1、 生命科学实验研究的基本要素AEIR :
animal (动物)equipment (设备)information (信息) reagent (试剂)
2、 实验动物:实验动物是指经人工培育,对其携带的微生物实行控制,遗传背景明确源清楚,
用于科学研究、教学、生物制品或药品鉴定以及其他科学实验的动物。
3、 实验动物的特定含义:
1、从遗传控制角度 实验动物必须是来源清楚、人工培育、遗传背景明确的动物。
2、从微生物控制角度 所有实验动物携带的微生物、寄生虫都是在人工严格控制之下
3、从应用角度 培育所有实验动物的最终目的都是用于科学实验。
4、是以实验动物为实验对象的科学实验,包括以实验动物整体水平的综合性反应为
评价指标的实验,以实验动物为对象的观测,以实验动物为材料来源的局部器官及系统的实验,以及以实验动物的各种表现参数作为权衡尺度的实验室工作。
5、是以实验动物为主要对象和研究重点,以服务于
动物实验为工作目标和探索方向的一门综合性、应用性学科。概括地讲,实验动物学是研究实验动物和动物实验的一门学科。
6、: 即代替(replacement)、减少(reduction )和优化(refinement)。基本意思是采用
其他手段代替实验动物,尽量减少实验动物用量,设法改良动物实验方法以减少动物疼痛和不安。 代替:1、用体外培养器官、组织、小邓代替实验动物;2、用低等动物代替高等动物;3、用
物理或化学方法代替动物实验 减少:1、合用动物;2、改进统计学设计;3、用低等动物代替高等动物课减少高等动物的用
量;3、使用高质量的动物 优化:1、减少对机体的侵袭;2、改良仪器设备;3、进一步控制疼痛
用动物进行科学研究遵循一条基本原则:科学家保证不用动物进行没必要的试验,只有在用其他替代技术尝试失败后才可,不给动物造成不必要的疼痛和不安或死亡,必须符合3R 原则。 实验动物福利:是指实验动物在饲养和实验过程中生理和心理上处于健康和舒适的状态。 动物福利的宗旨:要求科学家在使用动物进行科研、教学、测试前,应先充分考虑到各种替
代手段,以尽可能减少动物所受到的疼痛和痛苦。
7:增加结果可比性和可重复性; 模拟动物和人的基因组异同,复制出更多人类疾病动物模型; 利于动物基因组作图; 对其深入研究,可以建立相关生物信息数据库 实验动物的分类:
1. 在动物学上分类 界、门、纲、目、科、属、种
2. 按遗传学控制分类 近交系、突变系、封闭群、杂交群
3. 按微生物学控制分类 ①普通动物(conventional animal, CV) ②清洁动物(cleaning animal, CL) ③无特定病原体动物(specific pathogen free animal, SPF)
④无菌动物(germ free animal ,GF)
8群动物,最终基因纯合提高杂合性下降。至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成,经连续20代以上亲代与子代交配与全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系数应大于99%。 封闭群(远交群) :以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群,在不从其外部引入新 个体的条件下,至少连续繁殖4代以上,封闭群亦称为远交群。不同基因类型动物群即是封 闭群包括远交种和突变种。远交种称非近交系和随机交配品系,是长期与外界隔离,随机交 配。遗传组成接近自然;突变种指携带个别突变基因的封闭群。 杂交群:由不同品系或种群之间杂交产生的后代称为杂交群(Hybrids)。用于实验研究的杂交群是指两个近交系之间交配所繁殖的子一代动物,简称Fl 代动物。不具有育种功能。
一个品种、系应该具备的特点:1. 相似的外貌特征2. 独特的生物学特性3. 稳定的遗传性能
4. 具有共同遗传来源和一定的遗传结构
通常称近交系动物为品系;封闭群动物为品种。
9不带有质量标准规定的主要人畜共患和动物烈性传染病病原体的动物。 清洁级动物:也称清洁普通动物或最低限度疾病动物,指原种群为屏障系统中的SPF 动物或剖宫产动物,饲养在半屏障系统中的其体内外不带有质量标准规定的人畜共患病病原体或者动物传染病病原体的动物。
无特殊病原体动物(SPF 动物):在屏障系统或隔离系统饲育的,经过检测体内外无质量标准规定的特定病原微生物和寄生虫存在,但可带有非特定的微生物和寄生虫的动物。SPF 动物来源于无菌动物,必须饲养在屏障系统中,实行严格的微生物学控制。 无菌动物:无菌(germ-free,GF) 动物指在隔离系统饲育的,体内外不可检出任何不微生物和 寄生虫的动物。 悉生动物:也称已知菌动物或已知菌丛动物(animal with known bacterialflora),是指在隔离系统饲育的,其体内外仅有人工有计划接种的已知的微生物或寄生虫的动物。根据植入无菌动物体内菌落数目的不同,悉生动物可分为单菌(monoxenie) 、双菌(dixenie)、三菌(trixenie)和多菌(polyxenie)动物。
10:自然环境(物理、化学、生物)和人为环境
实验动物性状主要由遗传和环境因素决定
主要环境因素有:1. 温度(18-29C最适温度) 2. 湿度(40-70%)3. 气流(影响动物体表蒸发和对流散热。换气10-20次、分)4. 光照5. 噪声(60dB )6. 空气洁净度(氨浓度在14mg 以下)按照生物控制程度不同可将实验动物设施非为开放系统、屏障系统(全屏障、亚屏障系统)、隔离系统。 开放系统:无净化装置,但基本上是与大自然相通,设施内环境都受外界环境的影响。只用于普通级实验动物的饲养繁殖。 屏障系统:实验动物生活在与外界隔离的系统内,所有进入的空气都经过初、中、高三级过滤器的净化处理,洁净度10000级,系统内保持空气压差,出风口有防止空气倒流装置;凡是进入设施的物品均须经严格的消毒处理,进入的实验动物也须经消毒处理;人员进入也须经过消毒处理。用于饲养无特定病原体动物或清洁级动物。亚屏障系统适宜用于清洁级动物饲养,环境指标除清洁度、菌落数低于屏障系统外,其他各项指标与屏障系统完全相同。 隔离系统:是以隔离器为主体及其附属装置组成的饲养系统,用于无菌动物和已知菌动物的饲养和动物实验。送入隔离器的空气需要超高效过滤,并维持一定压差,洁净度达到100级,饲料、垫料等都经过高温高压灭菌。工作人员不直接接触动物,而是通过手套进行操作。
11、实验动物选择的原则:
1、相似性原则(结构功能及代谢的、年龄的、群体分布、生态或健康状况的、疾病特点的、 操作实感的相似性);2、差异性原则;3、易化性原则;4、相容或相匹配原则;5、可获性原则;6、重复性和均一性原则
12、评定毒物或者药物毒性,至少用大鼠、家犬两种动物。国际上用Beagle 犬作为标准犬。
为减小实验误差,在动物选择上还应该注意动物年龄、体重、性别、生理状态、健康状况、品系、等级等因素。
13、实验材料。 意义:1. 避免人体实验伤害2. 可提供发病率低、潜伏期长和病程长的疾病材料3. 可以严格控
制实验条件,增加可比性4. 便于样品收集,简化实验操作5. 有助于全面认识疾病本质
14按产生原因分类1. 实验性或诱发性 2. 自发性3. 抗疾病型4.. 生物医学动物模型
按系统分类:1、疾病基本病理过程动物模型2、各系统疾病动物模型
15
1、相似性原则2、重复原则3、可靠原则4、适用性和可控性原则5、易行性和经济性原则
16安静后,用右手拇指和示指捏住尾部中央提起来,如果只想移动动物就
用两手捧起来,如需灌胃以及肌肉、腹腔和皮下注射,则将提起来的小鼠放在龙盖上,轻轻向后拉皮肤,将鼠体置于左手心中,翻转抓住颈背部皮肤,右手拉住小鼠尾部,将后肢拉直,并用左手环指和小指压紧尾巴和后肢,以手掌心夹住背部皮肤。一般采用徒手固定法、鼠尾固定器等。
4~5周内大鼠同小鼠一样抓住尾部提起来。较大的大鼠需抓住大鼠尾巴
的基部。另外一种方法是徒手抓取固定法,张开左手虎口,迅速将拇、示指插入大鼠的的腹下,虎口向前,其余三指及掌心握住大鼠身体中段,并将其保持仰卧位,然后调整左手拇指位置,紧抵在下颌骨上。除外还有鼠尾固定器等。
一起抓住,轻轻提起,然后迅速用左手托起臀部。不应采取抓提兔的双耳、腰部或四肢的方法,以避免对兔双耳、颈椎、双肾的损害。此外还有兔头固定盒、兔解剖台固定。
17全麻:1. 吸入,(乙醚、氯仿、氟烷、甲氧氟烷 )
2. 非吸入,IV IM IH
局麻方法:表面、区域阻滞麻醉、神经干(丛)的周围注射麻药、局部浸润、椎管内麻醉。 实施麻醉前准备问题:1、大动物禁食10~12h,不少于8h ;家兔或啮齿类动物无须禁食2、麻醉前不能使用泻药3、保持动物气道的通畅和组织的营养4、犬做长时间实验前1h 应灌肠排除积粪5、检查药品及相关急救药品
18、实验动物去毛方法(详见书182~183)剪毛、剃毛、拔毛、化学脱毛。
19 1. 经口(口服、喂服、灌胃法)
大小鼠灌胃法:左手固定鼠,右手持灌胃器压鼠头,使其口腔食管成一直线,轻转针头刺激其吞咽,慢慢插入,针达到膈肌水平缓推。常用计量:小鼠0.1-1ml 大鼠1-4ml 豚鼠1-5ml 兔80-150 ml
兔子的灌胃法:动物固定,再将开口器固定于动物口中,压住舌头,然后将灌胃管从开口器的小孔插入动物口中,再沿上腭壁顺食管方向送入胃内,插入动作要轻慢,边插边注意动物的反应。将灌胃管的外端侵入水中,如有气泡逸出,则说明灌胃管误入气管,需拔出重新插。
2. 注射给药 :皮内、皮下、肌内、腹腔、静脉
腹腔注射:右手持针在下腹腹白线偏左或右,从下腹朝头几乎平行刺入皮下,进3-5mm ,再使针头和皮肤45°进腹腔,回抽,缓推。小鼠0.1-0.2mL/10g。大鼠1-2mL/100g。)
20、实验动物采血途径:(详见书186~188)
大、小鼠采血途径1. 尾部采血:剪尾采血、切割尾动脉或静脉、尾静脉穿刺2. 眼眶后静脉丛采血3. 心脏采血:穿刺法(乙醚吸入麻醉,剪去心前区毛 消毒,在左胸3-4肋间用示指摸心搏,右手持注射器垂直进,动作迅速,防凝固。)开胸法4. 大血管采血5. 摘除眼球法6. 断头法
21颈椎脱臼、空气栓塞、急性大失血、过量麻醉、CO2吸入、击打、化学药物、断头。
1、 生命科学实验研究的基本要素AEIR :
animal (动物)equipment (设备)information (信息) reagent (试剂)
2、 实验动物:实验动物是指经人工培育,对其携带的微生物实行控制,遗传背景明确源清楚,
用于科学研究、教学、生物制品或药品鉴定以及其他科学实验的动物。
3、 实验动物的特定含义:
1、从遗传控制角度 实验动物必须是来源清楚、人工培育、遗传背景明确的动物。
2、从微生物控制角度 所有实验动物携带的微生物、寄生虫都是在人工严格控制之下
3、从应用角度 培育所有实验动物的最终目的都是用于科学实验。
4、是以实验动物为实验对象的科学实验,包括以实验动物整体水平的综合性反应为
评价指标的实验,以实验动物为对象的观测,以实验动物为材料来源的局部器官及系统的实验,以及以实验动物的各种表现参数作为权衡尺度的实验室工作。
5、是以实验动物为主要对象和研究重点,以服务于
动物实验为工作目标和探索方向的一门综合性、应用性学科。概括地讲,实验动物学是研究实验动物和动物实验的一门学科。
6、: 即代替(replacement)、减少(reduction )和优化(refinement)。基本意思是采用
其他手段代替实验动物,尽量减少实验动物用量,设法改良动物实验方法以减少动物疼痛和不安。 代替:1、用体外培养器官、组织、小邓代替实验动物;2、用低等动物代替高等动物;3、用
物理或化学方法代替动物实验 减少:1、合用动物;2、改进统计学设计;3、用低等动物代替高等动物课减少高等动物的用
量;3、使用高质量的动物 优化:1、减少对机体的侵袭;2、改良仪器设备;3、进一步控制疼痛
用动物进行科学研究遵循一条基本原则:科学家保证不用动物进行没必要的试验,只有在用其他替代技术尝试失败后才可,不给动物造成不必要的疼痛和不安或死亡,必须符合3R 原则。 实验动物福利:是指实验动物在饲养和实验过程中生理和心理上处于健康和舒适的状态。 动物福利的宗旨:要求科学家在使用动物进行科研、教学、测试前,应先充分考虑到各种替
代手段,以尽可能减少动物所受到的疼痛和痛苦。
7:增加结果可比性和可重复性; 模拟动物和人的基因组异同,复制出更多人类疾病动物模型; 利于动物基因组作图; 对其深入研究,可以建立相关生物信息数据库 实验动物的分类:
1. 在动物学上分类 界、门、纲、目、科、属、种
2. 按遗传学控制分类 近交系、突变系、封闭群、杂交群
3. 按微生物学控制分类 ①普通动物(conventional animal, CV) ②清洁动物(cleaning animal, CL) ③无特定病原体动物(specific pathogen free animal, SPF)
④无菌动物(germ free animal ,GF)
8群动物,最终基因纯合提高杂合性下降。至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成,经连续20代以上亲代与子代交配与全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系数应大于99%。 封闭群(远交群) :以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种群,在不从其外部引入新 个体的条件下,至少连续繁殖4代以上,封闭群亦称为远交群。不同基因类型动物群即是封 闭群包括远交种和突变种。远交种称非近交系和随机交配品系,是长期与外界隔离,随机交 配。遗传组成接近自然;突变种指携带个别突变基因的封闭群。 杂交群:由不同品系或种群之间杂交产生的后代称为杂交群(Hybrids)。用于实验研究的杂交群是指两个近交系之间交配所繁殖的子一代动物,简称Fl 代动物。不具有育种功能。
一个品种、系应该具备的特点:1. 相似的外貌特征2. 独特的生物学特性3. 稳定的遗传性能
4. 具有共同遗传来源和一定的遗传结构
通常称近交系动物为品系;封闭群动物为品种。
9不带有质量标准规定的主要人畜共患和动物烈性传染病病原体的动物。 清洁级动物:也称清洁普通动物或最低限度疾病动物,指原种群为屏障系统中的SPF 动物或剖宫产动物,饲养在半屏障系统中的其体内外不带有质量标准规定的人畜共患病病原体或者动物传染病病原体的动物。
无特殊病原体动物(SPF 动物):在屏障系统或隔离系统饲育的,经过检测体内外无质量标准规定的特定病原微生物和寄生虫存在,但可带有非特定的微生物和寄生虫的动物。SPF 动物来源于无菌动物,必须饲养在屏障系统中,实行严格的微生物学控制。 无菌动物:无菌(germ-free,GF) 动物指在隔离系统饲育的,体内外不可检出任何不微生物和 寄生虫的动物。 悉生动物:也称已知菌动物或已知菌丛动物(animal with known bacterialflora),是指在隔离系统饲育的,其体内外仅有人工有计划接种的已知的微生物或寄生虫的动物。根据植入无菌动物体内菌落数目的不同,悉生动物可分为单菌(monoxenie) 、双菌(dixenie)、三菌(trixenie)和多菌(polyxenie)动物。
10:自然环境(物理、化学、生物)和人为环境
实验动物性状主要由遗传和环境因素决定
主要环境因素有:1. 温度(18-29C最适温度) 2. 湿度(40-70%)3. 气流(影响动物体表蒸发和对流散热。换气10-20次、分)4. 光照5. 噪声(60dB )6. 空气洁净度(氨浓度在14mg 以下)按照生物控制程度不同可将实验动物设施非为开放系统、屏障系统(全屏障、亚屏障系统)、隔离系统。 开放系统:无净化装置,但基本上是与大自然相通,设施内环境都受外界环境的影响。只用于普通级实验动物的饲养繁殖。 屏障系统:实验动物生活在与外界隔离的系统内,所有进入的空气都经过初、中、高三级过滤器的净化处理,洁净度10000级,系统内保持空气压差,出风口有防止空气倒流装置;凡是进入设施的物品均须经严格的消毒处理,进入的实验动物也须经消毒处理;人员进入也须经过消毒处理。用于饲养无特定病原体动物或清洁级动物。亚屏障系统适宜用于清洁级动物饲养,环境指标除清洁度、菌落数低于屏障系统外,其他各项指标与屏障系统完全相同。 隔离系统:是以隔离器为主体及其附属装置组成的饲养系统,用于无菌动物和已知菌动物的饲养和动物实验。送入隔离器的空气需要超高效过滤,并维持一定压差,洁净度达到100级,饲料、垫料等都经过高温高压灭菌。工作人员不直接接触动物,而是通过手套进行操作。
11、实验动物选择的原则:
1、相似性原则(结构功能及代谢的、年龄的、群体分布、生态或健康状况的、疾病特点的、 操作实感的相似性);2、差异性原则;3、易化性原则;4、相容或相匹配原则;5、可获性原则;6、重复性和均一性原则
12、评定毒物或者药物毒性,至少用大鼠、家犬两种动物。国际上用Beagle 犬作为标准犬。
为减小实验误差,在动物选择上还应该注意动物年龄、体重、性别、生理状态、健康状况、品系、等级等因素。
13、实验材料。 意义:1. 避免人体实验伤害2. 可提供发病率低、潜伏期长和病程长的疾病材料3. 可以严格控
制实验条件,增加可比性4. 便于样品收集,简化实验操作5. 有助于全面认识疾病本质
14按产生原因分类1. 实验性或诱发性 2. 自发性3. 抗疾病型4.. 生物医学动物模型
按系统分类:1、疾病基本病理过程动物模型2、各系统疾病动物模型
15
1、相似性原则2、重复原则3、可靠原则4、适用性和可控性原则5、易行性和经济性原则
16安静后,用右手拇指和示指捏住尾部中央提起来,如果只想移动动物就
用两手捧起来,如需灌胃以及肌肉、腹腔和皮下注射,则将提起来的小鼠放在龙盖上,轻轻向后拉皮肤,将鼠体置于左手心中,翻转抓住颈背部皮肤,右手拉住小鼠尾部,将后肢拉直,并用左手环指和小指压紧尾巴和后肢,以手掌心夹住背部皮肤。一般采用徒手固定法、鼠尾固定器等。
4~5周内大鼠同小鼠一样抓住尾部提起来。较大的大鼠需抓住大鼠尾巴
的基部。另外一种方法是徒手抓取固定法,张开左手虎口,迅速将拇、示指插入大鼠的的腹下,虎口向前,其余三指及掌心握住大鼠身体中段,并将其保持仰卧位,然后调整左手拇指位置,紧抵在下颌骨上。除外还有鼠尾固定器等。
一起抓住,轻轻提起,然后迅速用左手托起臀部。不应采取抓提兔的双耳、腰部或四肢的方法,以避免对兔双耳、颈椎、双肾的损害。此外还有兔头固定盒、兔解剖台固定。
17全麻:1. 吸入,(乙醚、氯仿、氟烷、甲氧氟烷 )
2. 非吸入,IV IM IH
局麻方法:表面、区域阻滞麻醉、神经干(丛)的周围注射麻药、局部浸润、椎管内麻醉。 实施麻醉前准备问题:1、大动物禁食10~12h,不少于8h ;家兔或啮齿类动物无须禁食2、麻醉前不能使用泻药3、保持动物气道的通畅和组织的营养4、犬做长时间实验前1h 应灌肠排除积粪5、检查药品及相关急救药品
18、实验动物去毛方法(详见书182~183)剪毛、剃毛、拔毛、化学脱毛。
19 1. 经口(口服、喂服、灌胃法)
大小鼠灌胃法:左手固定鼠,右手持灌胃器压鼠头,使其口腔食管成一直线,轻转针头刺激其吞咽,慢慢插入,针达到膈肌水平缓推。常用计量:小鼠0.1-1ml 大鼠1-4ml 豚鼠1-5ml 兔80-150 ml
兔子的灌胃法:动物固定,再将开口器固定于动物口中,压住舌头,然后将灌胃管从开口器的小孔插入动物口中,再沿上腭壁顺食管方向送入胃内,插入动作要轻慢,边插边注意动物的反应。将灌胃管的外端侵入水中,如有气泡逸出,则说明灌胃管误入气管,需拔出重新插。
2. 注射给药 :皮内、皮下、肌内、腹腔、静脉
腹腔注射:右手持针在下腹腹白线偏左或右,从下腹朝头几乎平行刺入皮下,进3-5mm ,再使针头和皮肤45°进腹腔,回抽,缓推。小鼠0.1-0.2mL/10g。大鼠1-2mL/100g。)
20、实验动物采血途径:(详见书186~188)
大、小鼠采血途径1. 尾部采血:剪尾采血、切割尾动脉或静脉、尾静脉穿刺2. 眼眶后静脉丛采血3. 心脏采血:穿刺法(乙醚吸入麻醉,剪去心前区毛 消毒,在左胸3-4肋间用示指摸心搏,右手持注射器垂直进,动作迅速,防凝固。)开胸法4. 大血管采血5. 摘除眼球法6. 断头法
21颈椎脱臼、空气栓塞、急性大失血、过量麻醉、CO2吸入、击打、化学药物、断头。