ—ｃｏｕｐｌｉｎｇｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＰｈｙｓＣｈｅｍＢ，２００６，Ｉ１０（３７）：
１８２４３一１８２５３．
ｒｅａｇｅｎｔ［Ｊ］．ＣｌｉｎＣｈｅｍ．２０（）ｏ，４６：２０００—２００３．
ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ
【１４】ＪｅｎｎｙＡ，ＰａｕｌＮ，ＲｏｂｅｓⅣ．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅ
ｎｏａｓｚａｙｓｂｙ
ｔｕｎｉｎｇ
ｏｆｉｒａｍｕ—
ｆ２０１ＺｗｅｉｆｏｌＤＡ．ＷｅｉＡ．Ｓｕｌｆｉｄｅ－ａｒｒｅｓｔｅｄｇｒｏｗｔｈｏｆｇｏｌｄｎａｎｏｒｍａｔｅｒｉａ
啪．ＣｈｅｍＭａｔｅｒ，２００５，１７（１６）：４２５６－４２６１．【２１】ＰｒａｍｅｄＰ，ＪｏｓｅｐｈＳＴ，Ｔｈｏｍａｓ
ｉｚａｔｉｏｎｏｆＣｈｅｍ
Ａｕ
ｎａｎｏｒｏｄｓ
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ｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ｔｏｔｈｅ
ｔｉｐｐｉｎｇｐｏｉｎｔ【刀．Ａｎａｌ
Ｃｈｅｍ，２００８，８０（１５）：６００１—６００５．
【１５】ＬｅｅＳ，Ｐｅｒｅｚ－ＬｕｎａＶＨ．Ｄｅｘｔｒａｎ—ｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｈｙｂｒｉｄｍａｔｅｒｉａｌ
ｆｏｒｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ
Ｇ．Ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ－
ｔｈｒｏｕｇｈｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ
ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ们．
Ａｍ
ａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００５，
Ｓｅｏ，２００７，３０，１２９（２１）：６７１２—６７１３．
万方数据
Ｌ生Ｅｎ盏ＲＳＩＮ技ＢＩＯＴ术ＥＣＨＮ通ＯＬＯＧ讯Ｙ…Ｖ０１．２…０
ＴｒＥ
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．
Ｎ—ｏ．５一Ｓ—ｅｐ．，２…００９一
．
．，
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９—－０００２．２００９．０５．０２９
综述
原核生物中小ＲＮＡ的功能及研究进展
李娜１，２朱力１，王恒棵１
１．军事医学科学院生物工程研究所，北京１０００７１；２．海军总医院检验科，北京１０００３７
［摘要】在原核生物基因组中，除了ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ和ｍＲＮＡ这３种我们很熟悉的ＲＮＡ以外，目前已经知道还含有许多编码
非常规调控的ＲＮＡ。这些ＲＮＡ的长度为５０～４００核苷酸，通常由原核生物的基因间区编码，但并不翻译成蛋白质，因此被称
为非编码小ＲＮＡ（ｓＲＮＡ），简称小ＲＮＡ或非编码ＲＮＡ。近年来，随着生物信息学和分子生物学技术的不断发展，在原核生物体内陆续发现了上百种ｓＲＮＡ分子，这些ｓＲＮＡ分子具有多样的生物学功能，作为一类新发现的基因表达调控子已经引起
了高度的重视。
［关键词】小ＲＮＡ；原核生物；基因表达调控
［文献标识码】Ａ
【中图分类号】Ｑ７５［文章编号】１００９－０００２（２００９）０５－０６９９—０４
ＴｈｅＦｕｎｃｔｉｏｎａｎｄＡｄｖａｎｃｅｏｆＳｍａｌｌＲＮＡｉｎＰｒｏｋａｒｙｏｔｅ
ＬＩ
Ｎａｌ’ｊＺＨＵｌｉｌ，ＷＡＮＧ
Ｉｎｓｉｔｕｔｃ
ｏｆ
Ｈｅ咿￡ｉ岔耐
１０００７１；
１．ＢｅｉｊｉｎｇＢｉｏｔｅｅｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ
２．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮａｖｙＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ
１０００３７；Ｃｈｉｎａ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ
ｓｍａｌｌ
ＲＮＡ（ｓＲＮＡ）ｔｈａｔ
ａ
ａｒｅｎｏｔｒｉｂｏｓｏｍａｌｔｒａｎｓｆｅｒ
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ｍｅｓｓｅｎｇｅｒＲＮＡｓ
ｔｈａｔｉｎ
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ｉｎｉｔｉａｌｌｙｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ
ｉｎ
ｔｈｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｅｒｅｇｉｏｎｓ．ＳｍａｌｌＲＮＡｉｓｙｅａｒｓ，ｍａｎｙ
ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ
ｋｉｎｄｏｆｎｅｗｌｙｄｉｓｃｏｖｅｒｅｄ５０－４００
ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ
ｏｎ
ＲＮＡｓ
ｅｎｃｏｄｅｓｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｉｎ
ａｎｄ
ｔｈｅｓｅｓＲＮＡ
ｒｅｃｅｎｔ
ｈａｖｅｈｕｎｄｒｅｄｓｏｆｓＲＮＡｃａｎｄｉｄａｔｅｓｉｓ
ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅ
ｈａｖｅ
ｍａｎｙｋｉｎｄｓｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓ．Ｔｈｕｓｒｅｓｅａｒｃｈ
ｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｓＲＮＡ
ｖｅｒｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｎｏｗａｄａｙｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｓｍａｌｌＲＮＡ；ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅ；ｇｅｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
原核生物非编码小ＲＮＡ（ｎｏｎ—ｃｏｄｉｎｇ
ｓｍａｌｌ
ＲＮＡ）是一类长记和染色、功能基因筛选、与蛋白质共纯化、鸟枪克隆法、微阵列检测、生物信息学搜寻、基因组ＳＥＬＥＸ等【１１，每种搜寻ｓＲＮＡ的方法均有其优缺点。
１．１
度为５０－４００核苷酸（ｎｔ）、不能翻译成蛋白质的ＲＮＡ，简称小
ＲＮＡ（ｓｍａｌｌＲＮＡ，ｓＲＮＡ）或非编码ＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）Ｉｌｌ。Ｇｒｉｆ！Ｉｉｎ等在
１９７１年首先在大肠杆菌中发现了ｓＲＮＡ分子，但这些ＲＮＡ分子的编码基因以及它们的功能都不清楚［２１。原核生物８ＲＮＡ长期以来被人们忽视，直到２０世纪８０年代早期，才知道这些ｓＲＮＡ分子是反式编码反义ＲＮＡ（ｔｒａｎｓ—ｅｎｃｏｄｅｄ
ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
ＲＮＡ标记和染色网
ＲＮＡ标记和染色，就是对细胞总提取物进行同位素标记或化学染色标记、凝胶分离、切胶回收所需条带，最后利用核酸酶酶切ＲＮＡ进行分析。这种方法是最早用于寻找ｓＲＮＡ基因的方法，通过这种方法可以发现细胞内丰富的ｓＲＮＡ，但是不能区分ｓＲＮＡ和ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ，而且实验中需要操作放射性标记的细菌培养基。
１．２
ＲＮＡ）。近年来
人们发现ｓＲＮＡ在原核生物中广泛存在，比如在大肠杆菌中被确认的非编码ＲＮＡ的数量已经超过了７０种翻。除此之外，大肠杆菌中还有不少疑似非编码ＲＮＡ有待确认，随着研究的深入，估计大肠杆菌的非编码ＲＮＡ数量还会增加。
通常认为原核生物中基因表达的调控主要发生在转录水平上，因为原核生物的转录和翻译是偶联的，与转录后调节相比，基因表达在转录水平上的调节更为有效。而大多数ｓＲＮＡ是通过与ｍＲＮＡ碱基配对，在转录后水平调控靶基因抑制或活化，如ｓＲＮＡ与靶ＲＮＡ结合，导致靶ＲＮＡ的降解；ｓＲＮＡ负性调节靶ＲＮＡ的翻译；ｓＲＮＡ激活靶ｍＲＮＡ的翻译等。还有一些ｓＲＮＡ具有特定的调控蛋白的功能ｐｔ－Ｓｌ。ｓＲＮＡ在细菌的物质代谢、环境适
功能性遗传筛选（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｔｉｃｓｃｒｅｅｎｓ）闱
功能性遗传筛选的方法是通过建立多拷贝质粒文库识别ｓＲＮＡ，这种方法可以直接鉴定ｓＲＮＡ的功能，能够利用现已建立的遗传学方法。然而，这种筛选很少是专门针对ｓＲＮＡ基因的，为了丰富ｓＲＮＡ基因文库，最好克隆较小的ＤＮＡ片段，即分离ＤＮＡ之后用限制性酶进行切割。大肠杆菌的ＭｉｃＦ和ＤｓｒＡ
ＲＮＡ
就是通过功能性遗传筛选发现的嘲。但是，当研究的ｓＲＮＡ基因是必需的或者当过量表达有毒性时不能使用这种方法。另外，有些ｓＲＮＡ只在特定压力条件下发生自调控、正调控或转录活化抑制，因而这种方法可能无法发现在特殊环境下起作用的ｓＲＮＡ。
应、群体感应和细菌毒力【咩方面发挥了重要的调节作用。
１原核生物ｓＲＮＡ的发现
［收稿日期】２００９－０３—１８［作者简介］李娜（一），女，硕士研究生
用于在原核生物中寻找ｓＲＮＡ及其基因的方法包括ＲＮＡ标
ｉ通信作者ｊ王恒操，（Ｅ—ｍａｉｌ）ｗａｎｇｈｌ＠ｎｉｃ．ｂｉｌ９７９
ｍ．∞．ｃｎ
万方数据
７００
此外，这种方法需要非常繁重的筛选工作。
１．３
与ＢＲＮＡ结合蛋白共纯化【１０ｌ
很多研究表明ｓＲＮＡ是通过与蛋白结合来发挥转录后水平调控功能的，如Ｈｆｑ就是一种ｓＲＮＡ结合蛋白，许多ｓＲＮＡ通过与Ｈｆｑ蛋白结合来调控靶ｍＲＮＡ的降解和翻译。因此，我们可以用靶蛋白及其抗体将ｓＲＮＡ免疫共沉淀下来。Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎ等【ｌｌ】利用含有抗Ｈｆｑ抗体的微阵列，将单核细胞增多性利斯特菌中的ｓＲＮＡ免疫共沉淀出来，然后测序获得３个ｓＲＮＡ。这种方法的优点是能够指示出ｓＲＮＡ与蛋白质的相互作用和活性形式，但是在整个纯化过程中都要求ｓＲＮＡ与蛋白质牢固结合，共纯化蛋白要有高度特异性抗体。
１．４鸟枪克隆法（也称为ＲＮＡ组学）
ＲＮＡ组学（ＲＮｏｍｉｃｓ）方法是分离细菌ｓＲＮＡ建立ｃＤＮＡ库，通过文库筛选和序列测定而获得ｓＲＮＡ的方法。Ｖｏｇｅｌ等１１２１在大肠杆菌中利用ＲＮＡ组学技术，以ＲＮＡ长度为５０－５００ｎｔ为目标，筛选出１１个ｓＲＮＡ，其中包括已有报道验证的３个ｓＲＮＡ。这种方法能够检测在一定时间点上表达的、在一定长度范围内的所有的ｓＲＮＡ，不需要预先知道ｓＲＮＡ的特征，能够自动化，能够检测种特异性和不规范的ｓＲＮＡ，能够检测到初级转录本和处理后的ｓＲＮＡ。但是这种方法涉及到对大量克隆的测序，因而花费非常昂贵，也有繁重的工作量；此外，由于ｓＲＮＡ结构的不同，在ｃＤＮＡ合成时可能造成文库的偏性。１．５基因芯片技术（微阵列法）【廿】
基因芯片技术（ＤＮＡ微阵列）是在整个基因组范围内同时测
定基因表达的有力工具。Ｗａｓｓａｒｍａｎ等Ｉ噘合使用基因芯片技术
和比较基因组学，分析筛选了大肠杆菌中大量的ｓＲＮＡ。这种方法能够平行地得到许多ｓＲＮＡ基因的转录特性，快速检测到条件依赖性ｓＲＮＡ表达模式，能够检测种特异性ｓＲＮＡ转录。但这种方法要求具备包括所有基因间区序列的微阵列，费用昂贵，且通常会产生与Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交信号不一致的ｓＲＮＡ检测结果。目前发展了一种新的应对方法，利用ＤＮＡ—ＲＮＡ杂交体的特异性抗体可以解决标记问题，提高灵敏度ｆｌｓＪ。１．６生物信息学方法【坷
持续增长的细菌基因组序列及越来越多的ｓＲＮＡ被发现，为在全基因组内进行ｓＲＮＡ的计算机预测奠定了基础。ｓＲＮＡ一般来源于５０－２５０ｎｔ的带有苇环结构的前体转录本，通常在亲缘相近的种属基因组中高度保守，而且ｓＲＮＡ前体都具有典型特征，因此町以通过生物信息学方法预测新的ｓＲＮＡ。生物信息方法预测ｓＲＮＡ的优点是能够迅速得到许多可能的ｓＲＮＡ候选基因列表，能够与近缘细菌的基因组进行进化比较。但这种方法需要预先知道ｓＲＮＡ的特征，并需要对许多候选位点进行验证。１．７基因组ＳＥＬＥＸ
指数式富集的配体系统进化（ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｌｉｇａｎｄｓ
ｂｙ
ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ
ｅｎｆｉｃｈｍｅｍ，ＳＥＬＥＸ）是２０世纪９０年代发展起来
的一项组合化学技术。利用该技术可以从随机单链核酸序列库中筛选到特异性与靶物质高度亲和的核酸配体，具有靶分子范围广、筛选出的配体亲和力和特异性高等特点。Ｌｏｒｅｎｚ等【１７）用基于ｓＲＮＡ与Ｈｆｑ结合的ＳＥＬＥＸ方法筛选与Ｉ－Ｉｆｑ结合的ｓＲＮＡ。Ｗｉｎｄｂｉｃｈｌｅｒｔｌ８】通过亲和层析纯化并验证得到了ｓＲＮＡ结合因子，如ＲＮＡ聚合酶Ｂ亚单位、Ｈｆｑ和核糖体蛋白Ｓ１及其他一些结合因子，并且通过基因组ＳＥＬＥＸ获得了大量与它们结合的ｓＲＮＡ。
万方数据
生ＬＥｎ，热Ｉ带ＢＩＯＴ术ＥＣＨＮ通ＯＬＯＧ讯Ｙ…Ｖ０１．２０一一Ｎｏ．５
ＴｒＥＲＳ
ＩＮ
．
・）
Ｓ—ｅｐ．，２００９
．，
２原核生物ｓＲＮＡ的验证
２．１
Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹
Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹是利用带标记的ＤＮＡ探针与ＲＮＡ进行分子
杂交来检测特异性ＲＮＡ的技术。目前多数研究者将Ｎｏｎｈｅｍ印迹作为鉴定ｓＲＮＡ的金标准。但Ｎｏｌ－ｔｈｅｍ印迹的最大缺点是对样品的需求较多，需要微克级样品才能避免假阴性，有时样品量达到４０斗ｇ才会出现明显的杂交信号。然而细菌的ｓＲＮＡ样品往往较难获得，从而导致易出现假阴性结果。Ｐａｔｒｉｃｉａ等【１９１使用夹板
连接法（ｓｐｌｉｎｔｅｄｌｉｇａｔｉｏｎ），解决了Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹样品需求量大这
个难题，此方法可以直接标记和定最测定，已经成功地从纳克到微克水平不等的总ＲＮＡ中测定了各种不同的ｓＲＮＡ。
２．２实时定量ＰＣＲ
目前，许多研究者将实时定量ＰＣＲ用于定量检测ｓＲＮＡ，与Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹相比，ＰＣＲ方法可以高度灵敏地检测出低丰度表达的靶分子，并适于高通量筛选。简要过程如下：首先，将纯化的小分子量ＲＮＡ与特异的ｓＲＮＡ引物混合，经变性、复性过程使引物与模板配对；然后加入包含逆转录酶、底物、ＤＴＩ＇及ＲＮＡ酶抑制剂的混合物，逆转录生成ｃＤＮＡ；再以ｃＤＮＡ为模板，进行实时定
量ＰＣＲ刚。
３原核生物ｓＲＮＡ调控机制的研究
功能分析表明ｓＲＮＡ是细菌调控研究中一直被忽略的一环。最新认识到的ｓＲＮＡ的生理功能已经部分填补了我们对细菌离子动态平衡、糖代谢和生长依赖性外膜蛋白表达调控知识的空白。传统理论认为ＲＮＡ分子是把遗传信息从基因带到翻译系统的调节者，现在发现的ｓＲＮＡ在细菌中所起的作用更为广泛，它们涉及到的功能包括从结构调节到催化作用。影响各种各样的加工过程，如质粒复制、噬菌体发育、细菌毒性、压力反应、发育控制、ＲＮＡ剪切和修饰、ｍＲＮＡ稳定性及蛋白质降解等。ｓＲＮＡ发挥调控功能的机制主要分为以下３种。
３．１
原核生物ｓＲＮＡ可以与目标ｍＲＮＡ结合进行表达调控［２１１通常。细菌ｓＲＮＡ与目标ｍＲＮＡ的结合是通过不完全序列
互补。多数情况下细菌ｓＲＮＡ结合在ｍＲＮＡ的５’端，抑制翻译起始；也有些ｓＲＮＡ结合在ｍＲＮＡ的３’端，起到稳定ｍＲＮＡ的作用。ｓＲＮＡ还可以结合在ｍＲＮＡ的茎环结构上，使茎环结构打开，从而起到促进翻译的作用。调控通常还伴随着核酸酶介导的ｍＲＮＡ裂解，比如当Ｒ丫ｈＢ结合到ｓｏｄＢ基因的ｍＲＮＡ上时，
ＲＮａｓｅ
Ｅ就裂解它；当ＩｓｔＲ—ｌ结合到ｔｉｓＡＢ基因的ｍＲＮＡ上时，
ＲＮａｓｅⅢ就会裂解该ｍＲＮＡ分子。
３．２原核生物ｓＲＮＡ分子能够与细胞内蛋白质相互作用而调节
它们的活性阎
这类ｓＲＮＡ主要通过与蛋白质相互作用来影响这些蛋白质
的生物学功能。例如６ＳＲＮＡ在原核生物中高度保守，并且在稳
定期逐渐积聚，它与矿ｏ－ＲＮＡ聚合酶相互作用并改变它对启动子识别的特异性。ＣｓｒＢＲＮＡ和ＣｓｒＣＲＮＡ能够与全局转录后调控因子ＣｓｒＡ蛋白相互作用形成一个调控反应回路，在这个回路中，这２个ＲＮＡ分子作为ＣｓｒＡ蛋白的拮抗物，严紧地调控着该
蛋白的活性。
３．３
专门行使持家功能的ｓＲＮＡ
李娜等：原核生物中小ＲＮＡ的功能及研究进展
Ｍ１
ＲＮＡ具有酶催化活性并形成ＲＮａｓｅＰ的催化亚单位，
该酶是ｔＲＮＡ５’端成熟所必需的酶。第２个持家ｓＲＮＡ是转移信使ＲＮＡ（ｔｒａｎｓｆｅｒｍｅｓｓｅｎｇｅｒＲＮＡ，ｔｍＲＮＡ，或ＳｓｒＡ），这类ＲＮＡ具
有独特的特征，包含一个模仿ｔＲＮＡ的结构域和一个编码短肽标签的结构域。当核糖体在一个损伤的ｍＲＮＡ分子上延迟时，新生的肽链被转移到ｔｍＲＮＡ上，以ｔｍＲＮＡ分子中的ｍＲＮＡ片段为模板继续进行翻译（反式翻译）。这种反式翻译具有２种功能：使阻滞的核糖体解放出来，以及标记这个蛋白以便被特定的水解酶识别阿。第３个持家ｓＲＮＡ是４．５ＳＲＮＡ，它是核糖核蛋白（ｒｉ—ｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＮＰ）复合物的一部分，该复合物对蛋白分泌具有必不可少的功能。在几乎所有目前完成测序的细菌基因组中，这３种持家ｓＲＮＡ的基因编码序列都已经得到鉴定。
４
ｓＲＮＡ的功能研究
对未知功能的ｓＲＮＡ功能线索的获得，主要依赖于在特定细
胞或动物模型内外源性抑制或表达相应的ｓＲＮＡ基因，再通过报告基因系统验证后检测特定细胞或动物模型发育过程中的生化或分子变化来实现，并同时利用报告基因系统对ｓＲＮＡ的靶基因进行验证。４．１靶标预测
研究发现，大多己知功能的ｓＲＮＡ都能特异性地与ｍＲＮＡ或蛋白结合，调节基因表达，因此预测ｓＲＮＡ特异性的靶标在揭
示研究ｓＲＮＡ的调控基因表达功能中起到重要的作用。但是与
ｓＲＮＡ基因预测相比，靶基因的预测具有更大的难度。目前，不同
研究小组已开发多个ｓＲＮＡ靶基因预测软件，Ｔｊａｄｅｎ等Ｉ蝴开发
了一个ＴａｒｇｅｔＲＮＡ软件，通过动态规划算法（ｄｙｎａｍｉｃ
ｐｍｇｒａｍ—
ｍｉｎｇ
ａｌｇｏｒｉｔｈｍ）在基因组中寻找与特定ｓＲＮＡ可能配对结合的
ｍＲＮＡ，已经证实ＴａｒｇｅｔＲＮＡ软件能够有效地预测细菌ｓＲＮＡ的靶基因。
４．２
ｓＲＮＡ抑制
对ｓＲＮＡ功能的深入探索，仍然主要依赖于在特定细胞或组织中外源性抑制或过表达目的ｓＲＮＡ后，检测其引起的相关生理学或病理学变化。目前，主要有２种方法可以阻断ｓＲＮＡ的作用：一是敲除ｓＲＮＡ基因或其在靶基因上的结合位点，二是ｓＲＮＡ的序列特异性抑制。我们课题组应用入一Ｒｅｄ同源莺组系统，成功构建了几个痢疾杆菌的ｓＲＮＡ缺失突变体，以此来研究未知功能的ｓＲＮＡ在痢疾杆菌中的调控功能。因为Ｈｆｑ通常是ｓＲＮＡ的稳定
及其与靶ｍＲＮＡ相互作用所需要的，因此怕基因缺失在许多
细菌中都表现出复杂的表型，从不能应对多样性的压力到致病菌株毒力减弱或降低。许多研究小组都通过敲除Ｈｆｑ的ｓＲＮＡ结合位点来研究与其结合发挥调控功能的ｓＲＮＡ。有研究者使用２＂－氧甲基化修饰的反义寡核苷酸抑制剂阻断ｓＲＮＡ的作用闭。这种抑制剂是体外化学合成的可与特异性ｓＲＮＡ完全互补的反义ＲＮＡ，其核糖２７一氧的甲基化修饰能保证反义ＲＮＡ分子在体内的稳定性，在借助转染试剂进入目的细胞后，能快速并稳定地与内源性成熟ｓＲＮＡ分子互补结合，从而阻止了内源性ｓＲＮＡ分
子与靶基因配对。
４．３小ＲＮＡ的过表达
与常规ｍＲＮＡ的功能研究相似，对ｓＲＮＡ的过表达研究也是探讨ｓＲＮＡ功能的一种主要方式。可以通过构建ｓＲＮＡ表达载
万方数据
７０１
体、转入目的细胞等２种方式来实现。Ｖｏｇｅｌ等唧构建ｓＲＮＡ表达载体并融合绿色荧光蛋白，研究了大肠杆菌中ｓＲＮＡ在不同条件下和不同生长时期对靶ｍＲＮＡ的抑制或激活，这些表达载体可进一步用于研究其他细菌ｓＲＮＡ的功能。
５结语
作为一类原核生物中新发现的调控子，ｓＲＮＡ已引起研究者极大的兴趣。随着研究技术和方法的日新月异，原核生物中越来越多灼ｓＲＮＡ被发现并验证。但是，研究ｓＲＮＡ的方法仍有不足，需要改善，如需要减少ｓＲＮＡ预测中的假阳性和ｓＲＮＡ验证中的假阴性等。另一方面，ｓＲＮＡ作为一种新的调控子，在原核生物的物质代谢、环境适应、群体感应和细菌毒力等方面发挥了重要的调节作用。尽管现在细菌中发现的ｓＲＮＡ在迅速增加，但其大部分功能还未知，从目前积累的知识分析，原核生物可能借助于这
些ｓＲＮＡ对它们的生理系统进行精细调控，以便适应迅速变化的环境。因此，深入认识这些ｓＲＮＡ可能开辟一个新的研究领域，因为它们可能代表着一个新层次上的基因表达调控方式。
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ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆ
ｔａｒｇｅｔ
ｍＲＮＡ
ｉｎ
ｄｌｅａｃｔｉｏｎｏｆａｓｍａｌｌＲＮＡ：ｍｅｃｈａ－
ｎｉｓｍ
ｏｆｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆ＃ｕｃｏ∞ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ
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Ｅｓ－
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Ｍ
Ｙ，Ｉｎｏｕｙｅ
Ｍ．Ａ
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ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ
ｇｅｎｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ
ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ
ｂｙ
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ＲＮＡ
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ｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌｓｌｎ／ｌｌｌ
ｎｏｎ—ｃｏｄｉｎｇ
ＲＮＡｓ：ｅＸ－
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Ｏｐｉｎ
ＭｉｃｒｏｂｉｏＬ２００７，１０：２５７—２６１．
【１０１“ｕ
Ｍ
Ｙ，Ｇｕｉ
Ｇ，Ｗｅｉ
Ｂ，ｅｔａ１．ＴｈｅＲＮＡｍｏｌｅｃｕｌｅＣｓｒＢｂｉｎｄｓｔｏｔｈｅｇｌｏｂａｌｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ
ｐｒｏｔｅｉｎＣｓｒＡ
ａｎｄ
ａｎｔａｇｏｎｉｚｅｓ
ｉｔｓ
ａｃｔｉｖｉｔｙ
ｉｎ
Ｅｓｅｈｅｒｉｅｈｉａ
ｃｏｉｌ［Ｊ］．Ｊ
Ｂｉｏｌ
Ｃｈｅｍ，１９９７，２７２：１７５０２—１７５１０．【ｌｌ】ＣｈｒｉｓｔｉａｎｓｅｎＪｋ
Ｎｉｅｌｓｅｎ
ＪＳ，Ｅｂｅｒｓｂａｃｈ
Ｔ＇ｅｔａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ
ｓｍａｌｌ
Ｈｆｑ—ｂｉｎｄｉｎｇＲＮＡｓ
ｉｎ
Ｌｉｓｔｅｒｉａ
ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ田．ＲＮＡ，２００６，
７０２
１２：１３８３－１３９６．
盏，丌美技盏通讯…．２０Ｓ
ＬＥｒ丌ＥＲ
ＩＮＢ１０ｒＩ＇ＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
Ｖｏｌ２０一Ｎｏ．５．，
．
Ｓ—ｅｐ．，２００９
．，
ｓｍａｌｌＲＮＡｓｕｓｉｎｇｓｐｌｉｎｔｅｄ
ｌｉｇａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＮａｔＰｒｏｔｏｃ，２００８，３：２７９—２８７．
ｅｔ
ｆ１２】ＶｏｇｅｌＪ，ＢａｒｒｅｌｓＶ，ＴａｎｇＴＨ＇ｅｔａ１．ＲＮｏｍｉｃｓｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ
ｄｅｔｅｃｔｓ
ｎｏｗ
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ｏｆｍｌｃｒｏＲＮＡｓｂｙｓｔｅｍ－ｌｏｏｐ
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ｓＲＮＡ
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ｕｓｉｎｇ
ａ
ａｎａｌｙｓｉｓ
３０ｂａｓｅ
ｐａｉｒ
ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｅｏｌｉ
ａｒｒａｙ叨．
ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０００，１８：１２６２—１２６８．
【１４１ＷａｓｓａｒｍａｎＫＭ，ＲｅｐｏｉｌａＦ＇ＲｏｓｅｎｏｗＣ，ｅｔａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ
ｎｏｖｅｌｓｍａｌｌ
ＲＮＡｓ
ｕｓｉｎｇ
【２２】ＢａｒｒｉｃｋＪＥ，ＳｕｄａｒｓａｎＮ，ＲｕｚｚｏＷＡ．６ＳＲＮＡ
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｏｆ
ｉｓａ
ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ
ａｎ
ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｎｎｏｍｉｃｓ
ａｎｄ
ｍｉｃｒｏａｒｔａｙｓ叨．
ｅａｂａｃｔｅｒｉａｌＲＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｔｈａｔ
ｒｅｓｅｍｂｌｅｓ
ｏｐｅｎ
ＧｅｎｅｓＤｃｖ，２００１，１５：１６３７－１６５１．
ｐｒｏｍｏｔｅｒ［Ｊ】．ＲＮＡ，２００５，１１：７７４－７８４．
【２３】ＫｅｉｌｅｒＫＣ，ＷａｌｌｅｒＰＲＳａｎｅｒＲＴ．Ｒｏｌｅｏｆ
ｓｙｓｔｅｍｓａｇｅｒ
ｉｎ
ａ
【１５】Ｈｕ
Ｚ
Ｌ’ＺｈａｎｇＡＸ，ＳｔｏｒｚＧ，ｅｔａ１．Ａｎａｎｔｉｂｅｄｙ－ｂａｓｅｄｍｉｃｒｏａｃｒａｙ
ｆｏｒｓｍａｌｌＲＮＡ
ｐｅｐｔｉｄｅｔａｇｇｉｎｇ
ｄａｍａｇｅｄ
ｍｅｓ－
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（上接第６８２页）
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ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙｏｆ
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ｔｈｅｌｏｃａｌｉｚｅｄｓｕｒｆａｃｅ
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ｒｅｇｉｏｎｂｙｕｓｉｎｇ
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ＡｍＣｈｅｍ
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ｌｒａｎｓ－
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ｍｉｓｓｉｏｎ
ＤＮＡ叨．ＣｈｅｍＣｏｍｍｕｎ，
ａｎｄ
ｓｃａｎｎｉｎｇ
ｅｌｅｃｔｒｏｎ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ［Ｊ］．ＨｈｉｄｔｏｃｈｅｍＣｙｔｅｃｈｅｍ，
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ＬｅｅＫＳ，ＥＩ－ＳａｙｅｄＭＡ．Ｇｏｌｄａｎｄｓｉｌｖｅｒｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ｉｎ
ｓｅｎｓｉｎｇ
【１２】ＥｌｑｈａｎｉａｎＲＳｔ喇ｅｆｔＪＪ，ＭｕｃｉｃＲＣ，ｅｔａ１．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｃａｌ
ｐｅｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｂａｓｅｄ
ｏｎ
ｔｈｅ
ｄｉｓｔａｎｃｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｏｐｔｉ—
ａｎｄｉｍａｇｉｎｇ：ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｐｌａｓｍｏｎｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｍｅｔａｌ
ｔｏ
ｓｉｚｅ，ｓｈａｐｅ，ａｎｄ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ田．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９７，２７７（２２）：１０７８—
ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＰｈｙｓＣｈｅｍＢ，２００６，１１０（３９）：１９２２０－１９２２５．
Ｅｕｓｔｉｓ
１０８１．
【１９】ＪａｉｎＰＫ
Ｓ，Ｅｌ－ＳａｙｅｄＭＡ．Ｐｌａｓｍｏｎｃｏｕｐｌｉｎｇ
ｉｎ
ｎａｎｏｒｅｄ
【１３１ＰａｔｒｉｃｋＥ，ＡｎｎｅＶＨ，ＪｏｓｅｐｈＶ．Ｒａｐｉｄｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ
ｆｏｒｈｕｍａｎｆｅｒｒｉｔｉｎ
ｐｏｒｔｅｒ
ａｓｓｅｍｂｌｉｅｓ：ｏｐｔｉｃａｌａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ，ｄｉｓｃｒｅｔｅｄｉｐｏｌｅａｐｐｒｏｘｉｍａｔｉｏｎｓｉｍｕｌａ－
ｉｎｔｈｅｃｏｂａｓｍｉｒａｕｓｉｎｇｃｏｌｌｏｉｄａｌｇｏｌｄａｓ
ｔｈｅ
ｒｅ－
ｔｉｏｎ，ａｎｄｅｘｃｉｔｏｎ—ｃｏｕｐｌｉｎｇｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＰｈｙｓＣｈｅｍＢ，２００６，Ｉ１０（３７）：
１８２４３一１８２５３．
ｒｅａｇｅｎｔ［Ｊ］．ＣｌｉｎＣｈｅｍ．２０（）ｏ，４６：２０００—２００３．
ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ
【１４】ＪｅｎｎｙＡ，ＰａｕｌＮ，ＲｏｂｅｓⅣ．Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇｔｈｅ
ｎｏａｓｚａｙｓｂｙ
ｔｕｎｉｎｇ
ｏｆｉｒａｍｕ—
ｆ２０１ＺｗｅｉｆｏｌＤＡ．ＷｅｉＡ．Ｓｕｌｆｉｄｅ－ａｒｒｅｓｔｅｄｇｒｏｗｔｈｏｆｇｏｌｄｎａｎｏｒｍａｔｅｒｉａ
啪．ＣｈｅｍＭａｔｅｒ，２００５，１７（１６）：４２５６－４２６１．【２１】ＰｒａｍｅｄＰ，ＪｏｓｅｐｈＳＴ，Ｔｈｏｍａｓ
ｉｚａｔｉｏｎｏｆＣｈｅｍ
Ａｕ
ｎａｎｏｒｏｄｓ
Ｋ
ｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ｔｏｔｈｅ
ｔｉｐｐｉｎｇｐｏｉｎｔ【刀．Ａｎａｌ
Ｃｈｅｍ，２００８，８０（１５）：６００１—６００５．
【１５】ＬｅｅＳ，Ｐｅｒｅｚ－ＬｕｎａＶＨ．Ｄｅｘｔｒａｎ—ｇｏｌｄｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｈｙｂｒｉｄｍａｔｅｒｉａｌ
ｆｏｒｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ
Ｇ．Ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ－
ｔｈｒｏｕｇｈｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ
ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ们．
Ａｍ
ａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍ．ＡｎａｌＣｈｅｍ，２００５，
Ｓｅｏ，２００７，３０，１２９（２１）：６７１２—６７１３．
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