食品及保健食品中总膳食纤维的测定
本方法适用于食品及保健食品中总膳食纤维的测定
检测依据：AOAC第16版
1 原理
此测试结合酶和重量分析方法，测定食物中的全部食物纤维。干燥的、无脂肪的食物样本用热稳定的α-淀粉酶胶化，用淀粉葡萄糖苷酶去掉样本中的蛋白和淀粉。加入乙醇沉淀可溶解的食物纤维。然后用乙醇和丙酮过滤并清洗残余物。干燥后，称重残余物。将样本的一半用于蛋白质分析。另一半烧成灰烬。总的食物纤维是残余物质的重量减去蛋白和灰烬的重量。
2 试剂
2.1 α-淀粉酶，热稳定。Sigma产品号A3306。
2.2 蛋白酶。Sigma产品号P3910。
2.3 淀粉葡萄糖苷酶。Sigma产品号A9913。
2.4 C盐，酸洗。Sigma产品号C8656。
2.5 石油醚
2.6 乙醇
2.7 丙酮
2.8 磷酸二氢钠
2.9 磷酸氢二钠
2.10 氢氧化钠
2.11 盐酸
2.12 磷酸盐缓冲液。0.08M，pH6.0
溶解1.4克的磷酸氢二钠和8.4克无水的磷酸二氢钠于700ml水中。用水稀释至1升。检查pH值，如需要，用氢氧化钠或磷酸校准。室温下储存于密封容器中。
2.13 氢氧化钠溶液。0.275mol/L
用水稀释275毫升1.0mol/L氢氧化钠溶液至1升体积的烧杯中。室温下储存于密封容器中。
2.14 盐酸溶液。0.325mol/L
用水稀释275毫升1.0mol/L氢氧化钠溶液至1升体积的烧杯中。室温下储存于密封容器中。
3 仪器
3.1 耐高温垂熔漏斗 3G3
3.2 真空泵
3.3 酸度计
3.4 高温炉
3.5 干燥箱
3.6 600ml高脚烧杯
3.7 分析天平 精确至0.1毫升
4 操作方法
4.1 称量4份待测试样本，每份1克，放入高脚烧杯中。样本的重量偏差不要超过20毫克。重量精确度为0.1毫克。
每个烧杯中加入50毫升pH6.0的磷酸盐缓冲液。
每个烧杯中加入0.10毫升α-生化酶，A3306，充分混合。
用铝箔将烧杯封好，放入沸腾的水浴中。每隔5分钟轻轻摇动烧杯。当烧杯内部温度达
到95°C时恒温保持15分钟。
使溶液冷却至室温。
4.2 在每个烧杯中加入10毫升0.275mol/L的氢氧化钠，将溶液的pH调节到7.5+0.2。检查pH值，必要时，再用氢氧化钠或盐酸调节。
临近使用之前，在磷酸盐缓冲液中制作50毫升/毫升的蛋白酶，3910溶液。吸量0.1毫升（5毫升蛋白酶）至每个烧杯中。
用铝箔将烧杯封好，放入60°C水浴中。不停地摇晃，当烧杯内部温度达到60°C时，恒温保持30分钟。
使溶液冷却至室温。
4.3 在每个烧杯中加入10毫升0.325M的盐酸，将溶液的pH值调节在4.0和4.6之间。检查溶液的pH值，必要时，再用氢氧化钠或盐酸调节。
在每个烧杯中加入0.1毫升淀粉葡萄糖苷酶，A9913。
用铝箔将烧杯封好，放入60°C水浴中。持续摇晃至烧杯内部温度达到60°C时，恒温保持30分钟。
4.4 将4个容量95%的乙醇加入到每个烧杯中。使溶液在室温下过夜，充分沉淀。
4.5 过滤：
用78%的乙醇在每个坩埚中加湿并重新分配C盐。清清地吸取C盐至过滤器板就像平坦的衬垫。继续从每个烧杯中轻轻吸取沉淀物和悬液，定量移至各自的坩埚。用三份20ml 78%的乙醇，二份10ml 95%的乙醇和二份10ml的丙酮冲洗残余物。有的样本会产生胶样物，堵住液体。用抹刀拨开表面的膜可以提高过滤速度。要确保粘在抹刀上的物质冲入坩埚中。每个坩埚的过滤和冲洗时间在0.1-6小时之间，平均约为0.5小时。
在105°C的空气烤箱或70°C的真空烤箱中干燥含残留物的坩埚过夜。
在干燥器中冷却所有的坩埚，称重精确至0.1毫克，以“残留物+CELITE+坩埚重量”的形式记录重量。
4.6 用AOAC方法中规定的克耶达蛋白质测定法，分析两个样本中的残留物以及两个蛋白空白对照。用6.25作系数，将测定出的氨含量转换为蛋白，蛋白样本中已知的氨含量不计算在内。
4.7 在525°C下用5小时将坩埚中的两个样本的残留物和两个空白对照化为灰烬。然后在干燥器中冷却，精确称重至0.1毫克，以“灰烬+C盐+坩埚重量”的形式记录重量。 5 计算
X = ×100
X：样品中膳食纤维的含量，g/100g
m：样品的质量，g
m2：残留物+C盐+坩埚质量，g
m1：C盐+坩埚质量，g
P：蛋白质质量，g
A：灰分质量，g
食品及保健食品中总膳食纤维的测定
本方法适用于食品及保健食品中总膳食纤维的测定
检测依据：AOAC第16版
1 原理
此测试结合酶和重量分析方法，测定食物中的全部食物纤维。干燥的、无脂肪的食物样本用热稳定的α-淀粉酶胶化，用淀粉葡萄糖苷酶去掉样本中的蛋白和淀粉。加入乙醇沉淀可溶解的食物纤维。然后用乙醇和丙酮过滤并清洗残余物。干燥后，称重残余物。将样本的一半用于蛋白质分析。另一半烧成灰烬。总的食物纤维是残余物质的重量减去蛋白和灰烬的重量。
2 试剂
2.1 α-淀粉酶，热稳定。Sigma产品号A3306。
2.2 蛋白酶。Sigma产品号P3910。
2.3 淀粉葡萄糖苷酶。Sigma产品号A9913。
2.4 C盐，酸洗。Sigma产品号C8656。
2.5 石油醚
2.6 乙醇
2.7 丙酮
2.8 磷酸二氢钠
2.9 磷酸氢二钠
2.10 氢氧化钠
2.11 盐酸
2.12 磷酸盐缓冲液。0.08M，pH6.0
溶解1.4克的磷酸氢二钠和8.4克无水的磷酸二氢钠于700ml水中。用水稀释至1升。检查pH值，如需要，用氢氧化钠或磷酸校准。室温下储存于密封容器中。
2.13 氢氧化钠溶液。0.275mol/L
用水稀释275毫升1.0mol/L氢氧化钠溶液至1升体积的烧杯中。室温下储存于密封容器中。
2.14 盐酸溶液。0.325mol/L
用水稀释275毫升1.0mol/L氢氧化钠溶液至1升体积的烧杯中。室温下储存于密封容器中。
3 仪器
3.1 耐高温垂熔漏斗 3G3
3.2 真空泵
3.3 酸度计
3.4 高温炉
3.5 干燥箱
3.6 600ml高脚烧杯
3.7 分析天平 精确至0.1毫升
4 操作方法
4.1 称量4份待测试样本，每份1克，放入高脚烧杯中。样本的重量偏差不要超过20毫克。重量精确度为0.1毫克。
每个烧杯中加入50毫升pH6.0的磷酸盐缓冲液。
每个烧杯中加入0.10毫升α-生化酶，A3306，充分混合。
用铝箔将烧杯封好，放入沸腾的水浴中。每隔5分钟轻轻摇动烧杯。当烧杯内部温度达
到95°C时恒温保持15分钟。
使溶液冷却至室温。
4.2 在每个烧杯中加入10毫升0.275mol/L的氢氧化钠，将溶液的pH调节到7.5+0.2。检查pH值，必要时，再用氢氧化钠或盐酸调节。
临近使用之前，在磷酸盐缓冲液中制作50毫升/毫升的蛋白酶，3910溶液。吸量0.1毫升（5毫升蛋白酶）至每个烧杯中。
用铝箔将烧杯封好，放入60°C水浴中。不停地摇晃，当烧杯内部温度达到60°C时，恒温保持30分钟。
使溶液冷却至室温。
4.3 在每个烧杯中加入10毫升0.325M的盐酸，将溶液的pH值调节在4.0和4.6之间。检查溶液的pH值，必要时，再用氢氧化钠或盐酸调节。
在每个烧杯中加入0.1毫升淀粉葡萄糖苷酶，A9913。
用铝箔将烧杯封好，放入60°C水浴中。持续摇晃至烧杯内部温度达到60°C时，恒温保持30分钟。
4.4 将4个容量95%的乙醇加入到每个烧杯中。使溶液在室温下过夜，充分沉淀。
4.5 过滤：
用78%的乙醇在每个坩埚中加湿并重新分配C盐。清清地吸取C盐至过滤器板就像平坦的衬垫。继续从每个烧杯中轻轻吸取沉淀物和悬液，定量移至各自的坩埚。用三份20ml 78%的乙醇，二份10ml 95%的乙醇和二份10ml的丙酮冲洗残余物。有的样本会产生胶样物，堵住液体。用抹刀拨开表面的膜可以提高过滤速度。要确保粘在抹刀上的物质冲入坩埚中。每个坩埚的过滤和冲洗时间在0.1-6小时之间，平均约为0.5小时。
在105°C的空气烤箱或70°C的真空烤箱中干燥含残留物的坩埚过夜。
在干燥器中冷却所有的坩埚，称重精确至0.1毫克，以“残留物+CELITE+坩埚重量”的形式记录重量。
4.6 用AOAC方法中规定的克耶达蛋白质测定法，分析两个样本中的残留物以及两个蛋白空白对照。用6.25作系数，将测定出的氨含量转换为蛋白，蛋白样本中已知的氨含量不计算在内。
4.7 在525°C下用5小时将坩埚中的两个样本的残留物和两个空白对照化为灰烬。然后在干燥器中冷却，精确称重至0.1毫克，以“灰烬+C盐+坩埚重量”的形式记录重量。 5 计算
X = ×100
X：样品中膳食纤维的含量，g/100g
m：样品的质量，g
m2：残留物+C盐+坩埚质量，g
m1：C盐+坩埚质量，g
P：蛋白质质量，g
A：灰分质量，g