·82· Chinese Journal of Information on TCM Jul.2015 Vol.22 No.7
不同炮制方法对女贞子化学成分的影响
肖薇,黄健,陈志峰,郭桂明
首都医科大学附属北京中医医院,北京 100010
摘要：目的 考察不同炮制方法对女贞子主要化学成分特女贞苷和齐墩果酸含量的影响。方法 用同一批次女贞子进行炮制加工,采用反相高效液相色谱法,对女贞子生品、酒制女贞子、醋制女贞子和盐制女贞子中的特女贞苷和齐墩果酸进行含量测定。结果 女贞子生品及3种不同炮制品中特女贞苷含量依次为盐制女贞子(1.997 5%)＞女贞子生品(1.600 7%)＞酒制女贞子(1.144 6%)＞醋制女贞子(0.894 6%)。女贞子生品及3种不同炮制品中齐墩果酸含量依次为酒制女贞子(1.120 2%)＞盐制女贞子(0.924 6%)＞醋制女贞子(0.913 2%)＞女贞子生品(0.899 8%)。结论 女贞子不同炮制方法对其特女贞苷和齐墩果酸的含量有一定影响。 关键词：女贞子；特女贞苷；齐墩果酸；炮制 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.07.023
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2015)07-0082-04
Effects of Different Methods of Preparation on the Contents of Chemical Components in Ligustri Lucidi Fructus XIAO Wei, HUANG Jan, CHEN Zhi-feng, GUO Gui-ming (Beijing Hospital of
Traditional Chinese Medicine, Capital Medical University, Beijing 100010, China)
Abstract：Objective To investigate the effects of different methods of preparation on the contents of nuzhenide and oleanolic acid in Ligustri Lucidi Fructus. Methods The same batch of Ligustri Lucidi Fructus was under preparation and process. RP-HPLC was used to determine the contents of nuzhenide and oleanolic acid in crude samples, wine-prepared samples, vinegar-prepared samples, and salt-prepared samples. Results The contents of nuzhenide were in the order as follow：salt-prepared samples (1.997 5%)＞crude samples (1.600 7%)＞wine-prepared samples (1.144 6%)＞vinegar-prepared samples (0.894 6%). The contents of oleanolic acid were in the order as follow：wine-prepared samples (1.120 2%)＞salt-prepared samples (0.924 6%)＞vinegar-prepared samples (0.913 2%)＞crude samples (0.899 8%). Conclusion Different methods of preparation have certain effects on the contents of nuzhenide and oleanolic acid in Ligustri Lucidi Fructus. Key words：Ligustri Lucidi Fructus；nuzhenide；oleanolic acid；method of preparation
基金项目：首都医科大学附属北京中医医院院级课题(2013-26) 通讯作者：郭桂明,E-mail：[email protected]
[2] De Feudis FV. A brief history of EGb 761 and its therapeutic uses[J]. Pharmacopsychiatry,2003,36(S1)：2-7.
[3] Mahadevan S, Park Y. Multifaceted therapeutic benefits of Ginkgo biloba L.：chemistry, efficacy, safety, and uses[J]. Journal of Food Science,2008,73(1)：R14-R19.
[4] Li L, Zhao Y, Du F, et al. Intestinal absorption and presystemic elimination of various chemical constituents present in GBE50 extract, a standardized extract of Ginkgo biloba leaves[J]. Current Drug Metabolism,2012,13(5)：494-509.
[5] Masaki K, Hashimoto M, Imai T. Intestinal first-pass metabolism via carboxylesterase in rat jejunum and ileum[J]. Drug metabolism and disposition,2007,35(7)：1089-1095.
[6] Agar WT, Hird FJR, Sidhu GS. The absorption, transfer and uptake of amino acids by intestinal tissue[J]. Biochimica et Biophysica Acta,1956,22(1)：21-30.
[7] Lv H, Wang G, Wu X, et al. Transport characteristics of ginkgolide B by Caco-2 cells and examination of ginkgolide B oral absorption potential using rat in situ intestinal loop method[J]. International Journal of Pharmaceutics,2008,351(1)：31-35. [8] Luo Z, Liu Y, Zhao B, et al. Ex vivo and in situ approaches used to study intestinal absorption[J]. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods,2013,68(2)：208-216.
(收稿日期：2014-12-10)
(修回日期：2015-01-05；编辑：陈静)
2015年7月第22卷第7期 中国中医药信息杂志 ·83·
女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实,性凉,味甘、苦,归肝、肾经,具有滋补肝肾、明目乌发的功效。女贞子历代炮制方法较多,如宋代有“饭上蒸”(《疮疡经验全书》),明代有用复合辅料酒、墨旱莲草及地黄制(《本草蒙筌》)、酒浸蒸晒(《本草通玄》)、酒拌黑豆蒸九次(《炮炙大法》)、酒拌蒸(《先醒斋广笔记》)、酒蜜拌蒸(《审视瑶函》)等方法,并有“浸酒去风补血”的论述(《本草品汇精要》),清代又增加了蜜酒拌蒸(《医方集解》)、盐水拌炒(《得配本草》)、白芥子车前水浸(《本草纲目拾遗》)等[1]
。现代主要炮制方法以酒蒸和酒炖法应用居多[2]
,不同炮制方法功效各异。
现代研究表明,女贞子主要含有萜类、黄酮类、苯乙醇苷类、挥发油、磷脂、多糖、脂肪酸、氨基酸、微量元素等化学成分,主要有保肝、免疫调节、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗衰老等药理作用[3]
,2010年版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)以特女贞苷(C[4]
31H42O17)为质量控制指标。2005年版《中国药典》以齐墩果酸为质量控制指标[5]
。本研究采用高效液相色谱法(HPLC),比较醋制、酒制、盐制3种炮制方法对女贞子中特女贞苷和齐墩果酸含量的影响。 1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪(Agilent G1311A 四元泵,Agilent G1329A自动进样器,Agilent G1315D DAD检测器)；Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(5 μm, 150 mm×4.6 mm)；AL204型电子天平,METTLER TOLEDO；粉碎机RT-02B,台湾荣聪。
特女贞苷、齐墩果酸对照品购自中国食品药品检定研究院(供含量测定用,批号分别为111926- 201203、110709-201206),乙腈、甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。女贞子样品(北京杏林药业有限责任公司,批号140217),经首都医科大学附属北京中医医院药学部主任药师郭桂明主任鉴定为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。 2 方法与结果 2.1 炮制方法
依据《北京市中药饮片炮制规范(2008年版)》
[6]
制备3种女贞子炮制品。醋制女贞子、酒制女贞子：称取100 g女贞子生品2份,分别放入陶瓷锅；精确量取20 mL米醋和20 mL黄酒,分别倾入2份女贞子样品中,拌匀,盖上锅盖,闷润3 h；保持陶瓷锅密闭,放入不锈钢蒸锅,蒸21 h。盐制女贞子：称取100 g女贞子生品1份,放入陶瓷锅；喷淋1%盐水20 mL,拌
匀,闷润3 h；保持陶瓷锅密闭,放入不锈钢蒸锅,蒸1 h。 2.2 特女贞苷含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(40∶60)；流速：1 mL/min；测定波长：224 nm；柱温为室温。理论板数按特女贞苷峰计算应不低于4000。 2.2.2 对照品溶液的制备 取特女贞苷对照品10.45 mg,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得1.007 4 mg/mL对照品储备液(以96.4%计)。精密吸取对照品储备液2.5 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得0.251 9 mg/mL对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 取药材粉末约0.5 g(过3号筛),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇50 mL,称定质量,加热回流1 h,放冷,再称定质量,用稀乙醇补足减失的质量,摇匀,过滤,取续滤液,即得。 2.2.4 线性关系考察 取特女贞苷对照品13 mg,置于50 mL量瓶中,加甲醇溶液并稀释至刻度,摇匀,得到0.250 6 mg/mL对照品储备液(以96.4%计)。精密吸取对照品储备液1、2、3、5、8、10、20 μL,按“2.2.1”项下色谱条件进样,测定峰面积。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,制备标准曲线,得回归方程为Y＝1127.2X＋69.56(r2
＝0.999 7)。结果表明,特女贞苷在0.250 6～5.012 μg范围内呈良好线性关系。 2.2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL,连续进样6次,测定峰面积,RSD＝0.67%(n＝6),表明精密度良好。
2.2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于0、4、8、12、16、24 h测定峰面积,RSD＝1.02%(n＝6)。结果表明,本品溶液在24 h内稳定。
2.2.7 重复性试验 精密称取同一样品6份,分别按“2.2.3”项下方法制成供试品溶液,测定含量。测得平均含量为0.899 6%,RSD＝0.28%(n＝6)。结果表明,方法重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验 精密称取5份已测含量(0.899 6%)的醋制女贞子粉0.1 g,加入0.250 6 mg/mL对照品储备液4 mL,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,进样10 μL,测定特女贞苷含量,分别计算回收率。结果特女贞苷平均回收率为100.52%,RSD＝1.70% (n＝5),见表1。
2.2.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,按“2.2.1”项下色谱条件测定,对照品平均峰面积为1631.47,样品含量按干燥品计算,结果见图1、表2。
·82· Chinese Journal of Information on TCM Jul.2015 Vol.22 No.7
不同炮制方法对女贞子化学成分的影响
肖薇,黄健,陈志峰,郭桂明
首都医科大学附属北京中医医院,北京 100010
摘要：目的 考察不同炮制方法对女贞子主要化学成分特女贞苷和齐墩果酸含量的影响。方法 用同一批次女贞子进行炮制加工,采用反相高效液相色谱法,对女贞子生品、酒制女贞子、醋制女贞子和盐制女贞子中的特女贞苷和齐墩果酸进行含量测定。结果 女贞子生品及3种不同炮制品中特女贞苷含量依次为盐制女贞子(1.997 5%)＞女贞子生品(1.600 7%)＞酒制女贞子(1.144 6%)＞醋制女贞子(0.894 6%)。女贞子生品及3种不同炮制品中齐墩果酸含量依次为酒制女贞子(1.120 2%)＞盐制女贞子(0.924 6%)＞醋制女贞子(0.913 2%)＞女贞子生品(0.899 8%)。结论 女贞子不同炮制方法对其特女贞苷和齐墩果酸的含量有一定影响。 关键词：女贞子；特女贞苷；齐墩果酸；炮制 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.07.023
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2015)07-0082-04
Effects of Different Methods of Preparation on the Contents of Chemical Components in Ligustri Lucidi Fructus XIAO Wei, HUANG Jan, CHEN Zhi-feng, GUO Gui-ming (Beijing Hospital of
Traditional Chinese Medicine, Capital Medical University, Beijing 100010, China)
Abstract：Objective To investigate the effects of different methods of preparation on the contents of nuzhenide and oleanolic acid in Ligustri Lucidi Fructus. Methods The same batch of Ligustri Lucidi Fructus was under preparation and process. RP-HPLC was used to determine the contents of nuzhenide and oleanolic acid in crude samples, wine-prepared samples, vinegar-prepared samples, and salt-prepared samples. Results The contents of nuzhenide were in the order as follow：salt-prepared samples (1.997 5%)＞crude samples (1.600 7%)＞wine-prepared samples (1.144 6%)＞vinegar-prepared samples (0.894 6%). The contents of oleanolic acid were in the order as follow：wine-prepared samples (1.120 2%)＞salt-prepared samples (0.924 6%)＞vinegar-prepared samples (0.913 2%)＞crude samples (0.899 8%). Conclusion Different methods of preparation have certain effects on the contents of nuzhenide and oleanolic acid in Ligustri Lucidi Fructus. Key words：Ligustri Lucidi Fructus；nuzhenide；oleanolic acid；method of preparation
基金项目：首都医科大学附属北京中医医院院级课题(2013-26) 通讯作者：郭桂明,E-mail：[email protected]
[2] De Feudis FV. A brief history of EGb 761 and its therapeutic uses[J]. Pharmacopsychiatry,2003,36(S1)：2-7.
[3] Mahadevan S, Park Y. Multifaceted therapeutic benefits of Ginkgo biloba L.：chemistry, efficacy, safety, and uses[J]. Journal of Food Science,2008,73(1)：R14-R19.
[4] Li L, Zhao Y, Du F, et al. Intestinal absorption and presystemic elimination of various chemical constituents present in GBE50 extract, a standardized extract of Ginkgo biloba leaves[J]. Current Drug Metabolism,2012,13(5)：494-509.
[5] Masaki K, Hashimoto M, Imai T. Intestinal first-pass metabolism via carboxylesterase in rat jejunum and ileum[J]. Drug metabolism and disposition,2007,35(7)：1089-1095.
[6] Agar WT, Hird FJR, Sidhu GS. The absorption, transfer and uptake of amino acids by intestinal tissue[J]. Biochimica et Biophysica Acta,1956,22(1)：21-30.
[7] Lv H, Wang G, Wu X, et al. Transport characteristics of ginkgolide B by Caco-2 cells and examination of ginkgolide B oral absorption potential using rat in situ intestinal loop method[J]. International Journal of Pharmaceutics,2008,351(1)：31-35. [8] Luo Z, Liu Y, Zhao B, et al. Ex vivo and in situ approaches used to study intestinal absorption[J]. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods,2013,68(2)：208-216.
(收稿日期：2014-12-10)
(修回日期：2015-01-05；编辑：陈静)
2015年7月第22卷第7期 中国中医药信息杂志 ·83·
女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实,性凉,味甘、苦,归肝、肾经,具有滋补肝肾、明目乌发的功效。女贞子历代炮制方法较多,如宋代有“饭上蒸”(《疮疡经验全书》),明代有用复合辅料酒、墨旱莲草及地黄制(《本草蒙筌》)、酒浸蒸晒(《本草通玄》)、酒拌黑豆蒸九次(《炮炙大法》)、酒拌蒸(《先醒斋广笔记》)、酒蜜拌蒸(《审视瑶函》)等方法,并有“浸酒去风补血”的论述(《本草品汇精要》),清代又增加了蜜酒拌蒸(《医方集解》)、盐水拌炒(《得配本草》)、白芥子车前水浸(《本草纲目拾遗》)等[1]
。现代主要炮制方法以酒蒸和酒炖法应用居多[2]
,不同炮制方法功效各异。
现代研究表明,女贞子主要含有萜类、黄酮类、苯乙醇苷类、挥发油、磷脂、多糖、脂肪酸、氨基酸、微量元素等化学成分,主要有保肝、免疫调节、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗衰老等药理作用[3]
,2010年版《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)以特女贞苷(C[4]
31H42O17)为质量控制指标。2005年版《中国药典》以齐墩果酸为质量控制指标[5]
。本研究采用高效液相色谱法(HPLC),比较醋制、酒制、盐制3种炮制方法对女贞子中特女贞苷和齐墩果酸含量的影响。 1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪(Agilent G1311A 四元泵,Agilent G1329A自动进样器,Agilent G1315D DAD检测器)；Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(5 μm, 150 mm×4.6 mm)；AL204型电子天平,METTLER TOLEDO；粉碎机RT-02B,台湾荣聪。
特女贞苷、齐墩果酸对照品购自中国食品药品检定研究院(供含量测定用,批号分别为111926- 201203、110709-201206),乙腈、甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯。女贞子样品(北京杏林药业有限责任公司,批号140217),经首都医科大学附属北京中医医院药学部主任药师郭桂明主任鉴定为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实。 2 方法与结果 2.1 炮制方法
依据《北京市中药饮片炮制规范(2008年版)》
[6]
制备3种女贞子炮制品。醋制女贞子、酒制女贞子：称取100 g女贞子生品2份,分别放入陶瓷锅；精确量取20 mL米醋和20 mL黄酒,分别倾入2份女贞子样品中,拌匀,盖上锅盖,闷润3 h；保持陶瓷锅密闭,放入不锈钢蒸锅,蒸21 h。盐制女贞子：称取100 g女贞子生品1份,放入陶瓷锅；喷淋1%盐水20 mL,拌
匀,闷润3 h；保持陶瓷锅密闭,放入不锈钢蒸锅,蒸1 h。 2.2 特女贞苷含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18 (150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：甲醇-水(40∶60)；流速：1 mL/min；测定波长：224 nm；柱温为室温。理论板数按特女贞苷峰计算应不低于4000。 2.2.2 对照品溶液的制备 取特女贞苷对照品10.45 mg,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得1.007 4 mg/mL对照品储备液(以96.4%计)。精密吸取对照品储备液2.5 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得0.251 9 mg/mL对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 取药材粉末约0.5 g(过3号筛),精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇50 mL,称定质量,加热回流1 h,放冷,再称定质量,用稀乙醇补足减失的质量,摇匀,过滤,取续滤液,即得。 2.2.4 线性关系考察 取特女贞苷对照品13 mg,置于50 mL量瓶中,加甲醇溶液并稀释至刻度,摇匀,得到0.250 6 mg/mL对照品储备液(以96.4%计)。精密吸取对照品储备液1、2、3、5、8、10、20 μL,按“2.2.1”项下色谱条件进样,测定峰面积。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,制备标准曲线,得回归方程为Y＝1127.2X＋69.56(r2
＝0.999 7)。结果表明,特女贞苷在0.250 6～5.012 μg范围内呈良好线性关系。 2.2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μL,连续进样6次,测定峰面积,RSD＝0.67%(n＝6),表明精密度良好。
2.2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于0、4、8、12、16、24 h测定峰面积,RSD＝1.02%(n＝6)。结果表明,本品溶液在24 h内稳定。
2.2.7 重复性试验 精密称取同一样品6份,分别按“2.2.3”项下方法制成供试品溶液,测定含量。测得平均含量为0.899 6%,RSD＝0.28%(n＝6)。结果表明,方法重复性良好。
2.2.8 加样回收率试验 精密称取5份已测含量(0.899 6%)的醋制女贞子粉0.1 g,加入0.250 6 mg/mL对照品储备液4 mL,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液,进样10 μL,测定特女贞苷含量,分别计算回收率。结果特女贞苷平均回收率为100.52%,RSD＝1.70% (n＝5),见表1。
2.2.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,按“2.2.1”项下色谱条件测定,对照品平均峰面积为1631.47,样品含量按干燥品计算,结果见图1、表2。