步骤1. 目标基因全基因合成：
1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因，我们免费提供给客户。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化，密码子优化。
3. 合成设计好的基因序列。
步骤2. 目标基因亚克隆：
1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 提供如下表达载体：提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选：
1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
5. 可提供表达菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
步骤4. 目标蛋白表达及纯化：
1. 摇瓶培养1L重组细菌，诱导表达目标蛋白。
2. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
提供给客户：纯化好的目标蛋白1-5mg及纯化报告。
实验具体收费、标本的收集、实验试剂的定购等事宜，请联系嘉美生物。
实验预约热线：400-698-4168 010-58464308 010-58464306
实验预约邮箱：[email protected] [email protected]
中国生命科学实验技术服务、定制高端平台——嘉美生物实验技术中心
嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,磷酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司。
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1. 从基因库中搜索目标蛋白的cDNA序列。如果我们的cDNA文库中有这个基因，我们免费提供给客户。
2. 根据选用的表达系统对cDNA进行密码子优化，密码子优化。
3. 合成设计好的基因序列。
步骤2. 目标基因亚克隆：
1. 扩增并抽提含有目标基因的载体质粒。
2. 将目标基因亚克隆到合适的表达质粒上。
3. 测序验证构建质粒的准确性。
4. 提供如下表达载体：提供给客户：正确构建的重组表达质粒，含重组质粒的DH5α菌株及测序报告。
步骤3. E. coli表达菌株转化及筛选：
1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。
2. 将表达质粒转化到高效的E.Coli表达菌株中。
3. 至少挑选5个阳性克隆于LB培养基中扩增并诱导表达目标蛋白。
4. SDS-PAGE电泳检测培养后中目标蛋白的表达情况，并挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。
5. 可提供表达菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami。
提供给客户：重组质粒的表达菌株及表达检测报告。
步骤4. 目标蛋白表达及纯化：
1. 摇瓶培养1L重组细菌，诱导表达目标蛋白。
2. 通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签，再纯化获得所需的目标蛋白（可选，构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点）。
4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5. 通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
提供给客户：纯化好的目标蛋白1-5mg及纯化报告。
实验具体收费、标本的收集、实验试剂的定购等事宜，请联系嘉美生物。
实验预约热线：400-698-4168 010-58464308 010-58464306
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