70
天然产物研究与开发
NAT URA L PRODUCT RESE ARCH AND DE VE LOPME NT
2005 V ol 117 N o 11
不同产地丹参中有效成分的含量比较
王道平1, 周 欣1, 3, 梁光义1, 阮靖华1, 张中林2
(11贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室, 贵阳550002; 21贵州神奇制药有限公司, 贵阳550002)
摘 要:用索氏提取法提取丹参的水溶性有效成分, 用冷浸法提取丹参的酯溶性有效成分, 以HP LC 法测得的丹参素、丹参酮ⅡA 和原儿茶醛含量为考察指标, 对全国几个著名的丹参药材基地种植的丹参中丹参素、原儿茶醛和丹参酮ⅡA 的含量及其稳定性进行了比较。不同产地丹参有效成分含量有较大差异。河南和四川产的丹参中酚酸类化合物含量最高, 每克药材丹参素含量分别为19179mg 和20135mg , 每克药材原儿茶醛含量分别为
5158mg 和4135mg , 贵州铜仁地区产的丹参丹参酮ⅡA 含量最高, 每克药材达014mg 。
关键词:丹参;HP LC ; 丹参素; 原儿茶醛; 丹参酮ⅡA 中图分类号:R927.2;R282. 71
The Comparison of E ffective in Miltiorrhizae from W ANG Dao 2ping 131Jing 2hua 1,ZH ANG Zhong 2lin 2
(1K o f Products o f Guizhou Province and Chinese Academy o f
, G ,China ; 21Shenqi Pharmaceutical Co 1Ltd 1, G uiyang 550002,China )
Abstract :In this paper ,DanShen Su ,protocate chaldehyde and tanshinone Ⅱ2A contents in Radix Salviae M iltiorrhizae from s ome DanShen planting bases were com pared 1The water 2s oluble com ponents in Radix Salviae M iltiorrhizae was extracted by Suo 2Shi extraction way and the fat 2s oluble com ponents was extracted by cold 2s oaked extraction way 1DanShen Su ,protocate chaldehyde and tanshinone Ⅱ2A contents were determined by HP LC. The contents of salvianolic acid in Radix Salviae M iltior 2rhizae from Henan and S ichuan is relatively high 1The content of DanShen Su were 19179mg and 20135mg in every gram crude drugs ,the contents of protocate chaldehydes were 5158mg and 4135mg 1The content of tanshinone in Radix Salviae M iltior 2rhizae from G uiZhou T ongRen is upperm ost ,014mg in every gram crude drugs 1K ey w ords :DanShen ;HP LC ;DanShen Su ;protocate chaldehyd ;tanshinone Ⅱ2A
中药丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge 1的干燥根及根茎, 全国大部分地区均产。该药
材味苦、微温, 具活血化淤、安神宁心之效。有效成
分达30余种[1], 大致分脂溶性和水溶性两类。水溶性成分有增加冠脉流量、抗心肌缺氧等作用, 其中原儿茶醛为抗心绞痛有效成分, 丹参素是治疗冠心病的主要成分[2]。由于其对心血管系统的特殊作用, 被广泛应用于临床, 很多研制单位仍在继续探索丹
参的新工艺制剂。而纯中药制剂丹参酮具有抗菌、抑菌、抗炎、消肿、拟生理雌激素等作用, 可广泛用于各种外科、五官科等感染及妇科和痤疮等疾患, 无耐药性及毒副作用[3]。本文对全国六个重要丹参基地产的丹参药材进行有效成分分析, 方法简便、快速、可靠, 取得了满意的结果, 并制定了水溶性成分的含量测定标准。
1 实验部分
111 仪器及试药
HP1100高效液相色谱仪及Chemstation 色谱工
收稿日期:2004204226 接受日期:2004206225
基金项目:贵州省省长专项资金项目(200126)
3通讯作者T el :[1**********]327; E 2mail :alice9800@sina1com
作站。
甲醇、乙腈均为色谱纯(美国天地公司) , 水为新
2005 V ol 117 N o 11王道平等:不同产地丹参中有效成分的含量比较
71
鲜乐百氏纯净水, 过0145μm 滤膜, 冰醋酸为AR 级(上海化学试剂有限公司) 。丹参素钠(含量>98%) 对照品上海医科大学药学院天然药化室提供, 原儿茶醛和丹参酮ⅡA 分别购自中国药品生物制品检定所, 批号分别为[1**********]和[1**********]。丹参药材分别采自河南、安徽、甘肃、四川和浙江, 贵州铜仁地区药材由贵州神奇制药有限公司提供。112 方法与结果11211 样品的制备
参酮ⅡA 峰计算应不低于2000。
数据处理方法为外标峰面积测定法。11214 标准曲线的制备
分别精密吸取丹参素钠和原儿茶醛混合溶液1、4、8、12、16、20、24、28μL 进样, 以峰面积为横坐标, 对照品量为纵坐标作图, 得一条基本过原点的直线。丹参素回归方程为A =[1**********]C +119627652, R =0199999, 表明丹参素在01387～101835μg 范围内具有良好的线性关系; 原儿茶醛回归方程为A =[1**********]C 2110881588, R =0199995, 表明原儿茶醛在01084～21352μg 范围内具有良好的线性关系。
分别精密吸取丹参酮ⅡA 溶液2、4、6、8、10、12、14μL 进样, , 对照品量为纵坐标作图, 。丹参酮ⅡA 回归1, R =1100000, 0888μg 范围内具有良好的11215 稳定性试验
取各地区产的丹参药材各20g 粉碎, 过40目
筛,60℃减压干燥2h , 精密称取约2g , 置索氏提取器中用100m L 水作提取溶剂, 索氏提取16h 。文献对丹参酯溶性成分的报道, 多以氯仿2甲醇系统冷浸、超声提取或联合使用, 为了选择较优的提取方法, 单因素考查了提取方法的影响, 结果发现以上三种提取法提取成分差异不大, 丹参酮ⅡA 含量接近因此考虑操作相对简单的冷浸法(2h ) 取, 考虑到氯仿溶剂在LC 剂峰, 又经氯仿22, 确定以乙醚2的最佳提取条件。
将提取液趁热过滤, 冷却后定容, 即得。11212 标准品的制备
取丹参素钠和原儿茶醛混合溶液, 分别在0、2、
8、12、16、24h 检测指纹图, RS D 分别为0131%和0127%。
11216 精密度试验
取经减压干燥过夜的丹参素钠、原儿茶醛对照
品适量, 用蒸馏水定容, 制成每m L 中含丹参素钠01387mg , 原儿茶醛01084mg 作为对照品溶液, 同理
取丹参素钠和原儿茶醛混合液连续进样5次, 检测指纹图谱, 结果RS D 分别为0113%和0121%。11217 重现性试验
用氯仿配制01282mg/m L 丹参酮ⅡA 溶液备用。11213 色谱条件及系统适用性试验
取铜仁地区产的丹参药材5份, 精密称定, 按供试品溶液制备方法制备供试品, 检测HP LC , 结果丹参素和原儿茶醛RS D 分别为1137%和1152%。11218 回收率实验
水溶性部分用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
(Z orbax S B 2C18416mm 3250mm 5μm ) , 乙腈∶水(014%HAc ) 为流动相, 走梯度:
T ime (m in ) CH 3CN (%)
00
55
2015
3020
7040
8070
95100
精密称取已知含量的贵州丹参, 定量加入丹参素对照品, 按照213项样品测定的分析方法, 求的丹参素平均回收率99192%,RS D =2146%(n =5) 。11219 样品的含量测定
流速110m L/min , 柱温25℃, 检测波长为254
nm 和280nm , 理论塔板数按丹参素峰计算应不低于2500。
实验中丹参酮ⅡA 的检测参照《中国药典》2000年版(一部) “丹参”项下, 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Hypersil ODS2416mm 3250mm 5μm ) , 甲醇∶水(75∶25) 为流动相, 流速110m L/min , 柱温25℃, 检测波长为254nm 和270nm , 理论塔板数按丹
按照211项中的样品制备法, 每样平行两份, 计算各地药材丹参素、原儿茶醛和丹参酮ⅡA 的含量,
见表1。
2 讨论
从表1可见, 不同地区丹参样品的有效成分含量差别较大, 河南和四川产的丹参中酚酸类化合物
72天然产物研究与开发 2005 V ol 117 N o 11
含量最高, 贵州铜仁地区产的丹参中丹参酮含量最
高。
表1 不同产地丹参中丹参素、原儿茶醛和丹参酮ⅡA 的含
量(mg/g ) (n =2)
T able 1 C om paris on of DanShen Su ,protocate chaldehyde and tan 2
shinone Ⅱ2A contents in Radix Salviae M iltiorrhizae from different DanShen bases (mg/g ) (n =2) 成 分
C ontent
丹参中多数成分如丹参素等为酸性物质, 在中
性流动相中拖尾现象严重, 加入少量醋酸, 抑制了酸性物质的离解, 能达到很好的分离效果。
丹参药材提取液中所含成分复杂, 色谱峰较多, 采用梯度洗脱可使化合物得到很好的分离, 而且色谱峰形较好, 提高了定量的准确度。
参考文献
1 Zhang Y (张燕) 1Progress in study of chemical constituents of DanShen 1Chin Phrarm J (中国药学杂志) ,1991,24(1) :6272 Zhang WT (张文婷) ,Shou Y F (寿优芳) ,Chen BL (陈碧莲) .
The contents review of DanShen Su and protocate chaldehyd in water 2s olubility preparations of DanShen 1Modernizational Appli 2cation o f Traditional Chinese Medicine (中国现代应用药学) ,
贵州甘肃四川安徽河南浙江
Henan Zhejiang [1**********]158
1134
G uizhou G ansu S ichuan Anhui [**************]
[1**********]268
[1**********]372
[1**********]187
丹参素
DanShen Su
原儿茶醛
Protocate chaldehyde
丹参酮ⅡA
T anshinone Ⅱ2A
0137001217
丹参水溶性有效成分为丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸等。文献报道[4]丹参素和原儿茶醛含量较高。故选择丹参素和原儿茶醛作为本实验质量考察的指标, 丹参酯溶性成分则选择含量较高的丹参酮作为考察指标, 并用HP LC 丹参酮ⅡA 进行测定2001,18(4) :3032305
3 Shi NY () ,D ong H ) ,Huang H J (黄海金) .
tanshinnone. Journal o f ) ,2001,3(2) :1502151
4) G Q (张国清) 1Determination of three constituents of DanShen injections by RP 2HP LC. Acta Pharm Sinica (药学学报) ,1998,23(4) :2932294
70
天然产物研究与开发
NAT URA L PRODUCT RESE ARCH AND DE VE LOPME NT
2005 V ol 117 N o 11
不同产地丹参中有效成分的含量比较
王道平1, 周 欣1, 3, 梁光义1, 阮靖华1, 张中林2
(11贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室, 贵阳550002; 21贵州神奇制药有限公司, 贵阳550002)
摘 要:用索氏提取法提取丹参的水溶性有效成分, 用冷浸法提取丹参的酯溶性有效成分, 以HP LC 法测得的丹参素、丹参酮ⅡA 和原儿茶醛含量为考察指标, 对全国几个著名的丹参药材基地种植的丹参中丹参素、原儿茶醛和丹参酮ⅡA 的含量及其稳定性进行了比较。不同产地丹参有效成分含量有较大差异。河南和四川产的丹参中酚酸类化合物含量最高, 每克药材丹参素含量分别为19179mg 和20135mg , 每克药材原儿茶醛含量分别为
5158mg 和4135mg , 贵州铜仁地区产的丹参丹参酮ⅡA 含量最高, 每克药材达014mg 。
关键词:丹参;HP LC ; 丹参素; 原儿茶醛; 丹参酮ⅡA 中图分类号:R927.2;R282. 71
The Comparison of E ffective in Miltiorrhizae from W ANG Dao 2ping 131Jing 2hua 1,ZH ANG Zhong 2lin 2
(1K o f Products o f Guizhou Province and Chinese Academy o f
, G ,China ; 21Shenqi Pharmaceutical Co 1Ltd 1, G uiyang 550002,China )
Abstract :In this paper ,DanShen Su ,protocate chaldehyde and tanshinone Ⅱ2A contents in Radix Salviae M iltiorrhizae from s ome DanShen planting bases were com pared 1The water 2s oluble com ponents in Radix Salviae M iltiorrhizae was extracted by Suo 2Shi extraction way and the fat 2s oluble com ponents was extracted by cold 2s oaked extraction way 1DanShen Su ,protocate chaldehyde and tanshinone Ⅱ2A contents were determined by HP LC. The contents of salvianolic acid in Radix Salviae M iltior 2rhizae from Henan and S ichuan is relatively high 1The content of DanShen Su were 19179mg and 20135mg in every gram crude drugs ,the contents of protocate chaldehydes were 5158mg and 4135mg 1The content of tanshinone in Radix Salviae M iltior 2rhizae from G uiZhou T ongRen is upperm ost ,014mg in every gram crude drugs 1K ey w ords :DanShen ;HP LC ;DanShen Su ;protocate chaldehyd ;tanshinone Ⅱ2A
中药丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge 1的干燥根及根茎, 全国大部分地区均产。该药
材味苦、微温, 具活血化淤、安神宁心之效。有效成
分达30余种[1], 大致分脂溶性和水溶性两类。水溶性成分有增加冠脉流量、抗心肌缺氧等作用, 其中原儿茶醛为抗心绞痛有效成分, 丹参素是治疗冠心病的主要成分[2]。由于其对心血管系统的特殊作用, 被广泛应用于临床, 很多研制单位仍在继续探索丹
参的新工艺制剂。而纯中药制剂丹参酮具有抗菌、抑菌、抗炎、消肿、拟生理雌激素等作用, 可广泛用于各种外科、五官科等感染及妇科和痤疮等疾患, 无耐药性及毒副作用[3]。本文对全国六个重要丹参基地产的丹参药材进行有效成分分析, 方法简便、快速、可靠, 取得了满意的结果, 并制定了水溶性成分的含量测定标准。
1 实验部分
111 仪器及试药
HP1100高效液相色谱仪及Chemstation 色谱工
收稿日期:2004204226 接受日期:2004206225
基金项目:贵州省省长专项资金项目(200126)
3通讯作者T el :[1**********]327; E 2mail :alice9800@sina1com
作站。
甲醇、乙腈均为色谱纯(美国天地公司) , 水为新
2005 V ol 117 N o 11王道平等:不同产地丹参中有效成分的含量比较
71
鲜乐百氏纯净水, 过0145μm 滤膜, 冰醋酸为AR 级(上海化学试剂有限公司) 。丹参素钠(含量>98%) 对照品上海医科大学药学院天然药化室提供, 原儿茶醛和丹参酮ⅡA 分别购自中国药品生物制品检定所, 批号分别为[1**********]和[1**********]。丹参药材分别采自河南、安徽、甘肃、四川和浙江, 贵州铜仁地区药材由贵州神奇制药有限公司提供。112 方法与结果11211 样品的制备
参酮ⅡA 峰计算应不低于2000。
数据处理方法为外标峰面积测定法。11214 标准曲线的制备
分别精密吸取丹参素钠和原儿茶醛混合溶液1、4、8、12、16、20、24、28μL 进样, 以峰面积为横坐标, 对照品量为纵坐标作图, 得一条基本过原点的直线。丹参素回归方程为A =[1**********]C +119627652, R =0199999, 表明丹参素在01387～101835μg 范围内具有良好的线性关系; 原儿茶醛回归方程为A =[1**********]C 2110881588, R =0199995, 表明原儿茶醛在01084～21352μg 范围内具有良好的线性关系。
分别精密吸取丹参酮ⅡA 溶液2、4、6、8、10、12、14μL 进样, , 对照品量为纵坐标作图, 。丹参酮ⅡA 回归1, R =1100000, 0888μg 范围内具有良好的11215 稳定性试验
取各地区产的丹参药材各20g 粉碎, 过40目
筛,60℃减压干燥2h , 精密称取约2g , 置索氏提取器中用100m L 水作提取溶剂, 索氏提取16h 。文献对丹参酯溶性成分的报道, 多以氯仿2甲醇系统冷浸、超声提取或联合使用, 为了选择较优的提取方法, 单因素考查了提取方法的影响, 结果发现以上三种提取法提取成分差异不大, 丹参酮ⅡA 含量接近因此考虑操作相对简单的冷浸法(2h ) 取, 考虑到氯仿溶剂在LC 剂峰, 又经氯仿22, 确定以乙醚2的最佳提取条件。
将提取液趁热过滤, 冷却后定容, 即得。11212 标准品的制备
取丹参素钠和原儿茶醛混合溶液, 分别在0、2、
8、12、16、24h 检测指纹图, RS D 分别为0131%和0127%。
11216 精密度试验
取经减压干燥过夜的丹参素钠、原儿茶醛对照
品适量, 用蒸馏水定容, 制成每m L 中含丹参素钠01387mg , 原儿茶醛01084mg 作为对照品溶液, 同理
取丹参素钠和原儿茶醛混合液连续进样5次, 检测指纹图谱, 结果RS D 分别为0113%和0121%。11217 重现性试验
用氯仿配制01282mg/m L 丹参酮ⅡA 溶液备用。11213 色谱条件及系统适用性试验
取铜仁地区产的丹参药材5份, 精密称定, 按供试品溶液制备方法制备供试品, 检测HP LC , 结果丹参素和原儿茶醛RS D 分别为1137%和1152%。11218 回收率实验
水溶性部分用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
(Z orbax S B 2C18416mm 3250mm 5μm ) , 乙腈∶水(014%HAc ) 为流动相, 走梯度:
T ime (m in ) CH 3CN (%)
00
55
2015
3020
7040
8070
95100
精密称取已知含量的贵州丹参, 定量加入丹参素对照品, 按照213项样品测定的分析方法, 求的丹参素平均回收率99192%,RS D =2146%(n =5) 。11219 样品的含量测定
流速110m L/min , 柱温25℃, 检测波长为254
nm 和280nm , 理论塔板数按丹参素峰计算应不低于2500。
实验中丹参酮ⅡA 的检测参照《中国药典》2000年版(一部) “丹参”项下, 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Hypersil ODS2416mm 3250mm 5μm ) , 甲醇∶水(75∶25) 为流动相, 流速110m L/min , 柱温25℃, 检测波长为254nm 和270nm , 理论塔板数按丹
按照211项中的样品制备法, 每样平行两份, 计算各地药材丹参素、原儿茶醛和丹参酮ⅡA 的含量,
见表1。
2 讨论
从表1可见, 不同地区丹参样品的有效成分含量差别较大, 河南和四川产的丹参中酚酸类化合物
72天然产物研究与开发 2005 V ol 117 N o 11
含量最高, 贵州铜仁地区产的丹参中丹参酮含量最
高。
表1 不同产地丹参中丹参素、原儿茶醛和丹参酮ⅡA 的含
量(mg/g ) (n =2)
T able 1 C om paris on of DanShen Su ,protocate chaldehyde and tan 2
shinone Ⅱ2A contents in Radix Salviae M iltiorrhizae from different DanShen bases (mg/g ) (n =2) 成 分
C ontent
丹参中多数成分如丹参素等为酸性物质, 在中
性流动相中拖尾现象严重, 加入少量醋酸, 抑制了酸性物质的离解, 能达到很好的分离效果。
丹参药材提取液中所含成分复杂, 色谱峰较多, 采用梯度洗脱可使化合物得到很好的分离, 而且色谱峰形较好, 提高了定量的准确度。
参考文献
1 Zhang Y (张燕) 1Progress in study of chemical constituents of DanShen 1Chin Phrarm J (中国药学杂志) ,1991,24(1) :6272 Zhang WT (张文婷) ,Shou Y F (寿优芳) ,Chen BL (陈碧莲) .
The contents review of DanShen Su and protocate chaldehyd in water 2s olubility preparations of DanShen 1Modernizational Appli 2cation o f Traditional Chinese Medicine (中国现代应用药学) ,
贵州甘肃四川安徽河南浙江
Henan Zhejiang [1**********]158
1134
G uizhou G ansu S ichuan Anhui [**************]
[1**********]268
[1**********]372
[1**********]187
丹参素
DanShen Su
原儿茶醛
Protocate chaldehyde
丹参酮ⅡA
T anshinone Ⅱ2A
0137001217
丹参水溶性有效成分为丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸等。文献报道[4]丹参素和原儿茶醛含量较高。故选择丹参素和原儿茶醛作为本实验质量考察的指标, 丹参酯溶性成分则选择含量较高的丹参酮作为考察指标, 并用HP LC 丹参酮ⅡA 进行测定2001,18(4) :3032305
3 Shi NY () ,D ong H ) ,Huang H J (黄海金) .
tanshinnone. Journal o f ) ,2001,3(2) :1502151
4) G Q (张国清) 1Determination of three constituents of DanShen injections by RP 2HP LC. Acta Pharm Sinica (药学学报) ,1998,23(4) :2932294