菌种的传代接种操作规程

陕西汉王药业有限公司GMP 管理文件

1 目 的:建立菌种的传代、贮存、接种操作规程。

2 适用范围:适用于检定菌的传代、贮存、接种。

3 责 任 者:微生物检验员、化验室主任。

4 内 容:

4.1来源:检定菌种由药检部门提供已接种好的菌种斜面。

4.2 贮存:

4.2.1 将购来的试管斜面菌种放入冰箱中冷藏(4-6℃)保存。

4.2.2 将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中保存。

4.2.3每支保存菌种需标明菌名、统一编号、接种日期。

4.3 传代和接种:

4.3.1 试验用菌种一般每两月传代一次,在阳性菌检室内进行传代和接种。

4.3.2 先点燃酒精灯,在火焰旁的上部空间操作,烧灼接种环。

4.3.3 再将原有的菌种斜面培养基(简称菌种管) 与待种的新鲜斜面培养基(简称接种管) ,持在左手拇指、食指及中指之间,要注意能清楚地观察到斜面,菌种管在前,接种管在后。应斜持试管呈450角,使试管内斜面向上,两试管口平齐,注意不要持成水平,以免管底凝集水浸湿培养基表面。

4.3.4 首先,以右手在火焰旁转动两管的棉塞,以便接种时易于拔取。再以右手持接种环的柄端,垂直或稍斜地把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红,以彻底灭菌。环以上凡接种时可进入试管的部分,也应通过火焰烧灼。烧灼时,应把环置于酒精灯的外焰上,因外焰的温度比内焰高,容易烧红。

4.3.5 使用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间,在火焰旁分别拔出两支试管

的棉塞,持住。再将试管口在火焰上通过,以杀灭管口可能沽污的细菌,但勿烧烫。

4.3.6 先将烧灼过的接种环插入菌种管内,先接触无菌苔生长的培养基上,如印则表明接种环未冷却,能烫死细菌。一定待冷后,再从斜面上挑取菌苔少许。取出时接种环不能通过火焰,应在火焰旁迅速插入接种管,在斜面上轻轻划线接种。划线时一般先由下而上划一直线后,再由下而上划曲线,操作过程应迅速,勿使菌苔沾至管壁或管口。

4.3.7 当接种完毕,立即将管口通过火焰灭菌,右手到火焰旁塞上棉塞,不要将管口离开火焰旁去迎接右手的棉塞。最后将接种环烧灼灭菌放置原处,再把可能未塞紧的棉塞塞紧,即可进行培养。

4.3.8操作过程中,如因不慎使棉塞触及火焰而着火,切勿用口吹,须在刚刚着火时迅速塞入试管,因管内氧气不足会很快熄灭。若棉塞外端着火,可用手捏熄。若棉塞烧坏不宜再用,可另取未接种斜面培养基上的灭菌棉塞,代替塞上。

4.3.9 传代和接种使用后,应记好记录。

5、菌种保存温度与时限:

细菌:多用普通肉汤琼脂或根据菌种规定选用培养基, 保存温度4-6℃, 传种时间为芽孢杆菌3-6月,其它每个月。

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1 目 的:建立菌种的传代、贮存、接种操作规程。

2 适用范围:适用于检定菌的传代、贮存、接种。

3 责 任 者:微生物检验员、化验室主任。

4 内 容:

4.1来源:检定菌种由药检部门提供已接种好的菌种斜面。

4.2 贮存:

4.2.1 将购来的试管斜面菌种放入冰箱中冷藏(4-6℃)保存。

4.2.2 将传代并经过培养后的菌种放入冰箱中保存。

4.2.3每支保存菌种需标明菌名、统一编号、接种日期。

4.3 传代和接种:

4.3.1 试验用菌种一般每两月传代一次,在阳性菌检室内进行传代和接种。

4.3.2 先点燃酒精灯,在火焰旁的上部空间操作,烧灼接种环。

4.3.3 再将原有的菌种斜面培养基(简称菌种管) 与待种的新鲜斜面培养基(简称接种管) ,持在左手拇指、食指及中指之间,要注意能清楚地观察到斜面,菌种管在前,接种管在后。应斜持试管呈450角,使试管内斜面向上,两试管口平齐,注意不要持成水平,以免管底凝集水浸湿培养基表面。

4.3.4 首先,以右手在火焰旁转动两管的棉塞,以便接种时易于拔取。再以右手持接种环的柄端,垂直或稍斜地把接种环在火焰上烧灼。顶端的环必须烧红,以彻底灭菌。环以上凡接种时可进入试管的部分,也应通过火焰烧灼。烧灼时,应把环置于酒精灯的外焰上,因外焰的温度比内焰高,容易烧红。

4.3.5 使用右手的小指和手掌之间以及无名指与小指之间,在火焰旁分别拔出两支试管

的棉塞,持住。再将试管口在火焰上通过,以杀灭管口可能沽污的细菌,但勿烧烫。

4.3.6 先将烧灼过的接种环插入菌种管内,先接触无菌苔生长的培养基上,如印则表明接种环未冷却,能烫死细菌。一定待冷后,再从斜面上挑取菌苔少许。取出时接种环不能通过火焰,应在火焰旁迅速插入接种管,在斜面上轻轻划线接种。划线时一般先由下而上划一直线后,再由下而上划曲线,操作过程应迅速,勿使菌苔沾至管壁或管口。

4.3.7 当接种完毕,立即将管口通过火焰灭菌,右手到火焰旁塞上棉塞,不要将管口离开火焰旁去迎接右手的棉塞。最后将接种环烧灼灭菌放置原处,再把可能未塞紧的棉塞塞紧,即可进行培养。

4.3.8操作过程中,如因不慎使棉塞触及火焰而着火,切勿用口吹,须在刚刚着火时迅速塞入试管,因管内氧气不足会很快熄灭。若棉塞外端着火,可用手捏熄。若棉塞烧坏不宜再用,可另取未接种斜面培养基上的灭菌棉塞,代替塞上。

4.3.9 传代和接种使用后,应记好记录。

5、菌种保存温度与时限:

细菌:多用普通肉汤琼脂或根据菌种规定选用培养基, 保存温度4-6℃, 传种时间为芽孢杆菌3-6月,其它每个月。


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