第３６卷第８期
２００８年８月西北农林科技大学学报（自然科学版）
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆．ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖ０１．３６
Ｎｏ．８
Ａｕｇ．２００８
２株鱼源乳酸菌的生物学特性研究
杨红玲１，孙云章１’２，叶继丹１’２，常建波１’２，陈政强１，林文燕１
（１集美大学水产学院福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室，福建厦门３６１０２１；
２集美大学水产学院厦门市饲料检测与安全评价重点实验室，福建厦门３６１０２１）
［摘要］【目的】研究２株鱼源乳酸菌的生物学特性，为石斑鱼高效益生菌株的筛选提供试验依据。【方法】体外检测乳酸菌ＥＡ－ｌ和Ｙ４—２产乳酸及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的能力，以及２菌株对不同ｐＨ值、胆盐、胃蛋白酶和高温的耐受能力。【结果】菌株ＥＡ＿１和Ｙ４—２均具有较强的产乳酸能力，培养液中的乳酸含量在９６ｈ内随培养时间
延长呈上升趋势，ＥＡ－１产乳酸速度相对较快。菌株ＥＡ－１和Ｙ４—２均能在培养２４ｈ后产生活性稳定的ＳＯＤ，培养４８ｈ后ＥＡ－１产生的ＳＯＤ活性显著高于Ｙ４—２（Ｐ＜Ｏ．０５）。菌株ＥＡ－１和Ｙ４—２经ｐＨ２．５～４．５处理４ｈ后存活数维持在
１０６
ｍＬ＿１以上，菌株Ｙ４—２对ｐＨ１．５低酸环境的耐受能力强于ＥＡ－１。２菌株在１ｇ／Ｌ胆盐质量浓度下存活数均较高；
胆盐质量浓度达到２ｇ／Ｌ时，ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活数可维持在１０５ｍＬ－１以上，提示２菌株对≤２ｇ／Ｌ的胆盐具有一定的耐受性。经４～１０ｇ／Ｌ的蛋白酶处理３０ｍｉｎ后，Ｅ站１和Ｙ４—２的存活数均维持在１０６ｍＬ－１以上。经６０℃处理３０ｍｉｎ后ＥＡ－１和Ｙ４—２的存活数均维持在１０６ｍＬ－１以上，Ｙ４—２对８０℃高温的耐受能力较ＥＡ一１强，说明Ｅ～１和Ｙ４—２
有一定的热耐受性。【结论】ＥＡ－１和Ｙ４—２产乳酸和ｓｏＤ能力均较强，且对低ｐＨ值、高胆盐、胃蛋白酶和高温具有一
定的耐受能力。
［关键词］乳酸菌；乳酸；石斑鱼；ＳＯＤ；耐受［中图分类号］
Ｒ３７８．９９２
［文献标识码］
Ａ
［文章编号］
１６７１—９３８７（２００８）０８一００２５一０６
ＢｉＯＩＯｇｉＣａＩＣｈａｒａｃｔｅｒｉＳｔｉｃｓＯｆｔｗＯＩａｃｔｉＣａＣｉｄｂａｃｔｅｒｉａｆｒＯｍｏｒａｎｇｅ—ｓｐｏｔｔｅｄｇｒｏｕｐｅｒ（Ｅｐ们ｅｐ，１ｅ／ｕｓｃｏｆｏｆｃ炮ｓ）ＩａｒＶａｅ
ＹＡＮＧＨｏｎｇ—ｌｉｎ９１，ＳＵＮＹｕｎ—ｚｈａｎ９１”，ＹＥＪｉ—ｄａｎ９１”，ＣＨＡＮＧＪｉａｎ－ｂ０１”，
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ＵＨｉｗｒｓｉ缈，Ｘ缸ｍＰ”。Ｆ幻谊”３６１０２１，（’＾ｉ№）
ｐｒｏｖｉｄｅ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｂｉ０１０９ｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆ２ｓｔｒａｉｎｓｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ
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ｔｈｅｏｒｅｔｉｃｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇｏｏｄｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｓｔｒａｉｎｓｅｌｅｃｔｉｏｎｆｏｒｇｒｏｕｐｅｒ．【Ｍｅｔｈｏｄ】ＬａｃｔｉｃａｃｉｄａｎｄＳＯＤｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎｓＥＡ一１ａｎｄＹ４—２ｆｒｏｍＯｒａｎｇｅ—ｓｐｏｔｔｅｄＧｒｏｕｐｅｒ（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓｃｏｉｏｉｄｅｓ）ｌａｒｖａｅ，ａｎｄｔｈｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｏｆｔｈｅｔｗｏｓｔｒａｉｎｓ
ｔｏ
ｌｏｗｐＨ，ｂ订ｅｓａｌｔ，ｐｒｏｔｅａｓｅａｎｄｈｅａｔｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．【Ｒｅｓｕｌｔ】ＥＡ一１
ａｎｄＹ４—２ｅｘｈｉｂｉｔｅｄｇｏｏｄｌａｃｔｉｃａｃｉｄａｎｄＳＯＤｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙ．Ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｗｏｃｕｌｔｕｒｅｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ａｓ
ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｅｄｅｄ，ＥＡ一１ｐｒｏｄｕｃｅｄｌａｃｔｉｃａｃｉｄｍｏｒｅｒａｐｉｄｌｙ．ＥＡ一１ａｎｄＹ４—２ｐｒｏｄｕｃｅｄｓｔａｂｌｅ
ａｍｏｕｎｔｏｆＳＯＤａｆｔｅｒ２４ｈｏｆｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅａｍｏｕｎｔｏｆＳＯＤｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＥＡ一１ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎＹ４—２ａｆｔｅｒ４８ｈｏｆｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ
ｃｏｕｎｔｓ
ｏｆＹ４—２ａｎｄＥＡ一１ｗｅｒｅａｂｏｖｅ１０６ｍＬ．１
［收稿日期］［基金项目］［作者简介］［通讯作者］
２００７一０９—１２
国家自然科学基金项目（３０６００４６１）；集美大学科研基金项目（ｃ６０６１６）杨红玲（１９７６一），女，湖北石首人，助教，主要从事水产微生物研究。
孙云章（１９７６一），男，湖北石首人，讲师，博士，主要从事动物消化道微生物研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｕｎｙｕｎｚｈａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃ“
西北农林科技大学学报（自然科学版）
ａｆｔｅｒ４ｈｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔＹ４—２ｗｅｒｅａｂｌｅ
ｔｏ
第３６卷
ａｎｄ
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ｐＨ２．５—４．５．Ｙ４—２ｗａｓｍｏｒｅ
ｔｏｌｅｒａｎｔ
ｔｏ
ｌｏｗｐＨｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＥＡ一１．ＥＡ一１
ｃｏｕｎｔｓ
ｓｕｒｖｉｖｅｗｅｌｌｗｉｔｈｉｎ１ｈｉｎｃｕｂａｔｉｎｇｗｉｔｈｌｇ／Ｉ．ｂｉｌｅｓａｌｔ．Ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ
ｏｆＹ４—２ａｎｄ
ＥＡ一１ｗｅｒｅａｂｏｖｅ１。ＯｊｍＩ。一１ｉｎｃｕｂａｔｉｎｇｗｉｔｈ２ｇ／Ｌｂｉｌｅｓａｌｔ，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＹ４～２ａｎｄＥＡ一１ｃｏｕｌｄｔ０１ｅｒ—
ａｔｅ
ｂｉｌｅｓａｌｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｕｎｄｅｒ２ｇ／Ｌ．Ｐｅｐｓｉｎｈａｄｎｅｇａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔ
ｃｏｕｎｔｓ
ｏｎ
ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆＥＡ一１ａｎｄＹ４—２ｓｔｒａｉｎｓ，
ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ
ｏｆＹ４—２ａｎｄＥＡ一１ｗｅｒｅａｂｏｖｅ１０６ｍＩ。＿１ａｆｔｅｒ３０ｍｉｎｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ４—１０ｇ／ＬＰｅｐ—
ｏｆＹ４—２ａｎｄＥＡ一１
ｔｏ
ｓｉｎ．Ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ
ｃｏｕｎｔｓ
ｗｅｒｅａｂｏｖｅ１０６ｍＬ一１ａｆｔｅｒ３０ｍｉｎｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ａｔ
６０℃，Ｙ４—２
ｗａｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｍｏｒｅｔｏｌｅｒａｎｔｈｉｇｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｈａｎｔｈａｔｏｆＥＡ—１．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ＥＡ一１ａｎｄＹ４—２ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ
ｔｏ
ｇｏｏｄｌａｃｔｉｃａｃｉｄａｎｄＳ（）Ｄｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙａｎｄｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄｔｏｌｅｒａｎｃｅｈｅａｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：１ａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ；ｌａｃｔｉｃａｃｉｄ；ｇｒｏｕｐｅｒ；ＳＯＤ；ｔｏｌｅｒａｎｃｅ
ｌｏｗｐＨ，ｂｉｌｅｓａｌｔ，ｐｒｏｔｅａｓｅａｎｄ
石斑鱼是近年来人工育苗成功的一种名贵海水
养殖鱼种，在我国东南沿海已有较大规模的养殖。
购自国药集团化学试剂有限公司。
１．２乳酸含量及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的测
定
在石斑鱼的人工养殖过程中，引起高死亡率的各种
细菌性疾病是影响生产的棘手问题。卜２｜。目前，生产中多使用各种抗菌药物来预防和治疗鱼类的细菌性
将ＥＡ一１和Ｙ４—２分别在ＭＲＳ液体培养基中培
养２４ｈ活化，活化的乳酸菌培养液按体积分数５％
疾病，但抗菌药物的大量使用带来的药物残留和出现耐药菌株等问题，已引起了学术界和消费者的高度关注。为此，国内外科学家都致力于各种抗菌药物替代品的研究，其中绿色环保鱼用益生素的研发已成为国际上的研究热点。但是，鱼用益生菌的作
用效果并不稳定，其中一个很重要的原因可能是益
接种到ＭＲＳ液体培养基中，每个菌株设３个重复，２８℃静置培养。分别于培养的０，２４，４８，７２，９６和
１２０
ｈ取培养液样品，按照南京建成生物工程研究
所提供的测定试剂盒说明书测定乳酸含量和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性。ＳＯＤ活性单位定义为：每
ｍｇ组织蛋白在１ｍＬ反应液中Ｓ（）Ｄ抑制率达５０％时所对应的ＳＯＤ量为１个活性单位（Ｕ）。
１．３
生菌的选择不当，目前许多鱼用益生菌株并非分离自鱼类消化道，而是来自于环境或恒温动物。这些
益生菌往往因为不能在鱼类消化道定植或定植的时间太短，难以发挥其益生作用。因此，理想的益生素
ｐＨ值对乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响用１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ调节ＭＲＳ液体培养基ｐＨ值
分别为１．５，２．５，３．５和４．５，以未经调节的ＭＲＳ液体培养基（ｐＨ值６．６）为对照。将ＥＡ一１或Ｙ４—２活化菌种接种至各处理培养基，接种量为体积分数
５％，２８℃静置培养。４ｈ后取上述各处理培养菌液，用３０ｇ／Ｉ。ＮａＣｌ无菌液梯度稀释。取１０＿４～１０＿７稀释度菌液０．２ｍＩ。进行平板计数ｒ７］，每个梯度做２个重复。本研究平板计数试验中均用ＭＲＳ固体培养基，２８℃常规培养。
１．４
菌株最好来自动物自身胃肠道ｐ“。水产养殖中益生菌制剂可以通过养殖水体或饵料投喂进入鱼类胃肠道，益生菌株必须能耐受鱼胃肠道环境的影响（如
胆盐、酸性环境、胃蛋白酶等的影响），方可在鱼胃肠道内大量存活，发挥其益生作用』＿６］。ＥＡ一１和Ｙ４—２
２菌株是笔者从斜带石斑鱼体内分离筛选到的抑菌
能力较强的乳酸菌，为了深入了解这２株菌的生物
学特性，本试验对其产乳酸和超氧化物歧化酶（Ｓ（）Ｄ）的能力及对低酸、高胆汁酸盐、胃蛋白酶、高
温的耐受能力进行了研究，现将结果报道如下。
胆盐对乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响试验设４个不同胆盐处理组（１，２，３和４ｇ／Ｌ），
以不加胆盐（ｏｇ／Ｉ。）的培养基（ｐＨ值６．６）为对照
１材料与方法
１．１１．１．１
组，各处理组培养基均用１ｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ０Ｈ和ＨＣｌ溶液调节ｐＨ与对照组相同。分别接种ＥＡ一１或Ｙ４—２活化菌种于各处理组及对照组培养基中，接种量同１．３节。２８℃条件下静置培养ｌｈ后，取样进
行平板菌落计数。
１．５
材料菌
株
乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２由集美大学
福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室保存，分离自斜带石斑鱼（Ｅ户ｉ聍Ｐ户＾Ｐｚ“ｓｆｏｉｏｉｄＰｓ）仔鱼
体内。
１．１．２
蛋白酶对乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响试验设４个不同质量浓度的胃蛋白酶处理（分
试
剂
胃蛋白酶购自Ｓｉｇｍａ公司；猪胆盐别为４，６，８和ｌＯｇ／Ｌ），以不加蛋白酶（Ｏｇ／Ｌ）的培
第８期杨红玲等：２株鱼源乳酸菌的生物学特性研究
２７
养基（ｐＨ值６．６）为对照，各处理组培养基均用１
ｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ０Ｈ和ＨＣｌ溶液调节ｐＨ值与对照组相同。向各处理组及对照组培养基中分别接种ＥＡ一
期（９６和１２０ｈ），ＥＡ一１培养液中的乳酸含量显著高于Ｙ４—２（Ｐ＜Ｏ．０５）。
１或Ｙ４—２活化菌种，接种量同１．３节。２８℃条件下
静置培养３０ｍｉｎ，取样进行平板菌落计数。
ｆ、ｏ
１．６温度对乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响
将活化的乳酸菌菌液按体积分数５％接种于ＭＲＳ液体培养基，取菌液分别于２８（对照），４０，６０
和８０℃处理３０ｍｉｎ，取样进行平板菌落计数。１．７数据处理
ｐ童
重ｉ
耄
０
２４
４Ｓ
７２
９６
１２０
乳酸含量和ＳＯＤ活性数据经Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ
Ｅｘｃｅｌ
时间／ｈ
Ｔｉｍｅ
初步整理后，利用ＳＰＳＳｌｌ．５单因子方差分析中的
Ｄｕｎｃａｎ法进行统计分析。
图１不同培养时间对乳酸菌乳酸含量的影响
２结果与分析
２．１
同一时间点数据标注不同小写字母者表示差异显著（Ｐ＜Ｏ．０５）
Ｆｉｇ．１
Ｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｉｍｅ
Ｖａｌｕｅｓ
ｉｎ
乳酸含量及ＳＯＤ活性随培养时间的变化
由图１可见，菌株ＥＡ一１和Ｙ４—２培养液中的乳
酸含量在９６ｈ内随培养时间的延长呈上升趋势；培
ｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌ
ｌｅｔｔｅｒｓｄｉｆｆｅｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜Ｏ．０５）
养７２ｈ后２株菌乳酸产量明显上升，但ＥＡ一１产乳酸速度较快，乳酸含量在９６ｈ左右达到最大值，此后下降，这可能是由于随培养时间的延长，乳酸菌逐渐衰老，生长能力下降，此前产生的乳酸为乳酸菌本身代谢所利用，导致培养液中乳酸含量下降；培养后
表１
Ｔａｂｌｅ１
由表１可知，在整个培养过程中，ＥＡ一１和Ｙ４—２
各自产生的ＳＯＤ活性比较稳定，差异不显著；培养
２４ｈ时，ＥＡ一１与Ｙ４—２菌株的ＳｏＤ活性差异不显
著，培养４８ｈ后（包括４８ｈ），ＥＡ一１培养液中的ＳＯＤ
活性显著高于Ｙ４—２（Ｐ＜Ｏ．０５）。
不同培养时间对乳酸菌ＳＯＤ活性的影响
ａｔ
ＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ１ａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅ“ａ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｉｍｅ
Ｕ／ｍＬ
注：同列数据后标不同小写字母者表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。
Ｎｏｔｅ：ｖａｌｕｅｓ
ｉｎｔｈｅ
ｓａｍｅｃｏｌｕｍｎｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｄｉｆｆｅｒ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜Ｏ．０５）
２．２
ｐＨ值对ＥＡ一１、Ｙ４—２存活的影响
由表２可知，ＥＡ一１在ｐＨ为１．５时存活数低于
说明ＥＡ一１对ｐＨ２．５以上酸性环境有一定耐受性；Ｙ４—２在ｐＨ≥１．５时，存活数≥１．５×１０７ｍＬ～，说
明Ｙ４—２对低酸环境具有较好的耐受性，其对低酸环境的耐受能力较ＥＡ一１强。
５．Ｏ×１０４ｍＬ～，说明ＥＡ一１对ｐＨ１．５耐受性差；在
ｐＨ≥２．５时ＥＡ一１的存活数维持在１０６ｍＬ－１以上，
表２乳酸菌在不同ｐＨ值条件下的存活数
Ｔａｂｌｅ２
Ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｃｏｕｎｔｓ
ｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐＨ
ｍＩ。一１
２．３
胆盐质量浓度对ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响由表３可知，在胆盐质量浓度为１ｇ／Ｌ时，ＥＡ一
ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活数量仍维持在１０５ｍＬ－１以上，
提示ＥＡ一１和Ｙ４—２对≤２ｇ／Ｌ的胆盐具有一定的耐
１和Ｙ４—２的存活数均较高，分别为１．Ｏ×１０７
ｍＬ叫
受性；当胆盐质量浓度≥３ｇ／Ｌ时，２株菌存活数均
低于５．Ｏ×１０４ｍＬ～。
和５．０×１０６ｍＬ～，当胆盐质量浓度达到２ｇ／Ｌ时，
２８
西北农林科技大学学报（自然科学版）第３６卷
２．４
胃蛋白酶对ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响
由表４可知，胃蛋白酶对ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活
ｍｉｎ后，ＥＡ—ｌ和Ｙ４—２的存活数均在１０６ｍＩ。一１以
上，说明ＥＡ一１和Ｙ４—２对胃蛋白酶有一定的耐受
性。
有一定的影响，经４～１０ｇ／Ｌ的胃蛋白酶处理３０
表４乳酸菌在不同胃蛋白酶质量浓度下的存活数
Ｔａｂｌｅ
４
Ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｃｏｕｎｔｓ
ｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｅｐｓｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｍＩ。一１
２．５温度对ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响
由表５可知，ＥＡ—ｌ和Ｙ４—２活菌数随着处理温
℃时ＥＡ—ｌ和Ｙ４—２的存活数≥１０６ｍＬ～；８０℃时，Ｙ４—２存活数维持在５．ｏｘｌ０６ｍＬ～，而ＥＡ一１存活数低于５．Ｏ×１０４ｍＩ。～，提示Ｙ４—２对高温的耐受能
力较ＥＡ一１强。
度的升高而下降，４０℃时ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活数均较高，分别为１．９×１０８ｍＬ叫和５．Ｏ×１０９
Ｔａｂｌｅ５
ｍＬ～；６０
表５乳酸茵在不同温度下的存活数
Ｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄ
ｂａｃｔｅｒｉａｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ
ｍＩ。
３讨论
３．１
能在培养２４ｈ后产生一定量的Ｓ（）Ｄ，因此作者推
测，ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株可增强动物的免疫功能，提高
动物的抗病力。
３．２
乳酸菌产乳酸及Ｓ（）Ｄ能力
乳酸菌能分泌各种抑菌物质抑制病原微生物增殖，其中乳酸是最常见的抑菌物质之一［３’８］。乳酸菌在肠道大量繁殖，产生的乳酸可降低消化道ｐＨ值，从而抑制病原菌的生长和繁殖［９］。本试验以２株抑菌能力较强的鱼源乳酸菌ＥＡ—ｌ和Ｙ４—２为研究对象，测定了其培养液中乳酸含量，结果表明，２株乳
酸菌均具有较强的产乳酸能力，且培养液中的乳酸含量在９６ｈ内随培养时间延长呈上升趋势，因此作
乳酸菌的环境耐受能力
水产养殖中，益生菌菌株进入鱼胃肠道后必须能耐受鱼胃肠道环境因素，如胃肠道酸性环境、胆盐、胃蛋白酶等的作用，方可在胃肠道内存活，发挥其益生作用［５“］。海水鱼胃内的ｐＨ值在２．ｏ～４．ｏ，这种低ｐＨ值环境对乳酸茵有很大的抑制作用¨３。。本试验研究了乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２在ｐＨ值１．５～４．５低酸环境中的存活情况。结果表明，乳酸菌
ＥＡ一１和Ｙ４—２经ｐＨ２．５～４．５处理４ｈ后，存活数分别维持在１０６ｍＬ－１和１０７ｍＬ叫以上，表明大部分的ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株有望顺利通过鱼胃；经ｐＨ
者推测这２株乳酸菌可能具有良好的应用前景。
超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是一种重要的抗氧化酶，可清除体内自由基，保护细胞免受损害，使细胞能正常合成各种酶类，对增强吞噬细胞活性和整个机体的免疫功能具有重要作用¨…。当ＳＯＤ活性降低时，生物体内自由基积累，导致生理功能失调，免疫水平下降，容易发生疾病Ⅲ］。有研究表明，益生菌能刺激机体使ＳＯＤ活性上升，从而增强机体非特异性免疫功能，但有关益生菌自身产生ＳＯＤ的报道
很少［３’１２｜。本试验结果显示，ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株均
１．５处理后，Ｙ４—２存活数量为１．５×１０７ｍＩ。～，而ＥＡ一存活数低于５．０×１０４ｍＬ～。因此，相对于ＥＡ一
１菌株，Ｙ４—２菌株对低酸环境的耐受能力更强，通过鱼胃进入肠道的可能性更大。
除耐受胃内的低酸环境外，益生菌还需具备耐受小肠中胆盐等形成的高渗透压环境的能力，所以对胆盐的耐受性也是筛选益生菌的一个重要指标。
第８期杨红玲等：２株鱼源乳酸菌的生物学特性研究
有研究表明，乳酸菌具有一定的胆盐耐受能力［１３‘１引。本试验中，乳酸菌Ｙ４—２和ＥＡ一１在１ｇ／Ｌ胆盐质量浓度条件下存活数均较高；当胆盐质量浓度达到２ｇ／Ｌ时，ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活数仍维持在１０５
ｍＬ叫
以上，提示ＥＡ一１和Ｙ４—２对≤２ｇ／Ｌ的胆盐具有一
定的耐受性。虽然目前缺乏海水鱼肠道内胆盐质量
浓度的数据，但鱼胆囊内胆盐含量在２～１０
ｇ／Ｌ［１５。１引，进入肠道被稀释，肠道内胆盐质量浓度要
远低于胆囊内胆盐含量。由此而知，ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株能否耐受鱼肠道胆盐的影响，在鱼肠道内存活，尚需进一步研究。
益生菌除要能耐受低酸和高胆盐环境外，还必
须能耐受胃肠道蛋白酶的降解。据报道，当ｐＨ值
高于２．５时，含１０ｇ／Ｌ胃蛋白酶的人工胃液对乳酸
菌存活的影响很小［１７｜。本试验结果表明，胃蛋白酶对乳酸菌ＥＡ～１和Ｙ４—２的存活有一定的影响，但经
４～１０ｇ／Ｌ的胃蛋白酶处理后，ＥＡ一１和Ｙ４—２的存
活数均维持在１０６ｍＩ。一１以上，说明ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株对胃蛋白酶的耐受能力较强。因此，Ｙ４—２和ＥＡ一１菌株有望能抵御胃蛋白酶的降解，在胃肠道中保持较高的存活率，发挥益生作用。
通过饵料投喂动物，益生菌须能耐受饵料加工
时的高温。据报道，乳酸菌通常不能耐受高温，经８０℃处理５～１５ｍｉｎ后存活数低于１．Ｏ×１０４
ｍＬ＿１［１８］。本试验中，ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株经６０℃处理３０ｍｉｎ后存活数≥１０６ｍＬ～，经８０℃处理３０
ｍｉｎ后，Ｙ４—２存活数维持在５．Ｏ×１０６
ｍＬ－１，而ＥＡ一１
存活数低于５．０×１０４ｍＬ一。表明，ＥＡ一１和Ｙ４—２
菌株均具有一定的热耐受性，Ｙ４—２对高温的耐受能
力更强，有望耐受饲料加工过程中的高温。
本研究结果表明，鱼源乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２产乳酸和Ｓ（）Ｄ能力较强，且对低ｐＨ值、高胆盐、胃蛋
白酶和高温具有一定的耐受能力，有望能在鱼胃肠道中存活并发挥其益生作用，有进一步研究开发的价值。
［参考文献］
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ＢＫ，ｃａｒｓｏｎ
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Ｐ
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2株鱼源乳酸菌的生物学特性研究
作者：作者单位：
杨红玲， 孙云章， 叶继丹， 常建波， 陈政强， 林文燕
杨红玲,陈政强,林文燕(集美大学,水产学院,福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,福建,厦门,361021)， 孙云章,叶继丹,常建波(集美大学,水产学院,福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,福建,厦门,361021;集美大学,水产学院,厦门市饲料检测与安全评价重点实验室,福建,厦门,361021)
西北农林科技大学学报(自然科学版)
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刊名：英文刊名：年，卷(期)：
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本文读者也读过(10条)
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本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_xbnydxxb200808005.aspx
第３６卷第８期
２００８年８月西北农林科技大学学报（自然科学版）
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆．ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖ０１．３６
Ｎｏ．８
Ａｕｇ．２００８
２株鱼源乳酸菌的生物学特性研究
杨红玲１，孙云章１’２，叶继丹１’２，常建波１’２，陈政强１，林文燕１
（１集美大学水产学院福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室，福建厦门３６１０２１；
２集美大学水产学院厦门市饲料检测与安全评价重点实验室，福建厦门３６１０２１）
［摘要］【目的】研究２株鱼源乳酸菌的生物学特性，为石斑鱼高效益生菌株的筛选提供试验依据。【方法】体外检测乳酸菌ＥＡ－ｌ和Ｙ４—２产乳酸及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的能力，以及２菌株对不同ｐＨ值、胆盐、胃蛋白酶和高温的耐受能力。【结果】菌株ＥＡ＿１和Ｙ４—２均具有较强的产乳酸能力，培养液中的乳酸含量在９６ｈ内随培养时间
延长呈上升趋势，ＥＡ－１产乳酸速度相对较快。菌株ＥＡ－１和Ｙ４—２均能在培养２４ｈ后产生活性稳定的ＳＯＤ，培养４８ｈ后ＥＡ－１产生的ＳＯＤ活性显著高于Ｙ４—２（Ｐ＜Ｏ．０５）。菌株ＥＡ－１和Ｙ４—２经ｐＨ２．５～４．５处理４ｈ后存活数维持在
１０６
ｍＬ＿１以上，菌株Ｙ４—２对ｐＨ１．５低酸环境的耐受能力强于ＥＡ－１。２菌株在１ｇ／Ｌ胆盐质量浓度下存活数均较高；
胆盐质量浓度达到２ｇ／Ｌ时，ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活数可维持在１０５ｍＬ－１以上，提示２菌株对≤２ｇ／Ｌ的胆盐具有一定的耐受性。经４～１０ｇ／Ｌ的蛋白酶处理３０ｍｉｎ后，Ｅ站１和Ｙ４—２的存活数均维持在１０６ｍＬ－１以上。经６０℃处理３０ｍｉｎ后ＥＡ－１和Ｙ４—２的存活数均维持在１０６ｍＬ－１以上，Ｙ４—２对８０℃高温的耐受能力较ＥＡ一１强，说明Ｅ～１和Ｙ４—２
有一定的热耐受性。【结论】ＥＡ－１和Ｙ４—２产乳酸和ｓｏＤ能力均较强，且对低ｐＨ值、高胆盐、胃蛋白酶和高温具有一
定的耐受能力。
［关键词］乳酸菌；乳酸；石斑鱼；ＳＯＤ；耐受［中图分类号］
Ｒ３７８．９９２
［文献标识码］
Ａ
［文章编号］
１６７１—９３８７（２００８）０８一００２５一０６
ＢｉＯＩＯｇｉＣａＩＣｈａｒａｃｔｅｒｉＳｔｉｃｓＯｆｔｗＯＩａｃｔｉＣａＣｉｄｂａｃｔｅｒｉａｆｒＯｍｏｒａｎｇｅ—ｓｐｏｔｔｅｄｇｒｏｕｐｅｒ（Ｅｐ们ｅｐ，１ｅ／ｕｓｃｏｆｏｆｃ炮ｓ）ＩａｒＶａｅ
ＹＡＮＧＨｏｎｇ—ｌｉｎ９１，ＳＵＮＹｕｎ—ｚｈａｎ９１”，ＹＥＪｉ—ｄａｎ９１”，ＣＨＡＮＧＪｉａｎ－ｂ０１”，
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ｐｒｏｖｉｄｅ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｂｉ０１０９ｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆ２ｓｔｒａｉｎｓｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ
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ｔｈｅｏｒｅｔｉｃｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇｏｏｄｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓｓｔｒａｉｎｓｅｌｅｃｔｉｏｎｆｏｒｇｒｏｕｐｅｒ．【Ｍｅｔｈｏｄ】ＬａｃｔｉｃａｃｉｄａｎｄＳＯＤｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉｎｓＥＡ一１ａｎｄＹ４—２ｆｒｏｍＯｒａｎｇｅ—ｓｐｏｔｔｅｄＧｒｏｕｐｅｒ（Ｅｐｉｎｅｐｈｅｌｕｓｃｏｉｏｉｄｅｓ）ｌａｒｖａｅ，ａｎｄｔｈｅｔｏｌｅｒａｎｃｅｏｆｔｈｅｔｗｏｓｔｒａｉｎｓ
ｔｏ
ｌｏｗｐＨ，ｂ订ｅｓａｌｔ，ｐｒｏｔｅａｓｅａｎｄｈｅａｔｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．【Ｒｅｓｕｌｔ】ＥＡ一１
ａｎｄＹ４—２ｅｘｈｉｂｉｔｅｄｇｏｏｄｌａｃｔｉｃａｃｉｄａｎｄＳＯＤｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙ．Ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｗｏｃｕｌｔｕｒｅｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ａｓ
ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｅｄｅｄ，ＥＡ一１ｐｒｏｄｕｃｅｄｌａｃｔｉｃａｃｉｄｍｏｒｅｒａｐｉｄｌｙ．ＥＡ一１ａｎｄＹ４—２ｐｒｏｄｕｃｅｄｓｔａｂｌｅ
ａｍｏｕｎｔｏｆＳＯＤａｆｔｅｒ２４ｈｏｆｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅａｍｏｕｎｔｏｆＳＯＤｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＥＡ一１ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎＹ４—２ａｆｔｅｒ４８ｈｏｆｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ（Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ
ｃｏｕｎｔｓ
ｏｆＹ４—２ａｎｄＥＡ一１ｗｅｒｅａｂｏｖｅ１０６ｍＬ．１
［收稿日期］［基金项目］［作者简介］［通讯作者］
２００７一０９—１２
国家自然科学基金项目（３０６００４６１）；集美大学科研基金项目（ｃ６０６１６）杨红玲（１９７６一），女，湖北石首人，助教，主要从事水产微生物研究。
孙云章（１９７６一），男，湖北石首人，讲师，博士，主要从事动物消化道微生物研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｕｎｙｕｎｚｈａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃ“
西北农林科技大学学报（自然科学版）
ａｆｔｅｒ４ｈｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔＹ４—２ｗｅｒｅａｂｌｅ
ｔｏ
第３６卷
ａｎｄ
ａｔ
ｐＨ２．５—４．５．Ｙ４—２ｗａｓｍｏｒｅ
ｔｏｌｅｒａｎｔ
ｔｏ
ｌｏｗｐＨｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＥＡ一１．ＥＡ一１
ｃｏｕｎｔｓ
ｓｕｒｖｉｖｅｗｅｌｌｗｉｔｈｉｎ１ｈｉｎｃｕｂａｔｉｎｇｗｉｔｈｌｇ／Ｉ．ｂｉｌｅｓａｌｔ．Ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ
ｏｆＹ４—２ａｎｄ
ＥＡ一１ｗｅｒｅａｂｏｖｅ１。ＯｊｍＩ。一１ｉｎｃｕｂａｔｉｎｇｗｉｔｈ２ｇ／Ｌｂｉｌｅｓａｌｔ，ｗｈｉｃｈｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＹ４～２ａｎｄＥＡ一１ｃｏｕｌｄｔ０１ｅｒ—
ａｔｅ
ｂｉｌｅｓａｌｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｕｎｄｅｒ２ｇ／Ｌ．Ｐｅｐｓｉｎｈａｄｎｅｇａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔ
ｃｏｕｎｔｓ
ｏｎ
ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆＥＡ一１ａｎｄＹ４—２ｓｔｒａｉｎｓ，
ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ
ｏｆＹ４—２ａｎｄＥＡ一１ｗｅｒｅａｂｏｖｅ１０６ｍＩ。＿１ａｆｔｅｒ３０ｍｉｎｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈ４—１０ｇ／ＬＰｅｐ—
ｏｆＹ４—２ａｎｄＥＡ一１
ｔｏ
ｓｉｎ．Ｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌ
ｃｏｕｎｔｓ
ｗｅｒｅａｂｏｖｅ１０６ｍＬ一１ａｆｔｅｒ３０ｍｉｎｏｆｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ａｔ
６０℃，Ｙ４—２
ｗａｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｍｏｒｅｔｏｌｅｒａｎｔｈｉｇｈｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｔｈａｎｔｈａｔｏｆＥＡ—１．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】ＥＡ一１ａｎｄＹ４—２ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ
ｔｏ
ｇｏｏｄｌａｃｔｉｃａｃｉｄａｎｄＳ（）Ｄｐｒｏｄｕｃｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙａｎｄｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄｔｏｌｅｒａｎｃｅｈｅａｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：１ａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ；ｌａｃｔｉｃａｃｉｄ；ｇｒｏｕｐｅｒ；ＳＯＤ；ｔｏｌｅｒａｎｃｅ
ｌｏｗｐＨ，ｂｉｌｅｓａｌｔ，ｐｒｏｔｅａｓｅａｎｄ
石斑鱼是近年来人工育苗成功的一种名贵海水
养殖鱼种，在我国东南沿海已有较大规模的养殖。
购自国药集团化学试剂有限公司。
１．２乳酸含量及超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性的测
定
在石斑鱼的人工养殖过程中，引起高死亡率的各种
细菌性疾病是影响生产的棘手问题。卜２｜。目前，生产中多使用各种抗菌药物来预防和治疗鱼类的细菌性
将ＥＡ一１和Ｙ４—２分别在ＭＲＳ液体培养基中培
养２４ｈ活化，活化的乳酸菌培养液按体积分数５％
疾病，但抗菌药物的大量使用带来的药物残留和出现耐药菌株等问题，已引起了学术界和消费者的高度关注。为此，国内外科学家都致力于各种抗菌药物替代品的研究，其中绿色环保鱼用益生素的研发已成为国际上的研究热点。但是，鱼用益生菌的作
用效果并不稳定，其中一个很重要的原因可能是益
接种到ＭＲＳ液体培养基中，每个菌株设３个重复，２８℃静置培养。分别于培养的０，２４，４８，７２，９６和
１２０
ｈ取培养液样品，按照南京建成生物工程研究
所提供的测定试剂盒说明书测定乳酸含量和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性。ＳＯＤ活性单位定义为：每
ｍｇ组织蛋白在１ｍＬ反应液中Ｓ（）Ｄ抑制率达５０％时所对应的ＳＯＤ量为１个活性单位（Ｕ）。
１．３
生菌的选择不当，目前许多鱼用益生菌株并非分离自鱼类消化道，而是来自于环境或恒温动物。这些
益生菌往往因为不能在鱼类消化道定植或定植的时间太短，难以发挥其益生作用。因此，理想的益生素
ｐＨ值对乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响用１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ调节ＭＲＳ液体培养基ｐＨ值
分别为１．５，２．５，３．５和４．５，以未经调节的ＭＲＳ液体培养基（ｐＨ值６．６）为对照。将ＥＡ一１或Ｙ４—２活化菌种接种至各处理培养基，接种量为体积分数
５％，２８℃静置培养。４ｈ后取上述各处理培养菌液，用３０ｇ／Ｉ。ＮａＣｌ无菌液梯度稀释。取１０＿４～１０＿７稀释度菌液０．２ｍＩ。进行平板计数ｒ７］，每个梯度做２个重复。本研究平板计数试验中均用ＭＲＳ固体培养基，２８℃常规培养。
１．４
菌株最好来自动物自身胃肠道ｐ“。水产养殖中益生菌制剂可以通过养殖水体或饵料投喂进入鱼类胃肠道，益生菌株必须能耐受鱼胃肠道环境的影响（如
胆盐、酸性环境、胃蛋白酶等的影响），方可在鱼胃肠道内大量存活，发挥其益生作用』＿６］。ＥＡ一１和Ｙ４—２
２菌株是笔者从斜带石斑鱼体内分离筛选到的抑菌
能力较强的乳酸菌，为了深入了解这２株菌的生物
学特性，本试验对其产乳酸和超氧化物歧化酶（Ｓ（）Ｄ）的能力及对低酸、高胆汁酸盐、胃蛋白酶、高
温的耐受能力进行了研究，现将结果报道如下。
胆盐对乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响试验设４个不同胆盐处理组（１，２，３和４ｇ／Ｌ），
以不加胆盐（ｏｇ／Ｉ。）的培养基（ｐＨ值６．６）为对照
１材料与方法
１．１１．１．１
组，各处理组培养基均用１ｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ０Ｈ和ＨＣｌ溶液调节ｐＨ与对照组相同。分别接种ＥＡ一１或Ｙ４—２活化菌种于各处理组及对照组培养基中，接种量同１．３节。２８℃条件下静置培养ｌｈ后，取样进
行平板菌落计数。
１．５
材料菌
株
乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２由集美大学
福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室保存，分离自斜带石斑鱼（Ｅ户ｉ聍Ｐ户＾Ｐｚ“ｓｆｏｉｏｉｄＰｓ）仔鱼
体内。
１．１．２
蛋白酶对乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响试验设４个不同质量浓度的胃蛋白酶处理（分
试
剂
胃蛋白酶购自Ｓｉｇｍａ公司；猪胆盐别为４，６，８和ｌＯｇ／Ｌ），以不加蛋白酶（Ｏｇ／Ｌ）的培
第８期杨红玲等：２株鱼源乳酸菌的生物学特性研究
２７
养基（ｐＨ值６．６）为对照，各处理组培养基均用１
ｍｏｌ／Ｌ的Ｎａ０Ｈ和ＨＣｌ溶液调节ｐＨ值与对照组相同。向各处理组及对照组培养基中分别接种ＥＡ一
期（９６和１２０ｈ），ＥＡ一１培养液中的乳酸含量显著高于Ｙ４—２（Ｐ＜Ｏ．０５）。
１或Ｙ４—２活化菌种，接种量同１．３节。２８℃条件下
静置培养３０ｍｉｎ，取样进行平板菌落计数。
ｆ、ｏ
１．６温度对乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响
将活化的乳酸菌菌液按体积分数５％接种于ＭＲＳ液体培养基，取菌液分别于２８（对照），４０，６０
和８０℃处理３０ｍｉｎ，取样进行平板菌落计数。１．７数据处理
ｐ童
重ｉ
耄
０
２４
４Ｓ
７２
９６
１２０
乳酸含量和ＳＯＤ活性数据经Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ
Ｅｘｃｅｌ
时间／ｈ
Ｔｉｍｅ
初步整理后，利用ＳＰＳＳｌｌ．５单因子方差分析中的
Ｄｕｎｃａｎ法进行统计分析。
图１不同培养时间对乳酸菌乳酸含量的影响
２结果与分析
２．１
同一时间点数据标注不同小写字母者表示差异显著（Ｐ＜Ｏ．０５）
Ｆｉｇ．１
Ｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｕｒｉｎｇ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｉｍｅ
Ｖａｌｕｅｓ
ｉｎ
乳酸含量及ＳＯＤ活性随培养时间的变化
由图１可见，菌株ＥＡ一１和Ｙ４—２培养液中的乳
酸含量在９６ｈ内随培养时间的延长呈上升趋势；培
ｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌ
ｌｅｔｔｅｒｓｄｉｆｆｅｒｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜Ｏ．０５）
养７２ｈ后２株菌乳酸产量明显上升，但ＥＡ一１产乳酸速度较快，乳酸含量在９６ｈ左右达到最大值，此后下降，这可能是由于随培养时间的延长，乳酸菌逐渐衰老，生长能力下降，此前产生的乳酸为乳酸菌本身代谢所利用，导致培养液中乳酸含量下降；培养后
表１
Ｔａｂｌｅ１
由表１可知，在整个培养过程中，ＥＡ一１和Ｙ４—２
各自产生的ＳＯＤ活性比较稳定，差异不显著；培养
２４ｈ时，ＥＡ一１与Ｙ４—２菌株的ＳｏＤ活性差异不显
著，培养４８ｈ后（包括４８ｈ），ＥＡ一１培养液中的ＳＯＤ
活性显著高于Ｙ４—２（Ｐ＜Ｏ．０５）。
不同培养时间对乳酸菌ＳＯＤ活性的影响
ａｔ
ＳＯＤａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ１ａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅ“ａ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｔｉｍｅ
Ｕ／ｍＬ
注：同列数据后标不同小写字母者表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。
Ｎｏｔｅ：ｖａｌｕｅｓ
ｉｎｔｈｅ
ｓａｍｅｃｏｌｕｍｎｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｄｉｆｆｅｒ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜Ｏ．０５）
２．２
ｐＨ值对ＥＡ一１、Ｙ４—２存活的影响
由表２可知，ＥＡ一１在ｐＨ为１．５时存活数低于
说明ＥＡ一１对ｐＨ２．５以上酸性环境有一定耐受性；Ｙ４—２在ｐＨ≥１．５时，存活数≥１．５×１０７ｍＬ～，说
明Ｙ４—２对低酸环境具有较好的耐受性，其对低酸环境的耐受能力较ＥＡ一１强。
５．Ｏ×１０４ｍＬ～，说明ＥＡ一１对ｐＨ１．５耐受性差；在
ｐＨ≥２．５时ＥＡ一１的存活数维持在１０６ｍＬ－１以上，
表２乳酸菌在不同ｐＨ值条件下的存活数
Ｔａｂｌｅ２
Ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｃｏｕｎｔｓ
ｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐＨ
ｍＩ。一１
２．３
胆盐质量浓度对ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响由表３可知，在胆盐质量浓度为１ｇ／Ｌ时，ＥＡ一
ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活数量仍维持在１０５ｍＬ－１以上，
提示ＥＡ一１和Ｙ４—２对≤２ｇ／Ｌ的胆盐具有一定的耐
１和Ｙ４—２的存活数均较高，分别为１．Ｏ×１０７
ｍＬ叫
受性；当胆盐质量浓度≥３ｇ／Ｌ时，２株菌存活数均
低于５．Ｏ×１０４ｍＬ～。
和５．０×１０６ｍＬ～，当胆盐质量浓度达到２ｇ／Ｌ时，
２８
西北农林科技大学学报（自然科学版）第３６卷
２．４
胃蛋白酶对ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响
由表４可知，胃蛋白酶对ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活
ｍｉｎ后，ＥＡ—ｌ和Ｙ４—２的存活数均在１０６ｍＩ。一１以
上，说明ＥＡ一１和Ｙ４—２对胃蛋白酶有一定的耐受
性。
有一定的影响，经４～１０ｇ／Ｌ的胃蛋白酶处理３０
表４乳酸菌在不同胃蛋白酶质量浓度下的存活数
Ｔａｂｌｅ
４
Ｓｕｒｖｉｖａｌ
ｃｏｕｎｔｓ
ｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｅｐｓｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ
ｍＩ。一１
２．５温度对ＥＡ一１和Ｙ４—２存活的影响
由表５可知，ＥＡ—ｌ和Ｙ４—２活菌数随着处理温
℃时ＥＡ—ｌ和Ｙ４—２的存活数≥１０６ｍＬ～；８０℃时，Ｙ４—２存活数维持在５．ｏｘｌ０６ｍＬ～，而ＥＡ一１存活数低于５．Ｏ×１０４ｍＩ。～，提示Ｙ４—２对高温的耐受能
力较ＥＡ一１强。
度的升高而下降，４０℃时ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活数均较高，分别为１．９×１０８ｍＬ叫和５．Ｏ×１０９
Ｔａｂｌｅ５
ｍＬ～；６０
表５乳酸茵在不同温度下的存活数
Ｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄ
ｂａｃｔｅｒｉａｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ
ｍＩ。
３讨论
３．１
能在培养２４ｈ后产生一定量的Ｓ（）Ｄ，因此作者推
测，ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株可增强动物的免疫功能，提高
动物的抗病力。
３．２
乳酸菌产乳酸及Ｓ（）Ｄ能力
乳酸菌能分泌各种抑菌物质抑制病原微生物增殖，其中乳酸是最常见的抑菌物质之一［３’８］。乳酸菌在肠道大量繁殖，产生的乳酸可降低消化道ｐＨ值，从而抑制病原菌的生长和繁殖［９］。本试验以２株抑菌能力较强的鱼源乳酸菌ＥＡ—ｌ和Ｙ４—２为研究对象，测定了其培养液中乳酸含量，结果表明，２株乳
酸菌均具有较强的产乳酸能力，且培养液中的乳酸含量在９６ｈ内随培养时间延长呈上升趋势，因此作
乳酸菌的环境耐受能力
水产养殖中，益生菌菌株进入鱼胃肠道后必须能耐受鱼胃肠道环境因素，如胃肠道酸性环境、胆盐、胃蛋白酶等的作用，方可在胃肠道内存活，发挥其益生作用［５“］。海水鱼胃内的ｐＨ值在２．ｏ～４．ｏ，这种低ｐＨ值环境对乳酸茵有很大的抑制作用¨３。。本试验研究了乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２在ｐＨ值１．５～４．５低酸环境中的存活情况。结果表明，乳酸菌
ＥＡ一１和Ｙ４—２经ｐＨ２．５～４．５处理４ｈ后，存活数分别维持在１０６ｍＬ－１和１０７ｍＬ叫以上，表明大部分的ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株有望顺利通过鱼胃；经ｐＨ
者推测这２株乳酸菌可能具有良好的应用前景。
超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是一种重要的抗氧化酶，可清除体内自由基，保护细胞免受损害，使细胞能正常合成各种酶类，对增强吞噬细胞活性和整个机体的免疫功能具有重要作用¨…。当ＳＯＤ活性降低时，生物体内自由基积累，导致生理功能失调，免疫水平下降，容易发生疾病Ⅲ］。有研究表明，益生菌能刺激机体使ＳＯＤ活性上升，从而增强机体非特异性免疫功能，但有关益生菌自身产生ＳＯＤ的报道
很少［３’１２｜。本试验结果显示，ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株均
１．５处理后，Ｙ４—２存活数量为１．５×１０７ｍＩ。～，而ＥＡ一存活数低于５．０×１０４ｍＬ～。因此，相对于ＥＡ一
１菌株，Ｙ４—２菌株对低酸环境的耐受能力更强，通过鱼胃进入肠道的可能性更大。
除耐受胃内的低酸环境外，益生菌还需具备耐受小肠中胆盐等形成的高渗透压环境的能力，所以对胆盐的耐受性也是筛选益生菌的一个重要指标。
第８期杨红玲等：２株鱼源乳酸菌的生物学特性研究
有研究表明，乳酸菌具有一定的胆盐耐受能力［１３‘１引。本试验中，乳酸菌Ｙ４—２和ＥＡ一１在１ｇ／Ｌ胆盐质量浓度条件下存活数均较高；当胆盐质量浓度达到２ｇ／Ｌ时，ＥＡ一１和Ｙ４—２的存活数仍维持在１０５
ｍＬ叫
以上，提示ＥＡ一１和Ｙ４—２对≤２ｇ／Ｌ的胆盐具有一
定的耐受性。虽然目前缺乏海水鱼肠道内胆盐质量
浓度的数据，但鱼胆囊内胆盐含量在２～１０
ｇ／Ｌ［１５。１引，进入肠道被稀释，肠道内胆盐质量浓度要
远低于胆囊内胆盐含量。由此而知，ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株能否耐受鱼肠道胆盐的影响，在鱼肠道内存活，尚需进一步研究。
益生菌除要能耐受低酸和高胆盐环境外，还必
须能耐受胃肠道蛋白酶的降解。据报道，当ｐＨ值
高于２．５时，含１０ｇ／Ｌ胃蛋白酶的人工胃液对乳酸
菌存活的影响很小［１７｜。本试验结果表明，胃蛋白酶对乳酸菌ＥＡ～１和Ｙ４—２的存活有一定的影响，但经
４～１０ｇ／Ｌ的胃蛋白酶处理后，ＥＡ一１和Ｙ４—２的存
活数均维持在１０６ｍＩ。一１以上，说明ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株对胃蛋白酶的耐受能力较强。因此，Ｙ４—２和ＥＡ一１菌株有望能抵御胃蛋白酶的降解，在胃肠道中保持较高的存活率，发挥益生作用。
通过饵料投喂动物，益生菌须能耐受饵料加工
时的高温。据报道，乳酸菌通常不能耐受高温，经８０℃处理５～１５ｍｉｎ后存活数低于１．Ｏ×１０４
ｍＬ＿１［１８］。本试验中，ＥＡ一１和Ｙ４—２菌株经６０℃处理３０ｍｉｎ后存活数≥１０６ｍＬ～，经８０℃处理３０
ｍｉｎ后，Ｙ４—２存活数维持在５．Ｏ×１０６
ｍＬ－１，而ＥＡ一１
存活数低于５．０×１０４ｍＬ一。表明，ＥＡ一１和Ｙ４—２
菌株均具有一定的热耐受性，Ｙ４—２对高温的耐受能
力更强，有望耐受饲料加工过程中的高温。
本研究结果表明，鱼源乳酸菌ＥＡ一１和Ｙ４—２产乳酸和Ｓ（）Ｄ能力较强，且对低ｐＨ值、高胆盐、胃蛋
白酶和高温具有一定的耐受能力，有望能在鱼胃肠道中存活并发挥其益生作用，有进一步研究开发的价值。
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ｃｈａｒｉｄｅ
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ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ
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2株鱼源乳酸菌的生物学特性研究
作者：作者单位：
杨红玲， 孙云章， 叶继丹， 常建波， 陈政强， 林文燕
杨红玲,陈政强,林文燕(集美大学,水产学院,福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,福建,厦门,361021)， 孙云章,叶继丹,常建波(集美大学,水产学院,福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室,福建,厦门,361021;集美大学,水产学院,厦门市饲料检测与安全评价重点实验室,福建,厦门,361021)
西北农林科技大学学报(自然科学版)
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刊名：英文刊名：年，卷(期)：
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