蛋白定量分析实验

实验(一) 双缩脲法测定蛋白质含量

一.实验原理

双缩脲在碱性溶液中可与铜离子产生紫色络合物,这一反应称为双缩脲反应,因为蛋白

质中含有多个肽键,也能与铜离子发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质含量在一定范围内成正相关,而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关,所以可用双缩脲法测定蛋白质含量。

(0.248-0.0068)÷0.0704×1000=3.43g 100ml样品中蛋白质的克数为3.43g 三.实验分析

未能准确量取各个试剂,水浴后未能完全降到室温,且此实验方法不敏感导致实验结果

出现一定偏差。

实验(二) 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

一.实验原理

考马斯亮蓝G-250和蛋白质通过范德华力结合,最大吸收峰由465nm变为595nm,颜

色由红色变为蓝色,测定959nm处的光吸收的增加量可知与其结合的蛋白质的量。 0.494÷0.489×500=505.112μg/ml

样品蛋白质含量为505.112μg/ml 三.实验分析

未能准确量取各个试剂,且配制好各个管中的溶液后放置时间过长导致测得样品蛋白质

含量偏小。

实验(三) 紫外分光光度法测定蛋白质含量

一.实验原理

蛋白质分子中含有的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白

质具有吸收紫外光的性质,吸收高峰在280nm波长处。各蛋白质所含芳香族氨基酸的量相差很少,所以在此波长范围内吸收峰的吸光度值与其浓度成正比,可做定量测定。各蛋白质中芳香族氨基酸含量不同,所以此法适用于测定与所用的标准蛋白质的氨基酸组成相似的蛋白质。

(0.287+0.0093)÷1.0112×4=1.17mg/ml 样品蛋白质含量为1.17mg/ml 三.实验分析

未能准确量取各个试剂导致实验结果出现一定偏差。

实验(一) 双缩脲法测定蛋白质含量

一.实验原理

双缩脲在碱性溶液中可与铜离子产生紫色络合物,这一反应称为双缩脲反应,因为蛋白

质中含有多个肽键,也能与铜离子发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质含量在一定范围内成正相关,而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关,所以可用双缩脲法测定蛋白质含量。

(0.248-0.0068)÷0.0704×1000=3.43g 100ml样品中蛋白质的克数为3.43g 三.实验分析

未能准确量取各个试剂,水浴后未能完全降到室温,且此实验方法不敏感导致实验结果

出现一定偏差。

实验(二) 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

一.实验原理

考马斯亮蓝G-250和蛋白质通过范德华力结合,最大吸收峰由465nm变为595nm,颜

色由红色变为蓝色,测定959nm处的光吸收的增加量可知与其结合的蛋白质的量。 0.494÷0.489×500=505.112μg/ml

样品蛋白质含量为505.112μg/ml 三.实验分析

未能准确量取各个试剂,且配制好各个管中的溶液后放置时间过长导致测得样品蛋白质

含量偏小。

实验(三) 紫外分光光度法测定蛋白质含量

一.实验原理

蛋白质分子中含有的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白

质具有吸收紫外光的性质,吸收高峰在280nm波长处。各蛋白质所含芳香族氨基酸的量相差很少,所以在此波长范围内吸收峰的吸光度值与其浓度成正比,可做定量测定。各蛋白质中芳香族氨基酸含量不同,所以此法适用于测定与所用的标准蛋白质的氨基酸组成相似的蛋白质。

(0.287+0.0093)÷1.0112×4=1.17mg/ml 样品蛋白质含量为1.17mg/ml 三.实验分析

未能准确量取各个试剂导致实验结果出现一定偏差。


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