HPLC测定猪肉食品中四环素族抗生素残留

安徽农业科学, Journal of Anhui Agri . Sci . 2010, 38(7) :3548-3549, 3656责任编辑　王强　责任校对　卢瑶

HP LC 测定猪肉食品中四环素族抗生素残留

池利民, 全则灵, 张雪梅　(1. 河北化工医药职业技术学院, 河北石家庄050026; 2. 浙江省农业科学院, 浙江杭州310021)

摘要　[目的]建立一种采用高效液相色谱(HP LC ) 测定肉类食品中四环素族抗生素残留量的新方法。[方法]首先, 用Na 2EDT A 2Mc Il 2vaine 缓冲溶液提取样品, 并用三氯乙酸除去其中的蛋白质; 然后, 用HLB 固相萃取柱进行净化; 最后, 采用高效液相色谱仪测定含量, 并用外标法定量。[结果]Na2EDT A 2Mc Ilvaine 缓冲溶液的pH 值为4. 5时, 四环素族抗生素回收率最高, 最大吸收波长为355n m, 最低检测限为100μg/L。3个添加水平的回收率均在6815%～9417%, 相对标准偏差为215%～911%。[结论]该方法简便、快速、准确、精密度高, 适用于肉类食品中四环素族抗生素残留量的检测。关键词　高效液相色谱; 土霉素; 四环素; 金霉素; 强力霉素; 残留中图分类号　S859. 84　　文献标识码　A 　　文章编号　0517-6611(2010) 07-03548-02D eterm i n a ti on of Tetracycli ne Antibioti cs i n M ea t by HPLC CH I L i 2m i n et a l 　(Hebei Chem ical and Phar maceutical college, Shijiazhuang, Hebei 050026)

Abstract 　[Objective]To develop a novel method for deter m ination of the tetracycline antibiotics residue in meat using high perf or mance liq 2uid chromatographic method (HPLC ) . [Method]The samp les were extracted by Na 2EDT A 2Mc Ilvaine buffer, and removed p rotein using tri 2chlor oacetic acid (TCA ) . The samp les were then cleaned up by HLB solid phase extraction column . The tetracycline antibiotics residue were measured by HP LC and quantified using external calibrati on curves . [Result]The results showed that the highest recovery of tetracycline anti 2biotics by Na 2EDT A 2Mc Ilvaine buffer soluti on appeared at pH value of 4. 5, and the highest absorp ti on of detective wavelength was 355nm. the m ini mum detective level was 100μg/L.The Rec . and RS D were at the range of 68. 5%-94. 7%and 2. 5%-9. 1%, res pectively . [Conclusion ]The method is si m p le, rap id and accurate f or detecting the residues of tetracycline antibiotics in meat . Key words 　HPLC; Oxytetracycline; Tetracycline; Chlortetracycline; Doxycycline; Residue

1

2

1

　　在畜牧业生产过程中, 为预防和治疗畜禽疾病, 促进动物的生长与繁殖, 加剂, , 效果和便宜的价格, 种。品种主要有金霉素(Chl ortetracycline ) 、土霉素(Oxytetra 2

cycline ) 、四环素(Tetracycline ) 和强力霉素(Doxycycline ) 等4

1. 2甲醇((色谱纯) 、柠檬酸一水合

22三氯乙酸(T CA ) 等1. 3　仪器与设备　Varian LC 2920高效液相色谱仪、二极管

阵列检测器(P DA ) 、N2000型色谱工作站、高速匀浆机、离心机、pH 计、电子天平和精密移液枪。

1. 4　色谱条件　Nova 2PakC 18色谱柱:(150mm ×3. 9mm, 4

种, 均具有共同的基本母核(氢化骈四苯) , 仅取代基有所不同。这类抗菌素的抗菌谱最广, 对大多数革兰氏阳性菌和阴性菌都很敏感, 主要用于布鲁氏菌病、炭疽、大肠杆菌、急性呼吸道感染和乳房炎等的防治。此外, 还被应用于动物各种传染性疾病的预防和治疗。但是, 这些药物会在畜禽体内残留, 并随肉、乳、蛋等食品进入人体, 对人体健康产生有害影响, 可使机体内病菌耐药性增加, 从而造成人体免疫系统的功能降低。为保护人类的健康, 近年来各国均对肉食品中四环素族抗生素的残留情况加强了监控和检验, 并规定了一些药物在食品中的最大允许残留量(简称MRL ) 。美国F DA 规定四环素在猪肉中的残留量小于80μg/kg;国际卫生组织和欧盟规定四环素在猪肉中的最大残留量为100μg/kg; 我国在无公害畜禽肉安全要求中规定的最高限量为100μg/kg[2]。目前, 测定抗生素的主要方法有微生物法和高效液相色谱法

[3-4]

[1]

μm ) ; 柱温:室温; 检测波长:355n m; 流速:0. 2m l/min; 进样体积:10μl 。

1. 5　溶液配制

1. 5. 1　土霉素、四环素、金霉素和强力霉素标准储备液配

制。精密称取土霉素、四环素、金霉素和强力霉素标准品各1

mg, 用甲醇定容至100m l 棕色容量瓶, 制得4种浓度均为10mg/L的标准储备液, 置于4～6℃冰箱保存备用。其他低浓

度标准溶液用时现配。

1. 5. 2　土霉素、四环素、金霉素和强力霉素混合标准工作液

配制。取土霉素和四环素标准储备液各1m l; 取金霉素和强力霉素标准储备液各2m l, 置于100m l 棕色容量瓶中, 用甲醇定容。混合标准溶液中土霉素和四环素浓度为100μg/L,金霉素和强力霉素浓度为200μg/L。

1. 5. 3　提取液的配制。称取11. 8g 柠檬酸一水合物, 13. 72g 磷酸氢二钠二水合物和33. 62g E DT A 22Na 溶解于1L 水中

。笔者应用Varian 高效液相色谱仪测定肉

类抗生素残留量, 对色谱分离参数, 包括色谱柱、流动相配比、缓冲液、温度和检测波长等, 进行系统的研究, 以期建立一种能够同时分离和定量测定猪肉食品中四环素族抗生素的新方法。

1　材料与方法

1. 1　试验材料　猪腿肉, 来自市售动物制品。

作者简介　池利民(1956-) , 女, 北京人, 教授, 从事分析化学、无机和

有机化学的教学和科研工作。

收稿日期　2009211224

配制成Na 2E DT A 2Mc Ilvaine 缓冲液, 作为此次四环素类抗生素的提取液。

1. 6　测定方法　取5. 00g 动物组织样品, 加入1m l 土霉素、

四环素、金霉素和强力霉素混合标准工作液, 置于50m l 聚丙烯离心管中, 涡旋, 震荡, 加入25m l Na 2E DT A 2Mc Ilvaine 缓冲溶液提取, 摇匀, 再加入2m l 50%三氯乙酸除去蛋白质, 均质, 6000r/min 离心10m in, 过滤, 再用25m l Na 2E DT A 2Mc Il 2

vaine 缓冲溶液提取一次, 过滤合并上清液。调上清液的pH

值至4. 5, 加入15m l 乙酸乙酯, 6000r/min 离心10m in, 取上

38卷7期　　　　　　　　　　　　　　　　池利民等　HP LC 测定猪肉食品中四环素族抗生素残留3549

清液, 再用15m l 乙酸乙酯重复提取一次, 合并上清液, 用旋转蒸发仪浓缩至尽干, 加入3m l Na 2E DT A 2Mc Ilvaine 缓冲溶液, 超声波震荡仪超声, 过HLB 固相萃取小柱, 先用3m l 甲醇, 5m l 超纯水活化, 取3m l 上述前处理溶液上样, 用5m l 甲醇, 5m l 水溶液淋洗。用真空泵抽干, 加入6m l 甲醇洗脱, 然后用N 240℃吹干, 用1m l 的50%甲醇水溶液溶解, 经0145μm 滤膜过滤, 最后, 滤液进行高效液相分析。

2　结果与分析

2. 1　提取液最佳pH 值的选择　分别用6个不同pH 值的0. 1mol/L的Na 2E DT A 2Mc Ilvaine 缓冲溶液, 提取1m l 的四环

表2　土霉素、四环素、金霉素和强力霉素的线性方程和相关系数

Table 2　L i n ear equa ti on and correl a ti on coeff i ci en t of O TC, TC, CTC

and DC

样品

Tetracycline antibi otics OT C T C CT C DC

线性方程

L inear equati on

Y =40. 897X -202

794Y =23. 2981X -1. 1205Y =8. 1658X -0. 4721Y =7. 9870X -1. 6104

相关系数

Correlati on 0. 99930. 9997

0. 99950. 9996

素类抗生素的混合标准工作液

[3]

。然后, 过HLB 固相提取

小柱(3cc, 60mg ) , 6m l 甲醇洗脱, 氮气吹干, 用1m l 的50%甲醇水溶液定容, 进样测定, 得出在不同pH 值情况下的回收率。从表1可见, 土霉素(OT C ) 和四环素(T C ) 的回收率较高也比较稳定, 而金霉素(CT C ) 和强力霉素(DC ) 的回收率较低, 原因可能是HLB 固相萃取柱在某些pH 值范围对其保留的较少。4种抗生素的回收率均在pH 值为4. 5时较高。

表1　0. 1mol/L的Na 2E D TA 2M c Ilva i n e 缓冲溶液不同pH 值的回

收率

Table 1　Effects of pH va lue of 0. 1mol/LNa 2E D TA 2M c Ilva i n e buffer

soluti on on recovery ra te

pH 值pH value 3. 54. 04. 55. 05. 56. 0

OT C 90. 693. 1100. 896. 497. 391. 5

T C 96. 4102. 190. 188. 584. 2

CT 80. 179. 683. 578. 372. 167. 8

64. 377. 579. 778. 874. 373. 4

图1i g . 1Chro w tetracycli n e anti bi oti cs

2. 2　色谱柱的选择　四环素类抗生素是两性化合物, 呈弱

极性, 在弱酸性条件下较为稳定。笔者用C 18(5μm, 4. 6mm

×250mm ) 和Nova 2PakC 18(4μm, 3. 9mm ×150mm ) 色谱柱对四环素和土霉素进行反相色谱分离。试验结果表明, No 2

va 2PakC 18色谱柱分离效果较好, 原因可能是由于Nova 2PakC 18

图2　加标样品的高效液相色谱图

F i g . 2　Chro ma togram w ith tetracycli n e an ti bi oti cs

2. 7　回收率及精密度试验　分别向适量空白样品中添加

高、中和低3种浓度的混合标准溶液, 添加水平见表3, 按上述样品处理和色谱条件进行回收率及精密度试验, 结果如表

3所示。

表3　回收率及精密度测定结果

Table 3　D eter m i n ed results of recovery ra te and prec isi on degree

色谱柱的填料粒小, 表面积大, 柱效高, 增强了溶质分子的分离度。此外, 试验结果还表明, 柱温对四环素的分离影响不大。

2. 3　检测波长的选择　用二极管阵列检测器分别对土霉

素、四环素、金霉素和强力霉素进行紫外光谱扫描, 结果显示, 4种组分在355n m 处均有最大吸收, 故该方法的最佳检测波长为355n m 。

2. 4　标准曲线及线性关系　以峰面积对浓度作校正曲线,

样品

Tetracycline

antibi otics OT C

添加浓度μg/L平均回收率∥%

测定次数

Deter m ined ti m es

[1**********]相对偏差

%

RSD

Added Mean recovery concentrati on rate [***********][***********]3. 84. 89. 68. 80. 86. 71. 83. 86. 81. 87. [1**********]得线性回归方程, 发现土霉素、四环素、金霉素和强力霉素在10～100μg/L范围内线性关系良好, 其线性方程和相关系数如表2所示。

2. 5　样品的测定　空白样品及向空白样品中添加混合标准

T C

1

5

CT C

15

DC

1溶液的加标样品, 经样品处理和色谱测定所得色谱图分别如图1和2所示。

2. 6　最低检测限　取混合标准工作液50～400μg/L进行测

定, 结果表明, 土霉素、四环素、金霉素和强力霉素的最低检测度为100μg/L。

8. 5. 3. 9. 6. 3. 7. 4. 2. 6. 4. [1**********](下转第3656页)

3656　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2010年

m in 颜色由红变为橙色, 15m in 以后颜色由橙色依次变淡。收波长由350n m 渐变为388n m, 说明苏丹III 光化学降解的产物之间在催化剂Ti O 2

存在下生成一种新的吸光物质。

苏丹III 在乙醇/氯仿混合体系中光化学降解, 颜色变化是因为偶氮键的断裂, 说明偶氮键是染料化合物的主要结构。吸

图3　氙灯照射下苏丹III -乙醇体系的吸收光谱

F i g . 3　UV 2V is spectra of Sudan III soluti on usi n g ethanol a s solven t under Xenon

3　结论

苏丹Ⅲ在乙醇/氯仿混合体系和无水乙醇溶液中光解速率存在显著差异, 氙灯光照下, 光解的半衰期大小顺序为乙醇/氯仿混合体系>无水乙醇溶液。

苏丹Ⅲ在3种光源下光解速率顺序为氙灯>紫外灯>太阳光, 这主要是由于各种光源的发射光谱及强度不同所致; 氙灯发射光谱在300～1000n m, 氙灯加350n m 除去波长小于350n m 的光, 350～100

n m; n 作用到达地面的波长大于m 。

苏丹III 在乙醇/氯仿混合体系中光化学降解, 颜色变化是因为偶氮键的断裂, 吸收波长由350n m 渐变为388n m, 说明苏丹III 光化学降解的产物之间在催化剂Ti O 2存在下生成一种新的吸光物质, 苏丹III 在有机溶剂中的光降解机理复杂, 详细机理有待进一步探索。参考文献

[1]孙秀果, 林玉龙. Si O 2包覆纳米Ti O 2的初步探讨[J ].微纳电子技术,

2002, 29(10) :23-26.

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(上接第3549页) 3　结论与讨论

参考文献

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留量的测定方法(液相色谱法) . G B /T5009. 9522003[S].北京:中国标准出版社, 2003.

[4]中华人民共和国卫生部. 畜、禽肉中土霉素、四环素、金霉素和强力霉

素残留量的测定(高效液相色谱法) . G B /T5009. 11622003[S].北京:中国标准出版社, 2003.

笔者建立了一种基于HLB 固相萃取小柱和高效液相色谱仪的测定肉类中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素残留量的新方法。结果表明, 该方法操作简便, 分离完全, 3个添加水平的回收率在68. 5%～94. 7%, 相对标准偏差范围为

2. 5%～9. 1%。该方法具有较高的灵敏度和精密度, 适用

于肉类中四环素族抗生素残留量的检测, 并可提高检验工作效率和节省检验时间。

安徽农业科学, Journal of Anhui Agri . Sci . 2010, 38(7) :3548-3549, 3656责任编辑　王强　责任校对　卢瑶

HP LC 测定猪肉食品中四环素族抗生素残留

池利民, 全则灵, 张雪梅　(1. 河北化工医药职业技术学院, 河北石家庄050026; 2. 浙江省农业科学院, 浙江杭州310021)

摘要　[目的]建立一种采用高效液相色谱(HP LC ) 测定肉类食品中四环素族抗生素残留量的新方法。[方法]首先, 用Na 2EDT A 2Mc Il 2vaine 缓冲溶液提取样品, 并用三氯乙酸除去其中的蛋白质; 然后, 用HLB 固相萃取柱进行净化; 最后, 采用高效液相色谱仪测定含量, 并用外标法定量。[结果]Na2EDT A 2Mc Ilvaine 缓冲溶液的pH 值为4. 5时, 四环素族抗生素回收率最高, 最大吸收波长为355n m, 最低检测限为100μg/L。3个添加水平的回收率均在6815%～9417%, 相对标准偏差为215%～911%。[结论]该方法简便、快速、准确、精密度高, 适用于肉类食品中四环素族抗生素残留量的检测。关键词　高效液相色谱; 土霉素; 四环素; 金霉素; 强力霉素; 残留中图分类号　S859. 84　　文献标识码　A 　　文章编号　0517-6611(2010) 07-03548-02D eterm i n a ti on of Tetracycli ne Antibioti cs i n M ea t by HPLC CH I L i 2m i n et a l 　(Hebei Chem ical and Phar maceutical college, Shijiazhuang, Hebei 050026)

Abstract 　[Objective]To develop a novel method for deter m ination of the tetracycline antibiotics residue in meat using high perf or mance liq 2uid chromatographic method (HPLC ) . [Method]The samp les were extracted by Na 2EDT A 2Mc Ilvaine buffer, and removed p rotein using tri 2chlor oacetic acid (TCA ) . The samp les were then cleaned up by HLB solid phase extraction column . The tetracycline antibiotics residue were measured by HP LC and quantified using external calibrati on curves . [Result]The results showed that the highest recovery of tetracycline anti 2biotics by Na 2EDT A 2Mc Ilvaine buffer soluti on appeared at pH value of 4. 5, and the highest absorp ti on of detective wavelength was 355nm. the m ini mum detective level was 100μg/L.The Rec . and RS D were at the range of 68. 5%-94. 7%and 2. 5%-9. 1%, res pectively . [Conclusion ]The method is si m p le, rap id and accurate f or detecting the residues of tetracycline antibiotics in meat . Key words 　HPLC; Oxytetracycline; Tetracycline; Chlortetracycline; Doxycycline; Residue

1

2

1

　　在畜牧业生产过程中, 为预防和治疗畜禽疾病, 促进动物的生长与繁殖, 加剂, , 效果和便宜的价格, 种。品种主要有金霉素(Chl ortetracycline ) 、土霉素(Oxytetra 2

cycline ) 、四环素(Tetracycline ) 和强力霉素(Doxycycline ) 等4

1. 2甲醇((色谱纯) 、柠檬酸一水合

22三氯乙酸(T CA ) 等1. 3　仪器与设备　Varian LC 2920高效液相色谱仪、二极管

阵列检测器(P DA ) 、N2000型色谱工作站、高速匀浆机、离心机、pH 计、电子天平和精密移液枪。

1. 4　色谱条件　Nova 2PakC 18色谱柱:(150mm ×3. 9mm, 4

种, 均具有共同的基本母核(氢化骈四苯) , 仅取代基有所不同。这类抗菌素的抗菌谱最广, 对大多数革兰氏阳性菌和阴性菌都很敏感, 主要用于布鲁氏菌病、炭疽、大肠杆菌、急性呼吸道感染和乳房炎等的防治。此外, 还被应用于动物各种传染性疾病的预防和治疗。但是, 这些药物会在畜禽体内残留, 并随肉、乳、蛋等食品进入人体, 对人体健康产生有害影响, 可使机体内病菌耐药性增加, 从而造成人体免疫系统的功能降低。为保护人类的健康, 近年来各国均对肉食品中四环素族抗生素的残留情况加强了监控和检验, 并规定了一些药物在食品中的最大允许残留量(简称MRL ) 。美国F DA 规定四环素在猪肉中的残留量小于80μg/kg;国际卫生组织和欧盟规定四环素在猪肉中的最大残留量为100μg/kg; 我国在无公害畜禽肉安全要求中规定的最高限量为100μg/kg[2]。目前, 测定抗生素的主要方法有微生物法和高效液相色谱法

[3-4]

[1]

μm ) ; 柱温:室温; 检测波长:355n m; 流速:0. 2m l/min; 进样体积:10μl 。

1. 5　溶液配制

1. 5. 1　土霉素、四环素、金霉素和强力霉素标准储备液配

制。精密称取土霉素、四环素、金霉素和强力霉素标准品各1

mg, 用甲醇定容至100m l 棕色容量瓶, 制得4种浓度均为10mg/L的标准储备液, 置于4～6℃冰箱保存备用。其他低浓

度标准溶液用时现配。

1. 5. 2　土霉素、四环素、金霉素和强力霉素混合标准工作液

配制。取土霉素和四环素标准储备液各1m l; 取金霉素和强力霉素标准储备液各2m l, 置于100m l 棕色容量瓶中, 用甲醇定容。混合标准溶液中土霉素和四环素浓度为100μg/L,金霉素和强力霉素浓度为200μg/L。

1. 5. 3　提取液的配制。称取11. 8g 柠檬酸一水合物, 13. 72g 磷酸氢二钠二水合物和33. 62g E DT A 22Na 溶解于1L 水中

。笔者应用Varian 高效液相色谱仪测定肉

类抗生素残留量, 对色谱分离参数, 包括色谱柱、流动相配比、缓冲液、温度和检测波长等, 进行系统的研究, 以期建立一种能够同时分离和定量测定猪肉食品中四环素族抗生素的新方法。

1　材料与方法

1. 1　试验材料　猪腿肉, 来自市售动物制品。

作者简介　池利民(1956-) , 女, 北京人, 教授, 从事分析化学、无机和

有机化学的教学和科研工作。

收稿日期　2009211224

配制成Na 2E DT A 2Mc Ilvaine 缓冲液, 作为此次四环素类抗生素的提取液。

1. 6　测定方法　取5. 00g 动物组织样品, 加入1m l 土霉素、

四环素、金霉素和强力霉素混合标准工作液, 置于50m l 聚丙烯离心管中, 涡旋, 震荡, 加入25m l Na 2E DT A 2Mc Ilvaine 缓冲溶液提取, 摇匀, 再加入2m l 50%三氯乙酸除去蛋白质, 均质, 6000r/min 离心10m in, 过滤, 再用25m l Na 2E DT A 2Mc Il 2

vaine 缓冲溶液提取一次, 过滤合并上清液。调上清液的pH

值至4. 5, 加入15m l 乙酸乙酯, 6000r/min 离心10m in, 取上

38卷7期　　　　　　　　　　　　　　　　池利民等　HP LC 测定猪肉食品中四环素族抗生素残留3549

清液, 再用15m l 乙酸乙酯重复提取一次, 合并上清液, 用旋转蒸发仪浓缩至尽干, 加入3m l Na 2E DT A 2Mc Ilvaine 缓冲溶液, 超声波震荡仪超声, 过HLB 固相萃取小柱, 先用3m l 甲醇, 5m l 超纯水活化, 取3m l 上述前处理溶液上样, 用5m l 甲醇, 5m l 水溶液淋洗。用真空泵抽干, 加入6m l 甲醇洗脱, 然后用N 240℃吹干, 用1m l 的50%甲醇水溶液溶解, 经0145μm 滤膜过滤, 最后, 滤液进行高效液相分析。

2　结果与分析

2. 1　提取液最佳pH 值的选择　分别用6个不同pH 值的0. 1mol/L的Na 2E DT A 2Mc Ilvaine 缓冲溶液, 提取1m l 的四环

表2　土霉素、四环素、金霉素和强力霉素的线性方程和相关系数

Table 2　L i n ear equa ti on and correl a ti on coeff i ci en t of O TC, TC, CTC

and DC

样品

Tetracycline antibi otics OT C T C CT C DC

线性方程

L inear equati on

Y =40. 897X -202

794Y =23. 2981X -1. 1205Y =8. 1658X -0. 4721Y =7. 9870X -1. 6104

相关系数

Correlati on 0. 99930. 9997

0. 99950. 9996

素类抗生素的混合标准工作液

[3]

。然后, 过HLB 固相提取

小柱(3cc, 60mg ) , 6m l 甲醇洗脱, 氮气吹干, 用1m l 的50%甲醇水溶液定容, 进样测定, 得出在不同pH 值情况下的回收率。从表1可见, 土霉素(OT C ) 和四环素(T C ) 的回收率较高也比较稳定, 而金霉素(CT C ) 和强力霉素(DC ) 的回收率较低, 原因可能是HLB 固相萃取柱在某些pH 值范围对其保留的较少。4种抗生素的回收率均在pH 值为4. 5时较高。

表1　0. 1mol/L的Na 2E D TA 2M c Ilva i n e 缓冲溶液不同pH 值的回

收率

Table 1　Effects of pH va lue of 0. 1mol/LNa 2E D TA 2M c Ilva i n e buffer

soluti on on recovery ra te

pH 值pH value 3. 54. 04. 55. 05. 56. 0

OT C 90. 693. 1100. 896. 497. 391. 5

T C 96. 4102. 190. 188. 584. 2

CT 80. 179. 683. 578. 372. 167. 8

64. 377. 579. 778. 874. 373. 4

图1i g . 1Chro w tetracycli n e anti bi oti cs

2. 2　色谱柱的选择　四环素类抗生素是两性化合物, 呈弱

极性, 在弱酸性条件下较为稳定。笔者用C 18(5μm, 4. 6mm

×250mm ) 和Nova 2PakC 18(4μm, 3. 9mm ×150mm ) 色谱柱对四环素和土霉素进行反相色谱分离。试验结果表明, No 2

va 2PakC 18色谱柱分离效果较好, 原因可能是由于Nova 2PakC 18

图2　加标样品的高效液相色谱图

F i g . 2　Chro ma togram w ith tetracycli n e an ti bi oti cs

2. 7　回收率及精密度试验　分别向适量空白样品中添加

高、中和低3种浓度的混合标准溶液, 添加水平见表3, 按上述样品处理和色谱条件进行回收率及精密度试验, 结果如表

3所示。

表3　回收率及精密度测定结果

Table 3　D eter m i n ed results of recovery ra te and prec isi on degree

色谱柱的填料粒小, 表面积大, 柱效高, 增强了溶质分子的分离度。此外, 试验结果还表明, 柱温对四环素的分离影响不大。

2. 3　检测波长的选择　用二极管阵列检测器分别对土霉

素、四环素、金霉素和强力霉素进行紫外光谱扫描, 结果显示, 4种组分在355n m 处均有最大吸收, 故该方法的最佳检测波长为355n m 。

2. 4　标准曲线及线性关系　以峰面积对浓度作校正曲线,

样品

Tetracycline

antibi otics OT C

添加浓度μg/L平均回收率∥%

测定次数

Deter m ined ti m es

[1**********]相对偏差

%

RSD

Added Mean recovery concentrati on rate [***********][***********]3. 84. 89. 68. 80. 86. 71. 83. 86. 81. 87. [1**********]得线性回归方程, 发现土霉素、四环素、金霉素和强力霉素在10～100μg/L范围内线性关系良好, 其线性方程和相关系数如表2所示。

2. 5　样品的测定　空白样品及向空白样品中添加混合标准

T C

1

5

CT C

15

DC

1溶液的加标样品, 经样品处理和色谱测定所得色谱图分别如图1和2所示。

2. 6　最低检测限　取混合标准工作液50～400μg/L进行测

定, 结果表明, 土霉素、四环素、金霉素和强力霉素的最低检测度为100μg/L。

8. 5. 3. 9. 6. 3. 7. 4. 2. 6. 4. [1**********](下转第3656页)

3656　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2010年

m in 颜色由红变为橙色, 15m in 以后颜色由橙色依次变淡。收波长由350n m 渐变为388n m, 说明苏丹III 光化学降解的产物之间在催化剂Ti O 2

存在下生成一种新的吸光物质。

苏丹III 在乙醇/氯仿混合体系中光化学降解, 颜色变化是因为偶氮键的断裂, 说明偶氮键是染料化合物的主要结构。吸

图3　氙灯照射下苏丹III -乙醇体系的吸收光谱

F i g . 3　UV 2V is spectra of Sudan III soluti on usi n g ethanol a s solven t under Xenon

3　结论

苏丹Ⅲ在乙醇/氯仿混合体系和无水乙醇溶液中光解速率存在显著差异, 氙灯光照下, 光解的半衰期大小顺序为乙醇/氯仿混合体系>无水乙醇溶液。

苏丹Ⅲ在3种光源下光解速率顺序为氙灯>紫外灯>太阳光, 这主要是由于各种光源的发射光谱及强度不同所致; 氙灯发射光谱在300～1000n m, 氙灯加350n m 除去波长小于350n m 的光, 350～100

n m; n 作用到达地面的波长大于m 。

苏丹III 在乙醇/氯仿混合体系中光化学降解, 颜色变化是因为偶氮键的断裂, 吸收波长由350n m 渐变为388n m, 说明苏丹III 光化学降解的产物之间在催化剂Ti O 2存在下生成一种新的吸光物质, 苏丹III 在有机溶剂中的光降解机理复杂, 详细机理有待进一步探索。参考文献

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(上接第3549页) 3　结论与讨论

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笔者建立了一种基于HLB 固相萃取小柱和高效液相色谱仪的测定肉类中土霉素、四环素、金霉素和强力霉素残留量的新方法。结果表明, 该方法操作简便, 分离完全, 3个添加水平的回收率在68. 5%～94. 7%, 相对标准偏差范围为

2. 5%～9. 1%。该方法具有较高的灵敏度和精密度, 适用

于肉类中四环素族抗生素残留量的检测, 并可提高检验工作效率和节省检验时间。