一种多酚氧化酶提取新方法与几种常规方法的比较研究

安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ

ｏｆＡｎｈｕｉ

Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．２０１３，４１（２２）：９４１８—９４２０

责任编辑李菲菲责任校对卢瑶

一种多酚氧化酶提取新方法与几种常规方法的比较研究ｇｅｎｔ，９４：－凤，刘薇薇，李彦阳，沈明浩＋

（吉林农业大学食品质量与安全实验室，吉林长春１３０１１８）

摘要［目的］对一种新的多酚氧化酶的提取方法与几种常用提取方法的综合效果进行比较。［方法］以苹果梨为研究对象，对匀浆法、

匀浆吸附法、匀浆后丙酮抽提法、丙酮粉法、丙酮抽提后吸附法这５种多酚氧化酶提取方法所得酶液进行了多酚类化合物残余、总酶活

及酶的稳定性的比较。同时，还对几种氨基酸对酪氨酸酶的抑制情况进行了检测。［结果］试验得出，以改进的丙酮抽提后吸附法所得

酶液多酚残余少，总活力保持良好，为几种方法中最佳的提取方法。谷胱甘肽、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸对酪氨酸酶的活力均有抑制作用，其庀。值分别为（Ｏ．４８±０．０２８）、（０．５９４－０．０３２）、（０．３７４－０．０１６）和（１．８７±Ｏ．０８７）ｍｍｏｌ／Ｌ。［结论］研究可为多酚氧化酶的相关研究提供参考。关键词

多酚氧化酶；提取方法；总活力；稳定性

中图分类号Ｓ１８８＋．３

文献标识码Ａ

文章编号０５１７—６６１１（２０１３）２２—０９４１８—０３

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ｍｍｏｌ／Ｌ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＩＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｓｔｄｕｙｃａｎｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｒｅｌａｖａｎｔｒｅｓｅａｒｃｈ

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ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ：Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ：Ｔｏｔａｌａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ

在水果，蔬菜的采摘、运输、储藏、加工处理等过程中均酪氨酸酶的抑制情况进行了检测，希望对ＰＰＯ的相关研究有会发生褐变，使其颜色、味道、质量、营养价值改变¨‘３－，造成所帮助。了很大的经济损失。引起果蔬褐变的主要原因是多酚氧化１材料与方法

酶的作用。多酚氧化酶（ＥＣ１．１４．１８．１和ＥＣ

１．１０．３．１，

１．１材料苹果梨，购自延吉市水果批发市场。丙酮，国产ＰＰＯ）是一种铜依赖酶，催化单酚类羟基化为二元酚，再催化分析纯；ＰＶＰＰ（聚乙烯吡咯烷酮）、邻苯二酚，美国ＳＩＧＭＡ公二元酚为相应的醌类Ｈｏ。醌类是较强的亲电子分子，可以聚司；谷胱甘肽、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸，日本ＴＣＩ公司。合为黑色或棕色的色素口。。ＰＰＯ在大多数果蔬中存在。果所用紫外分光光度计为岛津ＵＶ一１８００，日本岛津公司。蔬在剥皮、切片、擦伤，或是病变组织接触氧气后非常容易发１．２方法

生褐变。使用电子和荧光显微镜观测到果蔬被切开，细胞结１．２．１多酚氧化酶的提取。

构被破坏导致ＰＰＯ酶和它的酚类底物的释放∞。。许多水果１．２．１．１匀浆法。３０ｇ样品加４℃预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ和蔬菜的质量受该生物学反应影响，产生异味、变色、营养价７．３）４０ｍｌ，匀浆、搅拌、静置，反复几次，４ｃｃ下１５０００ｒ／ｍｉｎ

值降低。因此，对这些果蔬的褐变进行抑制，保持果蔬的色离心１５ｎｌｉｎ，取上清液于４℃冰箱保存备用’７“１。

泽、质量、提高储藏时间成为人们关注的重点。不管是对果１．２．１．２匀浆吸附法。３０ｇ样品加４℃预冷的含２％的蔬中ＰＰＯ进行性质、抑制剂的研究，还是对生理功能、基因克

ＰＶＰＰ的磷酸缓冲液（ｐＨ７．３）４０“，匀浆，搅拌０．５ｈ，静置，隆等方面的研究，都需要将多酚氧化酶从物体中分离纯化出

反复几次，４℃下１５０００

ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ。取上清液于４℃

来。ＰＰＯ的常用提取方法有许多种，包括匀浆法、匀浆吸附冰箱保存备用一一。

法、匀浆后丙酮抽提法及丙酮粉法。但这些方法多酚类残余１．２．１．３匀浆后丙酮抽提法。３０ｇ水果用匀浆法提取的粗比较多，残留的酚类会与底物竞争性的与酶结合，影响多酚酶液缓慢加入２．５倍体积的冷冻丙酮（一２０℃），４℃下

氧化酶酶活测定的准确性。笔者在这些方法的基础上，创建

１５０００

ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，将沉淀物溶于０．２ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓

了一种新的多酚氧化酶的提取方法——丙酮抽提后吸附法。

冲液（ｐＨ７．３）４０ＩＩｌｌ中，再次离心，取上清液于４℃冰箱保以苹果梨为目标，对新方法与几种常用方法的多酚类化合物

存备用¨…。

残余、总酶活及酶的稳定性进行了比较，还对几种氨基酸对

１．２．１．４丙酮粉法。３０ｇ样品加人４０ｍ１冷冻的丙酮（一

２０℃）匀浆。所得的匀浆用布氏漏斗垫滤纸抽滤，滤饼再

基金项目

吉林省科技厅项目（２００９０５５３）；吉林省教育厅项目（吉教科

合字［２０１１］第３５号）。

用冷冻丙酮多次提取、抽滤至无色，得到粗酶粉末，将粉末作者简介毕云枫（１９７６一），男，吉林白城人，讲师，博士，从事酶学及

放人通风橱中通风处理，除去丙酮之后，干粉以１：８（形：ｙ）酶分子生物学研究，Ｅ—ｍａｉｌ：Ｙｕｎｆｅｎ９５６０９＠ｓｏｈｕ．ｃｏｎ、｝通

讯作者。

的比例溶于０．２ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲溶液（ｐＨ７．３），搅拌１０收稿１３期２０１３－０６－２４

ｒａｉｎ，在４℃下１５

０００

ｒ／ｍｉｎ离心１５ｒａｉｎ，取上清液于４℃冰

万方数据

４ｌ卷２２期

毕云枫等一种多酚氧化酶提取新方法与几种常规方法的比较研究

９４１９

箱保存备用…““。

１．２．１．５丙酮抽提后吸附法。３０ｇ样品按匀浆后丙酮抽提法所得的沉淀物在４℃下再加入含２％的ＰＶＰＰ的磷酸缓冲液（ｐＨ７．３）４０Ｉｌｌｌ，搅拌０．５ｈ，静置，反复几次，在４℃下

１５０００

ｒ／ｒａｉｎ离心１５ｍｉｎ，取上清液于４℃冰箱保存备用。

各提取方法均平行做３次，所得酶液用ＰＥＧ２０００浓缩至

２０

ｌｌｌｌ于４ｏＣ冰箱保存备用。

匀浆法

丙酮丙酮匀装匀浆后

吸附法丙§回抽粉法抽提后

提法吸附法

１．２．２酶的紫外吸光度测定。将各提取方法得到的酶用磷

酸缓冲液（ｐＨ７．３）定容至相同的体积后在波长４２０ｎｍ处测

定吸光度。

提取方法

图ｌ∞鲫∞如加

０

１．２．３酶的总活力测定。酶活力测定以邻苯二酚为底物，

用紫外分光光度计测定波长４２０ｎｍ下的酶促反应液的吸光度变化，酶活力单位定义为单位时间（ｍｉｎ），单位体积（“）的酶反应液引起的０．０１ＯＤ的吸光度变化。计算各提取方

几种提取方法所得粗酶的紫外吸光度百分比

法所得酶液的总活力。

１．２．４酶的稳定性测定。各提取方法所得酶液浓缩后立即测定活力，然后放置室温每隔１ｄ测定残余活力。

１．２．５

抑制剂对酶活力的影响。０，０．１、０．５、１．０、２．０、５．０

ｍｍｏｌ／Ｌ的谷胱甘肽、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸加入丙酮

抽提后吸附法所得酶液混合２ｍｉｎ后，加入底物邻苯二酚开始反应。每个浓度做３个平行样品。２结果与分析

２．１

匀浆法

丙酮匀浆匀浆后丙酮

吸附法丙酮抽粉法抽提后

提法吸附法

提取方法

酶的紫外吸光度百分比酶液的吸光度反映了提取

图２几种提取方法所得粗酶的总活力百分比

酶液的纯度和酶液中多酚类物质的剩余程度【１…。几种提取方法所得的粗酶液的紫外吸光度比值见图ｌ，以匀浆法吸光度最高，以其为１００％，则匀浆吸附法为７０．２３％，而匀浆后丙

酮吸附法、丙酮粉法、丙酮抽提后吸附法的吸光度分别为匀浆法的３５．１３％、１０．１７％、１１．２２％。各提取物中的吸光物质为苹果梨中所含的多酚类物质以及在提取过程中ＰＰＯ催化这些多酚类的氧化产物。由此可见，匀浆法最为简单，但其

在室温的稳定性变化，从中可见匀浆法和匀浆吸附法所得酶液最不稳定，尤其是在前６ｄ，活力下降比较快，第６天时的残余活力只有初提时的２３．５％和２５．１％，６ｄ后活力下降速

度变缓，８ｄ时只有１０％左右；其他方法所得酶液在前６ｄ变化比较缓慢，６ｄ时仍能保持７０％左右，然后快速下降，但依然比前２种方法残余活力高。由此可见，采用匀浆后丙酮抽提法、丙酮粉法和丙酮粉后吸附法所提取的酶的稳定性都较匀浆法和匀浆吸附法好。

中所残余的多酚类及其催化产物最多。ＰＶＰＰ虽然是很好的

多酚类吸附剂，但仍然不能吸附完全；丙酮由于不能溶解

ＰＰＯ但能很好地溶解多酚类及其产物，所以能很好地去除酚类成分。所以匀浆后丙酮抽提法多酚类残余比较少，只有匀

浆法的３５．１３％。丙酮粉法经丙酮多次提取，吸光度比较低，多酚类残余最少。而丙酮抽提后吸附法吸光度只比丙酮粉

法高１％，其残余的酚类也非常少。

２．２各酶液的总活力百分比

图２为各种提取方法的总酶

活力百分比，其中以匀浆法（１００％）的总活力最高，匀浆吸附法为９８．６１％，匀浆后丙酮抽提法为９４．４６％，丙酮粉法为

５１．５８％，丙酮抽提后吸附法为８９．４７％。其中以丙酮粉法得到的酶的总活力降低最多，接近一半。而其他３种方法提得的酶的总活力降低的很少，丙酮抽提后吸附法仅仅降低了近

１０％，活力保持的很好。有报道证明，丙酮粉法所提酶的酶学性质发生改变，并且活力降低¨“。而匀浆后吸附法因在匀浆后丙酮抽提过程中，缓冲液很好地对酶的结构进行了保护，所以活力损失较小。２．３酶的残余活力百分比

图３为各种提取方法所得酶液

图３

２．４

ＰＰＯ室温保存残余活力变化

４种氨基酸对多酚氧化酶活力的影响

谷胱甘肽、谷

氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸均对苹果梨的ＰＰＯ有抑制作用（表１），其中半胱氨酸的抑制能力最强，其，ｃ。值为（０．３７±０．０１６）ｍｍｏｌ／Ｌ；谷胱甘肽和谷氨酰胺的对苹果梨的ＰＰＯ也有较强的抑制作用，其，Ｃ。值分别为（０．４８－４－０．０２８）和（０．５９

±０．０３２）ｎｕｎｏｌ／Ｌ。谷氨酸对苹果梨的ＰＰＯ抑制能力最弱，

，ｃ。值只有（１．８７±０．０８７）ｍｍｏｌ／Ｌ。

万方数据

９４２０

安徽农业科学

２０１３盎

表１４种氨基酸对酪氨酸酶活力的影响ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇｏｖｅｒａｌｌ

ｑｕａｌｉｔｙｏｆｆｒｅｓｈ—ｃｕｔｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅａｒｉｌｓ［Ｊ］．ＪＳｅｉＦｏｏｄ

Ａｇｒｉｃ，２０１３．９３（５）：１１６２—１１６８．

［３］邓清云，刘海杰，张芋，酸性电解水对鲜切马铃薯酶促褐变抑制效果研究【Ｊ］．食品科技，２０１２（１０）：３５—３８．

［４］ＫＡＶＲＡＹＡＮＤ，ＡＹＤＥＭＩＲＴ，Ｐａｒｔｉａｌｐｕｒｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ

ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅｆｒｏｍｐｅｐｐｅｒｍｉｎｔ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，７４：１４７—

１５４．

ｆ５］ＤＥＧＬ’ＩＮＮＯＣＥＮＴＩＥ，ＧＵＩＤＩＬ．ＰＡＲＤＯＳＳＩＡ，ｅｔａ１．Ｂｉｃｃｈｅｍｉｃａｔｓｔｕｄｙｏｆ

ｌｅａｆｂｒｏｗｎｉｎｇｉｎｍｉｎｉｍａｌｌｙ

３结论

ｐｒｅｃｅｓｓｅｄｌｅａｖｅｓｏｆｌｅｔｔｕｃｅ（Ｌａｃｔｕｃａｓ以ｉｖａＬ．

ｖａｒ．ａｃｅｐｈａｌａ）［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，５３（２６）：９９８０—９９８４．

试验结果可以看出，几种提取方法中匀浆法简单但多酚类残留多，影响酶活，并且不稳定；匀浆吸附法中也有大量的

酚类残余；匀浆后丙酮抽提法所得总酶活力比较高，但多酚类残留仍达到３５％；丙酮粉法所得酶溶解性不好，活力低。

［６］ＭＩＳＨＲＡＢＢ，ＧＡＵＴＡＭＳ，ＳＨＡＲＭＡＡ．Ｂｒｏｗｎｉｎｇｏｆｆｒｅｓｈ—ｃｕｔｅｇｇｐｌａｎｔ：

Ｉｍｐａｃｔｏｆｃｕｔｔｉｎｇａｎｄｓｔｏｒａｇｅ［Ｊ］．ＰｏｓｔｈａｒｖｅｓｔＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，

２０１２，６７：４４—５１．

［７］李君兰，李怡华，赵秋玲，等．鸡腿蘑多酚氧化酶特｝生研究［Ｊ］．食品科

学，２００７。２８（１）：１８７—１９１．

８

ＭＩ—ＪＥＯＮＧＫ，ＣＨＯＯＮ

ＹＫ，ＩＮＳＨｌＫＰ．Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅｓｉｎ

Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ

而笔者改进的丙酮抽提后吸附法结合了匀浆法与丙酮粉法

的优点，所得的酶液多酚类残留少，总活力高，酶的稳定性也

ａｒｔｉｃｈｏｋｅｌＪ１．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，８９：１８１—１８４．

［９］张立华，孙晓飞，张艳侠，等．石榴多酚氧化酶的某些特性及其抑制剂

的研究［ｊ］．食品科学，２１３０７，２ｓ（ｓ）：２１６—２１９．［１０］程建军．苹果梨中多酚氧化酶酶反应动力学和反应进程的研究［Ｊ］．

食品科学，２００２，２３（８）：６９－７１．

［１１］郝慧英，赵光鳌，徐岩，等．苹果中多酚氧化酶的性质［Ｊ］．无锡轻工大

高，所用试剂价格经济，是几种方法中最佳的提取方法。谷胱甘肽、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸均对苹果梨的ＰＰＯ有抑制作用，其中半胱氨酸的抑制能力最强，其次为谷胱甘肽和谷氨酰胺，谷氨酸对苹果梨的ＰＰＯ抑制能力最弱。

参考文献

［１］ＬＯＰＥＺ—ＲＵＢＩＲＡ

ｑｕａｌｉｔｙｏｆ

Ｖ，ＣＯＮＥＳＡＡ，ＡＬＬＥＮＤＥＡ，ｅｔａ１．Ｓｈｅｌｆｌｉｆｅ

ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ

ａｒｉｌｓ

ｍｏｄｉｆｉｅｄ

学学报，２瞄，２２（１）：７—１１．

『１２１

ＳＥＧＯＶＩＡ．ＢＲＡＶＯＫＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｕｍｐａｅａ

Ａ，ＪＡＲＥＮ．ＧＡＬＡＮＭ，ＧＡＲｄＡ．ＧＡＲＣＩＡＰ，ｅｔａ１．ｐｅｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅｆｒｏｍｔｈｅｍａｎｚａｎｉｌｌａｃｕｈｉｖａｒ（Ｏｌｅａ

ａｎｄｏｖｅｒａｌｌ

ａｔｍｏｓｐｈｅｒｅ

ｐｏｍｉｆｏｎｎｉｓ）ａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆｂｒｏｗｎｉｎｇｒｅａｃｔｉｏｎｓｉｎｂｒｕｉｓｅｄｏｌ—

ｉｒｅｆｒｕｉｔｓｌＪＩ．ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００７，５５：６５１５—６５２０．

ｍｉｎｉｍａｌｌｙｐｒｏｃｅｓｓｅｄ

ｐａｃｋａｇｅｄａｎｄｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＵＶ—ｃ［Ｊ］．ＰｏｓｔｈａｒｖｅｓｔＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏ－

ｇＹ，２００５，３７：１７４—１８５．

［１３］ＫＯＢＲＥＨＥＬＫ，ＬＡＩＧＮＥＬＥＴＢ，ＦＥＩＬＬＥ３＇Ｐ．Ｓｔｕｄｙｏｆｓｏｍｅｆａｃｔｏｒｓｏｆ

ｍａｃａｒｏｎｉｂｒｏｗｎｎｅｓｓ［Ｊ］．ＣｅｒｅａｌＣｈｅｍ，１９７４，５１：６７５—６８３．

［１４］ＲＯＣＨＡＡＭ。ＧＡＬＥＡＺＺＩＭＡ，ＣＡＮＯＰ，ｅｔａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎｏｆ‘ｓｔａｒ－

ｋｉｎｇ’ａｐｐｌｅ

［２］ＭＡＧＨＯＵＭＩＭ，ＧＯＭＥＺ

Ｐ

Ａ，ＡＲＴｉｉＳ—ＨＥＲＮＡＮＤＥＺ

ｏｘｙｇｅｎｐａｃｋａｇｉｎｇ

ａｓ

Ｆ，ｅｌａｌ。Ｈｏｔ

ｗａｒｅｒ，

ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ［Ｊ］．Ｊ

ＳｃｉＦｏｏｄＡｇｒｉｃ，１９９８，７７：５２７—５３４．

ＵＶ—Ｃａｎｄｓｕｐｅｒａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ

ｈｕｒｄｌｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ

ｆｏｒ

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（上接第９４０３页）

ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ

ｐｌａｎｎｉｎｇｓｙｓｔｅｍｓ：Ａ

ｅａｓｅ

ｓｔｕｄｙｏｆＣａｎａｄａ［Ｊ］．Ｊ

Ｅｎｖｉｒｏｎ

果。其他领域推荐使用运用最为广泛对比分析法来进行环

境规划实施评估，而环境经济模拟、预测分析方法可以作为

辅助评估方法使用，使得环境规划实施的评估更全面、准确。

但是从总体上看，现阶段环境规划实施的评估方法仍处于初

Ｍａｎａｇｅ，２０１０。９１（６）：１２６８—１２７７．

［７］平宗莉，闰整．国外规划实施评价理论与方法及其在国内应用的研究

进展［Ｊ］．【Ｕ东国土资源，２０１０（２）：３３—３５．

［８］ＢＲＯＤＹＳＤ，ＨＩＧＨＦＩＥＬＤＷＥ．ＤｏｅｓＰｌａｎｎｉｎｇＷｏｒｋ？：ＴｅｓｔｉｎｇｔｈｅＩｍｐｌｅ—

ｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＩｚｌｃａｌＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＰｌａｎｎｉｎｇｉｎＦｌｏｒｉｄａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｈａｌｏｆｔｈｅ

ＡｍｅｒｉｃａｎＰｌａｎｎｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２００５，７１（２）：１５９—１７５．

级阶段，各方法仍存在缺点和不足之处，还没有形成一套科学合理的评估方法体系。这不仅影响环境保护工作的进展，

也不利于社会、经济、环境的协调可持续发展。因此，建立完

［９］於方，董唠扭卑，过孝民，等．中国环境保护规划评估制度建设的主要问

题分析［Ｊ］．环境污染与防治，２００９（１０）：９１—９４．

［１０］国家环境保护总局规划与财务司．国家环境保护“十五”计划读本

［Ｍ］．北京：中国环境科学出版社，２００２．［１１］邹首民，王金南，洪亚雄．国家“十一五”环境保护规划研究报告［Ｍ］．

北京：中国环境科学出版社，２００６．

善的环境规划评估方法体系，完善各种评估方法的程序与机

制，并全面进行评估方法的研究，是目前该领域研究的重点，也是环境规划发展的必然趋势。参考文献

［１］国家环境保护局计划司《环境规划指南》编写组环境规划指南［Ｍ］，

北京：清华大学出版社，１９９４．

［２］宋国君，徐莎．论环境规划实施的一般模式［Ｊ］．环境污染与防治，２００７

（５）：３８２—３８６．

［１２］吕娜．浅议琊竟费用效益分析法［Ｊ］．现代商业，２００９（２０）：１０７．

［１３］徐瑜青，王燕祥，李超．环境成本计算方法研究——以火力发电厂为

例［Ｊ］．会计研究，２００２（３）：４９—５３．

［１４］张晓东，朱德海．中国区域经济与环境协调度预测分析［Ｊ］．资源科

学，２００３（２）：２－６．

［１５］李学伟，关忠良，陈景艳．经济数据分析预测学［Ｍ］．北京：中国铁道

出版＿土，１９９８．

［１６］吴丹．ＧＭ（１，１）模型建立与预测方法［Ｊ／ＯＬ］ｈｔｔｐ：／／ｗｅｎｋｕ．ｂａｉｄｕ．

ｃｏｍ／ｖｉｅｎ／６ｃ５ｂ２ｄ０８ｈｌａａ８１１４４３ｌｄ９９７．ｈｔｄ．

［３］马俊英．我区环境规划编制与实施现状调查分析［Ｊ］．新疆环境保护，

２００８，３０（３）：３８—４１．

［１７］邓聚龙．灰色系统基本方法［Ｍ］．武汉：华中理工大学出版社，１９８７：１

—２７，１０４—１０５．

［４］倪嘉．规划实施刚古的方法探讨——以上海临港新城泥城社区规划实

施剜占实践为例［ｃ］／／中国城市规划学会．规划创新一２０１０中国城市规划年会论文集．重庆：重庆出版社。２０１０．

［１８］唐剑武，叶文虎．环境承载力的本质及其定量化初步研究［Ｊ］．中国环

境科学，１９９８，１８（３）：２２７—２３０．

［１９］陈伟琪。侯／Ｊ、凤，刘岩．论环境费用效益分析方法［Ｊ］．中国经济问题，

２０００（３）：５１—５６．

［５］吴舜泽，周劲松，李云生，等．国家环境保护“十一五”规划中期评估技

术方法［Ｍ］．北京：中国环境科学出版社，２０１１．

［６］ＥＬＬＩＳＭ，ＧＵＮＴＯＮＴ，ＲＵＴＨＥＲＦＯＲＤＭ．Ａｍｅｔｈｅｄｏｌｏｇｙｆｏｒｅｖａｌｕａｔｉｎｇ

万方数据

一种多酚氧化酶提取新方法与几种常规方法的比较研究

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

毕云枫， 姜仁凤， 刘薇薇， 李彦阳， 沈明浩

吉林农业大学食品质量与安全实验室,吉林长春,130118安徽农业科学

Journal of Anhui Agricultural Sciences2013(22)

本文链接：http://d.g.wanfangdata.com.cn/Periodical_ahnykx201322085.aspx

安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ

ｏｆＡｎｈｕｉ

Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．２０１３，４１（２２）：９４１８—９４２０

责任编辑李菲菲责任校对卢瑶

一种多酚氧化酶提取新方法与几种常规方法的比较研究ｇｅｎｔ，９４：－凤，刘薇薇，李彦阳，沈明浩＋

（吉林农业大学食品质量与安全实验室，吉林长春１３０１１８）

摘要［目的］对一种新的多酚氧化酶的提取方法与几种常用提取方法的综合效果进行比较。［方法］以苹果梨为研究对象，对匀浆法、

匀浆吸附法、匀浆后丙酮抽提法、丙酮粉法、丙酮抽提后吸附法这５种多酚氧化酶提取方法所得酶液进行了多酚类化合物残余、总酶活

及酶的稳定性的比较。同时，还对几种氨基酸对酪氨酸酶的抑制情况进行了检测。［结果］试验得出，以改进的丙酮抽提后吸附法所得

酶液多酚残余少，总活力保持良好，为几种方法中最佳的提取方法。谷胱甘肽、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸对酪氨酸酶的活力均有抑制作用，其庀。值分别为（Ｏ．４８±０．０２８）、（０．５９４－０．０３２）、（０．３７４－０．０１６）和（１．８７±Ｏ．０８７）ｍｍｏｌ／Ｌ。［结论］研究可为多酚氧化酶的相关研究提供参考。关键词

多酚氧化酶；提取方法；总活力；稳定性

中图分类号Ｓ１８８＋．３

文献标识码Ａ

文章编号０５１７—６６１１（２０１３）２２—０９４１８—０３

Ｓｔｕｄｙ

ｏｎ

ＡＮｅｗ

Ｍｅｔｈｏｄ

ｆｏｒＥｘｔｒａｃｔｉｎｇＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌ

ＯｘｉｄａｓｅＣｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＣｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌＭｅｔｈｏｄｓ

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Ａｂｓｔｒｕｃｔ『Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］Ａｎｅｗｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅｗａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｓｅｖｅｒａｌｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄｓ．Ｉ

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ｍｍｏｌ／Ｌ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＩＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＴｈｅｓｔｄｕｙｃａｎｐｒｏｖｉｄｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｒｅｌａｖａｎｔｒｅｓｅａｒｃｈ

ｏｆ

ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ．

ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ：Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ：Ｔｏｔａｌａｃｔｉｖｉｔｙ；Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ

在水果，蔬菜的采摘、运输、储藏、加工处理等过程中均酪氨酸酶的抑制情况进行了检测，希望对ＰＰＯ的相关研究有会发生褐变，使其颜色、味道、质量、营养价值改变¨‘３－，造成所帮助。了很大的经济损失。引起果蔬褐变的主要原因是多酚氧化１材料与方法

酶的作用。多酚氧化酶（ＥＣ１．１４．１８．１和ＥＣ

１．１０．３．１，

１．１材料苹果梨，购自延吉市水果批发市场。丙酮，国产ＰＰＯ）是一种铜依赖酶，催化单酚类羟基化为二元酚，再催化分析纯；ＰＶＰＰ（聚乙烯吡咯烷酮）、邻苯二酚，美国ＳＩＧＭＡ公二元酚为相应的醌类Ｈｏ。醌类是较强的亲电子分子，可以聚司；谷胱甘肽、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸，日本ＴＣＩ公司。合为黑色或棕色的色素口。。ＰＰＯ在大多数果蔬中存在。果所用紫外分光光度计为岛津ＵＶ一１８００，日本岛津公司。蔬在剥皮、切片、擦伤，或是病变组织接触氧气后非常容易发１．２方法

生褐变。使用电子和荧光显微镜观测到果蔬被切开，细胞结１．２．１多酚氧化酶的提取。

构被破坏导致ＰＰＯ酶和它的酚类底物的释放∞。。许多水果１．２．１．１匀浆法。３０ｇ样品加４℃预冷的磷酸缓冲液（ｐＨ和蔬菜的质量受该生物学反应影响，产生异味、变色、营养价７．３）４０ｍｌ，匀浆、搅拌、静置，反复几次，４ｃｃ下１５０００ｒ／ｍｉｎ

值降低。因此，对这些果蔬的褐变进行抑制，保持果蔬的色离心１５ｎｌｉｎ，取上清液于４℃冰箱保存备用’７“１。

泽、质量、提高储藏时间成为人们关注的重点。不管是对果１．２．１．２匀浆吸附法。３０ｇ样品加４℃预冷的含２％的蔬中ＰＰＯ进行性质、抑制剂的研究，还是对生理功能、基因克

ＰＶＰＰ的磷酸缓冲液（ｐＨ７．３）４０“，匀浆，搅拌０．５ｈ，静置，隆等方面的研究，都需要将多酚氧化酶从物体中分离纯化出

反复几次，４℃下１５０００

ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ。取上清液于４℃

来。ＰＰＯ的常用提取方法有许多种，包括匀浆法、匀浆吸附冰箱保存备用一一。

法、匀浆后丙酮抽提法及丙酮粉法。但这些方法多酚类残余１．２．１．３匀浆后丙酮抽提法。３０ｇ水果用匀浆法提取的粗比较多，残留的酚类会与底物竞争性的与酶结合，影响多酚酶液缓慢加入２．５倍体积的冷冻丙酮（一２０℃），４℃下

氧化酶酶活测定的准确性。笔者在这些方法的基础上，创建

１５０００

ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，将沉淀物溶于０．２ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓

了一种新的多酚氧化酶的提取方法——丙酮抽提后吸附法。

冲液（ｐＨ７．３）４０ＩＩｌｌ中，再次离心，取上清液于４℃冰箱保以苹果梨为目标，对新方法与几种常用方法的多酚类化合物

存备用¨…。

残余、总酶活及酶的稳定性进行了比较，还对几种氨基酸对

１．２．１．４丙酮粉法。３０ｇ样品加人４０ｍ１冷冻的丙酮（一

２０℃）匀浆。所得的匀浆用布氏漏斗垫滤纸抽滤，滤饼再

基金项目

吉林省科技厅项目（２００９０５５３）；吉林省教育厅项目（吉教科

合字［２０１１］第３５号）。

用冷冻丙酮多次提取、抽滤至无色，得到粗酶粉末，将粉末作者简介毕云枫（１９７６一），男，吉林白城人，讲师，博士，从事酶学及

放人通风橱中通风处理，除去丙酮之后，干粉以１：８（形：ｙ）酶分子生物学研究，Ｅ—ｍａｉｌ：Ｙｕｎｆｅｎ９５６０９＠ｓｏｈｕ．ｃｏｎ、｝通

讯作者。

的比例溶于０．２ｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲溶液（ｐＨ７．３），搅拌１０收稿１３期２０１３－０６－２４

ｒａｉｎ，在４℃下１５

０００

ｒ／ｍｉｎ离心１５ｒａｉｎ，取上清液于４℃冰

万方数据

４ｌ卷２２期

毕云枫等一种多酚氧化酶提取新方法与几种常规方法的比较研究

９４１９

箱保存备用…““。

１．２．１．５丙酮抽提后吸附法。３０ｇ样品按匀浆后丙酮抽提法所得的沉淀物在４℃下再加入含２％的ＰＶＰＰ的磷酸缓冲液（ｐＨ７．３）４０Ｉｌｌｌ，搅拌０．５ｈ，静置，反复几次，在４℃下

１５０００

ｒ／ｒａｉｎ离心１５ｍｉｎ，取上清液于４℃冰箱保存备用。

各提取方法均平行做３次，所得酶液用ＰＥＧ２０００浓缩至

２０

ｌｌｌｌ于４ｏＣ冰箱保存备用。

匀浆法

丙酮丙酮匀装匀浆后

吸附法丙§回抽粉法抽提后

提法吸附法

１．２．２酶的紫外吸光度测定。将各提取方法得到的酶用磷

酸缓冲液（ｐＨ７．３）定容至相同的体积后在波长４２０ｎｍ处测

定吸光度。

提取方法

图ｌ∞鲫∞如加

０

１．２．３酶的总活力测定。酶活力测定以邻苯二酚为底物，

用紫外分光光度计测定波长４２０ｎｍ下的酶促反应液的吸光度变化，酶活力单位定义为单位时间（ｍｉｎ），单位体积（“）的酶反应液引起的０．０１ＯＤ的吸光度变化。计算各提取方

几种提取方法所得粗酶的紫外吸光度百分比

法所得酶液的总活力。

１．２．４酶的稳定性测定。各提取方法所得酶液浓缩后立即测定活力，然后放置室温每隔１ｄ测定残余活力。

１．２．５

抑制剂对酶活力的影响。０，０．１、０．５、１．０、２．０、５．０

ｍｍｏｌ／Ｌ的谷胱甘肽、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸加入丙酮

抽提后吸附法所得酶液混合２ｍｉｎ后，加入底物邻苯二酚开始反应。每个浓度做３个平行样品。２结果与分析

２．１

匀浆法

丙酮匀浆匀浆后丙酮

吸附法丙酮抽粉法抽提后

提法吸附法

提取方法

酶的紫外吸光度百分比酶液的吸光度反映了提取

图２几种提取方法所得粗酶的总活力百分比

酶液的纯度和酶液中多酚类物质的剩余程度【１…。几种提取方法所得的粗酶液的紫外吸光度比值见图ｌ，以匀浆法吸光度最高，以其为１００％，则匀浆吸附法为７０．２３％，而匀浆后丙

酮吸附法、丙酮粉法、丙酮抽提后吸附法的吸光度分别为匀浆法的３５．１３％、１０．１７％、１１．２２％。各提取物中的吸光物质为苹果梨中所含的多酚类物质以及在提取过程中ＰＰＯ催化这些多酚类的氧化产物。由此可见，匀浆法最为简单，但其

在室温的稳定性变化，从中可见匀浆法和匀浆吸附法所得酶液最不稳定，尤其是在前６ｄ，活力下降比较快，第６天时的残余活力只有初提时的２３．５％和２５．１％，６ｄ后活力下降速

度变缓，８ｄ时只有１０％左右；其他方法所得酶液在前６ｄ变化比较缓慢，６ｄ时仍能保持７０％左右，然后快速下降，但依然比前２种方法残余活力高。由此可见，采用匀浆后丙酮抽提法、丙酮粉法和丙酮粉后吸附法所提取的酶的稳定性都较匀浆法和匀浆吸附法好。

中所残余的多酚类及其催化产物最多。ＰＶＰＰ虽然是很好的

多酚类吸附剂，但仍然不能吸附完全；丙酮由于不能溶解

ＰＰＯ但能很好地溶解多酚类及其产物，所以能很好地去除酚类成分。所以匀浆后丙酮抽提法多酚类残余比较少，只有匀

浆法的３５．１３％。丙酮粉法经丙酮多次提取，吸光度比较低，多酚类残余最少。而丙酮抽提后吸附法吸光度只比丙酮粉

法高１％，其残余的酚类也非常少。

２．２各酶液的总活力百分比

图２为各种提取方法的总酶

活力百分比，其中以匀浆法（１００％）的总活力最高，匀浆吸附法为９８．６１％，匀浆后丙酮抽提法为９４．４６％，丙酮粉法为

５１．５８％，丙酮抽提后吸附法为８９．４７％。其中以丙酮粉法得到的酶的总活力降低最多，接近一半。而其他３种方法提得的酶的总活力降低的很少，丙酮抽提后吸附法仅仅降低了近

１０％，活力保持的很好。有报道证明，丙酮粉法所提酶的酶学性质发生改变，并且活力降低¨“。而匀浆后吸附法因在匀浆后丙酮抽提过程中，缓冲液很好地对酶的结构进行了保护，所以活力损失较小。２．３酶的残余活力百分比

图３为各种提取方法所得酶液

图３

２．４

ＰＰＯ室温保存残余活力变化

４种氨基酸对多酚氧化酶活力的影响

谷胱甘肽、谷

氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸均对苹果梨的ＰＰＯ有抑制作用（表１），其中半胱氨酸的抑制能力最强，其，ｃ。值为（０．３７±０．０１６）ｍｍｏｌ／Ｌ；谷胱甘肽和谷氨酰胺的对苹果梨的ＰＰＯ也有较强的抑制作用，其，Ｃ。值分别为（０．４８－４－０．０２８）和（０．５９

±０．０３２）ｎｕｎｏｌ／Ｌ。谷氨酸对苹果梨的ＰＰＯ抑制能力最弱，

，ｃ。值只有（１．８７±０．０８７）ｍｍｏｌ／Ｌ。

万方数据

９４２０

安徽农业科学

２０１３盎

表１４种氨基酸对酪氨酸酶活力的影响ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇｏｖｅｒａｌｌ

ｑｕａｌｉｔｙｏｆｆｒｅｓｈ—ｃｕｔｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅａｒｉｌｓ［Ｊ］．ＪＳｅｉＦｏｏｄ

Ａｇｒｉｃ，２０１３．９３（５）：１１６２—１１６８．

［３］邓清云，刘海杰，张芋，酸性电解水对鲜切马铃薯酶促褐变抑制效果研究【Ｊ］．食品科技，２０１２（１０）：３５—３８．

［４］ＫＡＶＲＡＹＡＮＤ，ＡＹＤＥＭＩＲＴ，Ｐａｒｔｉａｌｐｕｒｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ

ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅｆｒｏｍｐｅｐｐｅｒｍｉｎｔ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，７４：１４７—

１５４．

ｆ５］ＤＥＧＬ’ＩＮＮＯＣＥＮＴＩＥ，ＧＵＩＤＩＬ．ＰＡＲＤＯＳＳＩＡ，ｅｔａ１．Ｂｉｃｃｈｅｍｉｃａｔｓｔｕｄｙｏｆ

ｌｅａｆｂｒｏｗｎｉｎｇｉｎｍｉｎｉｍａｌｌｙ

３结论

ｐｒｅｃｅｓｓｅｄｌｅａｖｅｓｏｆｌｅｔｔｕｃｅ（Ｌａｃｔｕｃａｓ以ｉｖａＬ．

ｖａｒ．ａｃｅｐｈａｌａ）［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，５３（２６）：９９８０—９９８４．

试验结果可以看出，几种提取方法中匀浆法简单但多酚类残留多，影响酶活，并且不稳定；匀浆吸附法中也有大量的

酚类残余；匀浆后丙酮抽提法所得总酶活力比较高，但多酚类残留仍达到３５％；丙酮粉法所得酶溶解性不好，活力低。

［６］ＭＩＳＨＲＡＢＢ，ＧＡＵＴＡＭＳ，ＳＨＡＲＭＡＡ．Ｂｒｏｗｎｉｎｇｏｆｆｒｅｓｈ—ｃｕｔｅｇｇｐｌａｎｔ：

Ｉｍｐａｃｔｏｆｃｕｔｔｉｎｇａｎｄｓｔｏｒａｇｅ［Ｊ］．ＰｏｓｔｈａｒｖｅｓｔＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，

２０１２，６７：４４—５１．

［７］李君兰，李怡华，赵秋玲，等．鸡腿蘑多酚氧化酶特｝生研究［Ｊ］．食品科

学，２００７。２８（１）：１８７—１９１．

８

ＭＩ—ＪＥＯＮＧＫ，ＣＨＯＯＮ

ＹＫ，ＩＮＳＨｌＫＰ．Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅｓｉｎ

Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ

而笔者改进的丙酮抽提后吸附法结合了匀浆法与丙酮粉法

的优点，所得的酶液多酚类残留少，总活力高，酶的稳定性也

ａｒｔｉｃｈｏｋｅｌＪ１．ＦｏｏｄＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，８９：１８１—１８４．

［９］张立华，孙晓飞，张艳侠，等．石榴多酚氧化酶的某些特性及其抑制剂

的研究［ｊ］．食品科学，２１３０７，２ｓ（ｓ）：２１６—２１９．［１０］程建军．苹果梨中多酚氧化酶酶反应动力学和反应进程的研究［Ｊ］．

食品科学，２００２，２３（８）：６９－７１．

［１１］郝慧英，赵光鳌，徐岩，等．苹果中多酚氧化酶的性质［Ｊ］．无锡轻工大

高，所用试剂价格经济，是几种方法中最佳的提取方法。谷胱甘肽、谷氨酰胺、半胱氨酸、谷氨酸均对苹果梨的ＰＰＯ有抑制作用，其中半胱氨酸的抑制能力最强，其次为谷胱甘肽和谷氨酰胺，谷氨酸对苹果梨的ＰＰＯ抑制能力最弱。

参考文献

［１］ＬＯＰＥＺ—ＲＵＢＩＲＡ

ｑｕａｌｉｔｙｏｆ

Ｖ，ＣＯＮＥＳＡＡ，ＡＬＬＥＮＤＥＡ，ｅｔａ１．Ｓｈｅｌｆｌｉｆｅ

ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ

ａｒｉｌｓ

ｍｏｄｉｆｉｅｄ

学学报，２瞄，２２（１）：７—１１．

『１２１

ＳＥＧＯＶＩＡ．ＢＲＡＶＯＫＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｕｍｐａｅａ

Ａ，ＪＡＲＥＮ．ＧＡＬＡＮＭ，ＧＡＲｄＡ．ＧＡＲＣＩＡＰ，ｅｔａ１．ｐｅｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅｆｒｏｍｔｈｅｍａｎｚａｎｉｌｌａｃｕｈｉｖａｒ（Ｏｌｅａ

ａｎｄｏｖｅｒａｌｌ

ａｔｍｏｓｐｈｅｒｅ

ｐｏｍｉｆｏｎｎｉｓ）ａｎｄｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｏｆｂｒｏｗｎｉｎｇｒｅａｃｔｉｏｎｓｉｎｂｒｕｉｓｅｄｏｌ—

ｉｒｅｆｒｕｉｔｓｌＪＩ．ＪＡｇｒｉｃＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００７，５５：６５１５—６５２０．

ｍｉｎｉｍａｌｌｙｐｒｏｃｅｓｓｅｄ

ｐａｃｋａｇｅｄａｎｄｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＵＶ—ｃ［Ｊ］．ＰｏｓｔｈａｒｖｅｓｔＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏ－

ｇＹ，２００５，３７：１７４—１８５．

［１３］ＫＯＢＲＥＨＥＬＫ，ＬＡＩＧＮＥＬＥＴＢ，ＦＥＩＬＬＥ３＇Ｐ．Ｓｔｕｄｙｏｆｓｏｍｅｆａｃｔｏｒｓｏｆ

ｍａｃａｒｏｎｉｂｒｏｗｎｎｅｓｓ［Ｊ］．ＣｅｒｅａｌＣｈｅｍ，１９７４，５１：６７５—６８３．

［１４］ＲＯＣＨＡＡＭ。ＧＡＬＥＡＺＺＩＭＡ，ＣＡＮＯＰ，ｅｔａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎｏｆ‘ｓｔａｒ－

ｋｉｎｇ’ａｐｐｌｅ

［２］ＭＡＧＨＯＵＭＩＭ，ＧＯＭＥＺ

Ｐ

Ａ，ＡＲＴｉｉＳ—ＨＥＲＮＡＮＤＥＺ

ｏｘｙｇｅｎｐａｃｋａｇｉｎｇ

ａｓ

Ｆ，ｅｌａｌ。Ｈｏｔ

ｗａｒｅｒ，

ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ［Ｊ］．Ｊ

ＳｃｉＦｏｏｄＡｇｒｉｃ，１９９８，７７：５２７—５３４．

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（上接第９４０３页）

ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ

ｐｌａｎｎｉｎｇｓｙｓｔｅｍｓ：Ａ

ｅａｓｅ

ｓｔｕｄｙｏｆＣａｎａｄａ［Ｊ］．Ｊ

Ｅｎｖｉｒｏｎ

果。其他领域推荐使用运用最为广泛对比分析法来进行环

境规划实施评估，而环境经济模拟、预测分析方法可以作为

辅助评估方法使用，使得环境规划实施的评估更全面、准确。

但是从总体上看，现阶段环境规划实施的评估方法仍处于初

Ｍａｎａｇｅ，２０１０。９１（６）：１２６８—１２７７．

［７］平宗莉，闰整．国外规划实施评价理论与方法及其在国内应用的研究

进展［Ｊ］．【Ｕ东国土资源，２０１０（２）：３３—３５．

［８］ＢＲＯＤＹＳＤ，ＨＩＧＨＦＩＥＬＤＷＥ．ＤｏｅｓＰｌａｎｎｉｎｇＷｏｒｋ？：ＴｅｓｔｉｎｇｔｈｅＩｍｐｌｅ—

ｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＩｚｌｃａｌＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＰｌａｎｎｉｎｇｉｎＦｌｏｒｉｄａ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｈａｌｏｆｔｈｅ

ＡｍｅｒｉｃａｎＰｌａｎｎｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，２００５，７１（２）：１５９—１７５．

级阶段，各方法仍存在缺点和不足之处，还没有形成一套科学合理的评估方法体系。这不仅影响环境保护工作的进展，

也不利于社会、经济、环境的协调可持续发展。因此，建立完

［９］於方，董唠扭卑，过孝民，等．中国环境保护规划评估制度建设的主要问

题分析［Ｊ］．环境污染与防治，２００９（１０）：９１—９４．

［１０］国家环境保护总局规划与财务司．国家环境保护“十五”计划读本

［Ｍ］．北京：中国环境科学出版社，２００２．［１１］邹首民，王金南，洪亚雄．国家“十一五”环境保护规划研究报告［Ｍ］．

北京：中国环境科学出版社，２００６．

善的环境规划评估方法体系，完善各种评估方法的程序与机

制，并全面进行评估方法的研究，是目前该领域研究的重点，也是环境规划发展的必然趋势。参考文献

［１］国家环境保护局计划司《环境规划指南》编写组环境规划指南［Ｍ］，

北京：清华大学出版社，１９９４．

［２］宋国君，徐莎．论环境规划实施的一般模式［Ｊ］．环境污染与防治，２００７

（５）：３８２—３８６．

［１２］吕娜．浅议琊竟费用效益分析法［Ｊ］．现代商业，２００９（２０）：１０７．

［１３］徐瑜青，王燕祥，李超．环境成本计算方法研究——以火力发电厂为

例［Ｊ］．会计研究，２００２（３）：４９—５３．

［１４］张晓东，朱德海．中国区域经济与环境协调度预测分析［Ｊ］．资源科

学，２００３（２）：２－６．

［１５］李学伟，关忠良，陈景艳．经济数据分析预测学［Ｍ］．北京：中国铁道

出版＿土，１９９８．

［１６］吴丹．ＧＭ（１，１）模型建立与预测方法［Ｊ／ＯＬ］ｈｔｔｐ：／／ｗｅｎｋｕ．ｂａｉｄｕ．

ｃｏｍ／ｖｉｅｎ／６ｃ５ｂ２ｄ０８ｈｌａａ８１１４４３ｌｄ９９７．ｈｔｄ．

［３］马俊英．我区环境规划编制与实施现状调查分析［Ｊ］．新疆环境保护，

２００８，３０（３）：３８—４１．

［１７］邓聚龙．灰色系统基本方法［Ｍ］．武汉：华中理工大学出版社，１９８７：１

—２７，１０４—１０５．

［４］倪嘉．规划实施刚古的方法探讨——以上海临港新城泥城社区规划实

施剜占实践为例［ｃ］／／中国城市规划学会．规划创新一２０１０中国城市规划年会论文集．重庆：重庆出版社。２０１０．

［１８］唐剑武，叶文虎．环境承载力的本质及其定量化初步研究［Ｊ］．中国环

境科学，１９９８，１８（３）：２２７—２３０．

［１９］陈伟琪。侯／Ｊ、凤，刘岩．论环境费用效益分析方法［Ｊ］．中国经济问题，

２０００（３）：５１—５６．

［５］吴舜泽，周劲松，李云生，等．国家环境保护“十一五”规划中期评估技

术方法［Ｍ］．北京：中国环境科学出版社，２０１１．

［６］ＥＬＬＩＳＭ，ＧＵＮＴＯＮＴ，ＲＵＴＨＥＲＦＯＲＤＭ．Ａｍｅｔｈｅｄｏｌｏｇｙｆｏｒｅｖａｌｕａｔｉｎｇ

万方数据

一种多酚氧化酶提取新方法与几种常规方法的比较研究

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

毕云枫， 姜仁凤， 刘薇薇， 李彦阳， 沈明浩

吉林农业大学食品质量与安全实验室,吉林长春,130118安徽农业科学

Journal of Anhui Agricultural Sciences2013(22)

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