过氧化物酶活性的测定

园艺学院设施201402 李密

实验三

（一）过氧化物酶活性的测定（愈创木酚法）

一、实验目的

通过实验掌握提取POD和测定其活性的方法和原理。

二、实验原理

以愈创木酚为底物，在过氧化物酶（POD）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470 nm波长处有最大光吸收值，故可通过测470 nm波长下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。

三、材料、设备和原理

1. 材料马铃薯块茎

2. 设备光光度计、离心机、天平、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸管

3. 试剂已配置好的反应混合液、20m mol/LKH2PO4、100m mol/L磷酸缓冲液 四、 操作方法

1.酶液制备

2．比色测定

五、实验结果

10

分钟内测定的酶液吸光度

时间（min）0 1 2

3 4

5 6

7

8

9 10 A4700.126 0.257 0.385 0.513 0.602 0.694 0.789 0.875 0.999 1.041 1.119

计算：

酶活力（0.01A470/min）=

A2−A1(t2−t1)×0.01

×

园艺学院设施201402 李密

实验三

（一）过氧化物酶活性的测定（愈创木酚法）

一、实验目的

通过实验掌握提取POD和测定其活性的方法和原理。

二、实验原理

以愈创木酚为底物，在过氧化物酶（POD）催化下，H2O2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470 nm波长处有最大光吸收值，故可通过测470 nm波长下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。

三、材料、设备和原理

1. 材料马铃薯块茎

2. 设备光光度计、离心机、天平、研钵、容量瓶、量筒、试管、吸管

3. 试剂已配置好的反应混合液、20m mol/LKH2PO4、100m mol/L磷酸缓冲液 四、 操作方法

1.酶液制备

2．比色测定

五、实验结果

10

分钟内测定的酶液吸光度

时间（min）0 1 2

3 4

5 6

7

8

9 10 A4700.126 0.257 0.385 0.513 0.602 0.694 0.789 0.875 0.999 1.041 1.119

计算：

酶活力（0.01A470/min）=

A2−A1(t2−t1)×0.01

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