姓名系年级 09级 组别同组者
科目 细胞生物学实验 题目 小鼠肝脏细胞线粒体的超活染色与观察
一、实验目的：
1、观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
2、学习细胞器的超活染色技术。
二、实验原理：
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方
法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与
体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电
化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带
阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就
发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B （Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器
官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这
是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
三、实验试剂及器材：
1、器材：显微镜、双凹片、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、吸管、小烧杯等
2、试剂：Ringer 溶液、1%、1/5000詹纳斯绿B 溶液
3、实验材料：小鼠肝脏活细胞
四、实验步骤：
1、用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的
肝组织一小块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer 液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳绿B 溶液，再将肝组织
块移人染液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，
这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成(一般需染20~30min)。
3、吸去染液，滴加0.5mlRinger 溶液，用眼科剪将组织块着色部分剪碎，使
细胞或细胞群散出。然后，用吸管吸取分离出的细胞悬液，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片进行观察。
4、在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜或油镜下观察，可见具有1～
2个核的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布状况。
五、实验结果及分析：
线粒体詹纳斯绿B 染色（10×40） 线粒体詹纳斯绿B 染色局部放大图（10×40） 肝脏细胞 (内含线粒体
) 红细胞
染色后在40倍镜下观察发现圆形大个细胞，即为肝细胞，内含被染成蓝绿色的线粒体；小个有凹凸感的为红细胞，不含线粒体。因分散细胞时过于剧烈，多数细胞破碎导致线粒体分散于悬液中，完整肝细胞数目不是很多，观察时需在镜下仔细搜寻。
六、实验总结：
1、取肝脏块大小应适当（半个绿豆粒大小）
，染色时，要保持组织块部分露于空
气中，以保持细胞活性，使染色充分。
2、染色过程中要注意按时滴加染液，防止染色液挥发影响染色效果。
3、染色前使用Ringer 液浸泡组织块时，应充分冲洗，以保证血液完全渗出，避免红细胞影响观察。
4、制片之前要将组织块尽量剪碎分散，以保证较好的观察效果。
姓名系年级 09级 组别同组者
科目 细胞生物学实验 题目 小鼠肝脏细胞线粒体的超活染色与观察
一、实验目的：
1、观察动物活细胞内线粒体的形态、数量与分布。
2、学习细胞器的超活染色技术。
二、实验原理：
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方
法。它的目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。
根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与
体外活染两类。体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部位，主要是染料的“电
化学”特性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带
阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子的，这样，它们彼此之间就
发生了吸引作用。但不是任何染料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它们具有溶解在类脂质（如卵磷脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B （Janus green B）和中性红（neutral red）两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器
官和不同的生理状态而发生变化。
詹纳斯绿B 是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这
是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态（即有色状态），呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基（即无色状态）。
三、实验试剂及器材：
1、器材：显微镜、双凹片、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、吸管、小烧杯等
2、试剂：Ringer 溶液、1%、1/5000詹纳斯绿B 溶液
3、实验材料：小鼠肝脏活细胞
四、实验步骤：
1、用断头法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的
肝组织一小块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer 液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。
2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1/5000詹纳绿B 溶液，再将肝组织
块移人染液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面部分半露在染液外，
这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成(一般需染20~30min)。
3、吸去染液，滴加0.5mlRinger 溶液，用眼科剪将组织块着色部分剪碎，使
细胞或细胞群散出。然后，用吸管吸取分离出的细胞悬液，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片进行观察。
4、在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜或油镜下观察，可见具有1～
2个核的肝细胞质中，有许多被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布状况。
五、实验结果及分析：
线粒体詹纳斯绿B 染色（10×40） 线粒体詹纳斯绿B 染色局部放大图（10×40） 肝脏细胞 (内含线粒体
) 红细胞
染色后在40倍镜下观察发现圆形大个细胞，即为肝细胞，内含被染成蓝绿色的线粒体；小个有凹凸感的为红细胞，不含线粒体。因分散细胞时过于剧烈，多数细胞破碎导致线粒体分散于悬液中，完整肝细胞数目不是很多，观察时需在镜下仔细搜寻。
六、实验总结：
1、取肝脏块大小应适当（半个绿豆粒大小）
，染色时，要保持组织块部分露于空
气中，以保持细胞活性，使染色充分。
2、染色过程中要注意按时滴加染液，防止染色液挥发影响染色效果。
3、染色前使用Ringer 液浸泡组织块时，应充分冲洗，以保证血液完全渗出，避免红细胞影响观察。
4、制片之前要将组织块尽量剪碎分散，以保证较好的观察效果。