关于冻干细菌的问题，有没有人指导一下
有没有大侠知道如何冻干细菌，我们试过用肉汤和生理盐水做载体，-70度冻一夜，然后进行冻干，不过总是冻成贴壁的膜状，希望可以冻干成卫生部质控品那种粉末状，请问有没有人可以知道一下 收集你需要的菌体量，液体培养后离心合并菌体，用生理盐水或缓冲液离心洗涤菌体，尽量将多余的生理盐水移去，之后于-20度预冻几个小时就可以，再放入真空冷冻干燥机内冻干，一般过夜就可以，或者更长20小时左右，是菌体量而定，可能你冻干的时间不够或者离心不够充分，希望对你有帮助！
在恶劣环境下生长时,某些面包酵母菌种体内能够积累大量海藻糖.该论文针对这种情况,通过高温诱导手段使面包酵母大量积累胞内海藻糖.并对海藻糖的几种分析方法进行了比较,建立了有效的分析手段.冷冻干燥是保存微生物的一般方法,但必须加入一定的保护剂,该论文用海藻糖作为保护剂对双歧杆菌和脂肪酶分别进行了冷冻干燥,考察保护后双歧杆菌的冻干存活率和存放存活率.实验中加入了不同的保护剂如脱脂奶粉和谷安酸钠等物质,同以海藻糖为保护剂的冻干菌粉相比较,同时对各种不同的保护剂加入不同的量,探索保护的规律,以找出最优条件.最后,对海藻糖保护双歧杆菌的机理进行了探索,结果表明,海藻糖能有效地保护双歧杆菌可能是海藻糖中的羟基和双歧杆菌细胞膜中的磷脂端基以氢键形式结合,代替了细胞膜在正常情况下的结构.而且由于海藻糖的加入,使细胞膜的相变温度降低,在再水化过程中避免了因细胞膜相变引起的致命损伤.
以嗜酸乳杆菌KLDS AD1和KLDS AD2和双歧杆菌KLDS 2.0604为研究对象,研究冻干保护剂脱脂乳、蔗糖、海藻糖、葡聚糖和Vc钠盐对各菌株冻干存活率的影响,通过单因素、正交实验筛选出优化组合,得出冻干存活率均在87.81%以上。并研究采用优化后的冻干保护剂制备的各菌粉在4℃和25℃下的保存稳定性。保存稳定性实验表明:3株益生菌菌粉在4℃和25℃下保存12个月后,菌粉的活菌数最多下降2个数量级,其活菌数均在1.0×108cfu/g以上。
2.3.1.4稳定期收集菌体
离心收集菌体与适宜保护剂混合。
2.3.1.5冷冻干燥
冷冻干燥，制成菌粉。
2.2.4EBY/ROL冻干处理
黄登峰. 重组米黑根毛霉脂肪酶全细胞催化生物柴油的合成[D]. 华南理工大学, 2010.
由于冻干脱水过程中造成水和蛋白质中的极性基团形成的部分氢键被破坏， 使得部分酶蛋白失去应有空间构象，导致酶活力稍有下降。但总体来说冻干对细 胞催化的影响不大，且冻干粉易于运输、保存，方便其在工业化生产中使用。 Ca2+对毕赤酵母表面展示 RML 的合成活力有明显的激活作用，而 Cu2+对毕赤酵母
表面展示 RML 的合成活力有明显的抑制作用。在反应体系中，添加 50 mmol/L 的 Cu2+时毕赤酵母表面展示 RML 的相对合成活力只有85.42%左右；与未处理的全细胞相比，当添加相同浓度的 Ca2+时，其合成活力提高了 5%。
南君勇. 真空冷冻干燥技术制备酵母菌菌粉的研究[D]. 天津大学, 2007. DOI:10.7666/d.y1359420.
2.3.2 离子和冻干保护剂对全细胞催化剂的预处理
发酵结束后，收集酵母菌体，用去离子水清洗三次，然后用含有不同金属离子和冻干保护剂的磷酸盐缓冲液重悬(50 mmol/L，pH 8.0)，在经过预处理后，通过真空冷冻干燥可得到展示 RML 的毕赤酵母全细胞粉。
如果冻干前在菌悬液中添加一些保护剂，如山梨醇、蔗糖、果糖、海藻糖、葡萄糖、聚乙二醇、甘油等，能提高其活性和稳定性。这些物质在冻干过程中其羟基可与蛋白质中的极性基团形成氢键，代替蛋白质极性基团周围的水分子，使蛋白质表面形成一层假定的水化膜，保护氢键的连接位置不直接暴露在周围环境中，稳定蛋白质的高级结构，防止其因冻干而变性。
可知海藻糖、果糖和山梨醇等物质在冻干过程中能减少酶蛋白的变性，从而提高该酶的合成活力。与未处理的全细胞酶粉相比，冻干中加入这三种物质后，合成活力分别提高 17%、20.29%和 20.72%。
本研究讨论了七种冻干保护剂对展示 RML 的毕赤酵母全细胞转酯活力的影响，与未添加保护剂相比，冻干过程中加入海藻糖后，其转酯活力为 84.13 U/g-dry cell，转酯活力提高了 64.06%。
菌体分离是制备活菌菌剂重要的中间工艺环节，目前用于细胞分离的方法主要有离心和超滤。研究表明，超滤效果优于离心，而超速离心效果优于普通离心。但是，离心比超滤操作简便，设备清洗和消毒方便，不易污染，其应用较超滤普遍。
值得注意的是离心过程中：一方面，由于离心力机械作用的影响，可能造成部分菌体死亡；另一方面，部分菌体必然残留在上清液中而流失。如果离心工艺掌握不当，菌体死亡率和流失率随之增高，使活菌收得率大大降低，直接导致最终制得的菌剂中活菌含量下降而影响产品质量。
酵母菌在 6000rpm（10min）的离心条件下，有最大的离心收得率 78.64％，8000rpm（20min）的离心条件下，离心收得率最低，仅为 62.06％。酵母菌适宜离心的离心时间为 10min，离心转速为 6000rpm。在相同转速下随着离心时间的增加，菌体离心收得率下降，而相同离心时间随着转速的变大，菌体离心收得率呈先上升后下降的趋势。这说明离心时间的增加虽然可以减少菌体随上清液的流失，但是对菌体造成的死亡影响更大；离心转速在 4000rpm～6000rpm范围内增大，可以有效地减少菌体随上清液地流失，且对菌体造成的死亡影响较小；离心转速在 6000rpm～8000rpm范围内增大，对菌体造成的死亡影响大于减少菌体流失的影响。因此，酵母菌适宜离心的离心时间为 10min，离心转速为 6000rpm（菌体初始活菌数浓度 5.43×109cfu/ml，离心腔温度－8～4℃）。
本实验中选择的保护剂有：甘油、蔗糖、L－半胱氨酸盐酸盐、脱脂奶粉、阿拉伯胶、β－环状糊精、吐温－80。虽然有报道说明，海藻糖与侧金盏花醇为很多菌体的最佳冷冻干燥保护剂，后来确定酵母菌的复合冻干保护剂配方组成为 5％脱脂奶粉、5％甘油、10％蔗糖、15％β－环状糊精。
2．3．2．4注意事项
加入酒精时要注意均衡缓速，同时充分震荡，否则溶液将出现乳白色絮状物，后期变色观察造成影响。
制备橄榄油乳化液时，尽可能提高乳化程度，会比较有利于橄榄油在脂肪酶的作用下分解。 指示剂显色不太明显，当滴定接近终点时，需要仔细观察溶液颜色的变化，以防超过滴定终点。 pbs的作用
PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。
原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应，所以使用PBS是首选。
关于冻干细菌的问题，有没有人指导一下
有没有大侠知道如何冻干细菌，我们试过用肉汤和生理盐水做载体，-70度冻一夜，然后进行冻干，不过总是冻成贴壁的膜状，希望可以冻干成卫生部质控品那种粉末状，请问有没有人可以知道一下 收集你需要的菌体量，液体培养后离心合并菌体，用生理盐水或缓冲液离心洗涤菌体，尽量将多余的生理盐水移去，之后于-20度预冻几个小时就可以，再放入真空冷冻干燥机内冻干，一般过夜就可以，或者更长20小时左右，是菌体量而定，可能你冻干的时间不够或者离心不够充分，希望对你有帮助！
在恶劣环境下生长时,某些面包酵母菌种体内能够积累大量海藻糖.该论文针对这种情况,通过高温诱导手段使面包酵母大量积累胞内海藻糖.并对海藻糖的几种分析方法进行了比较,建立了有效的分析手段.冷冻干燥是保存微生物的一般方法,但必须加入一定的保护剂,该论文用海藻糖作为保护剂对双歧杆菌和脂肪酶分别进行了冷冻干燥,考察保护后双歧杆菌的冻干存活率和存放存活率.实验中加入了不同的保护剂如脱脂奶粉和谷安酸钠等物质,同以海藻糖为保护剂的冻干菌粉相比较,同时对各种不同的保护剂加入不同的量,探索保护的规律,以找出最优条件.最后,对海藻糖保护双歧杆菌的机理进行了探索,结果表明,海藻糖能有效地保护双歧杆菌可能是海藻糖中的羟基和双歧杆菌细胞膜中的磷脂端基以氢键形式结合,代替了细胞膜在正常情况下的结构.而且由于海藻糖的加入,使细胞膜的相变温度降低,在再水化过程中避免了因细胞膜相变引起的致命损伤.
以嗜酸乳杆菌KLDS AD1和KLDS AD2和双歧杆菌KLDS 2.0604为研究对象,研究冻干保护剂脱脂乳、蔗糖、海藻糖、葡聚糖和Vc钠盐对各菌株冻干存活率的影响,通过单因素、正交实验筛选出优化组合,得出冻干存活率均在87.81%以上。并研究采用优化后的冻干保护剂制备的各菌粉在4℃和25℃下的保存稳定性。保存稳定性实验表明:3株益生菌菌粉在4℃和25℃下保存12个月后,菌粉的活菌数最多下降2个数量级,其活菌数均在1.0×108cfu/g以上。
2.3.1.4稳定期收集菌体
离心收集菌体与适宜保护剂混合。
2.3.1.5冷冻干燥
冷冻干燥，制成菌粉。
2.2.4EBY/ROL冻干处理
黄登峰. 重组米黑根毛霉脂肪酶全细胞催化生物柴油的合成[D]. 华南理工大学, 2010.
由于冻干脱水过程中造成水和蛋白质中的极性基团形成的部分氢键被破坏， 使得部分酶蛋白失去应有空间构象，导致酶活力稍有下降。但总体来说冻干对细 胞催化的影响不大，且冻干粉易于运输、保存，方便其在工业化生产中使用。 Ca2+对毕赤酵母表面展示 RML 的合成活力有明显的激活作用，而 Cu2+对毕赤酵母
表面展示 RML 的合成活力有明显的抑制作用。在反应体系中，添加 50 mmol/L 的 Cu2+时毕赤酵母表面展示 RML 的相对合成活力只有85.42%左右；与未处理的全细胞相比，当添加相同浓度的 Ca2+时，其合成活力提高了 5%。
南君勇. 真空冷冻干燥技术制备酵母菌菌粉的研究[D]. 天津大学, 2007. DOI:10.7666/d.y1359420.
2.3.2 离子和冻干保护剂对全细胞催化剂的预处理
发酵结束后，收集酵母菌体，用去离子水清洗三次，然后用含有不同金属离子和冻干保护剂的磷酸盐缓冲液重悬(50 mmol/L，pH 8.0)，在经过预处理后，通过真空冷冻干燥可得到展示 RML 的毕赤酵母全细胞粉。
如果冻干前在菌悬液中添加一些保护剂，如山梨醇、蔗糖、果糖、海藻糖、葡萄糖、聚乙二醇、甘油等，能提高其活性和稳定性。这些物质在冻干过程中其羟基可与蛋白质中的极性基团形成氢键，代替蛋白质极性基团周围的水分子，使蛋白质表面形成一层假定的水化膜，保护氢键的连接位置不直接暴露在周围环境中，稳定蛋白质的高级结构，防止其因冻干而变性。
可知海藻糖、果糖和山梨醇等物质在冻干过程中能减少酶蛋白的变性，从而提高该酶的合成活力。与未处理的全细胞酶粉相比，冻干中加入这三种物质后，合成活力分别提高 17%、20.29%和 20.72%。
本研究讨论了七种冻干保护剂对展示 RML 的毕赤酵母全细胞转酯活力的影响，与未添加保护剂相比，冻干过程中加入海藻糖后，其转酯活力为 84.13 U/g-dry cell，转酯活力提高了 64.06%。
菌体分离是制备活菌菌剂重要的中间工艺环节，目前用于细胞分离的方法主要有离心和超滤。研究表明，超滤效果优于离心，而超速离心效果优于普通离心。但是，离心比超滤操作简便，设备清洗和消毒方便，不易污染，其应用较超滤普遍。
值得注意的是离心过程中：一方面，由于离心力机械作用的影响，可能造成部分菌体死亡；另一方面，部分菌体必然残留在上清液中而流失。如果离心工艺掌握不当，菌体死亡率和流失率随之增高，使活菌收得率大大降低，直接导致最终制得的菌剂中活菌含量下降而影响产品质量。
酵母菌在 6000rpm（10min）的离心条件下，有最大的离心收得率 78.64％，8000rpm（20min）的离心条件下，离心收得率最低，仅为 62.06％。酵母菌适宜离心的离心时间为 10min，离心转速为 6000rpm。在相同转速下随着离心时间的增加，菌体离心收得率下降，而相同离心时间随着转速的变大，菌体离心收得率呈先上升后下降的趋势。这说明离心时间的增加虽然可以减少菌体随上清液的流失，但是对菌体造成的死亡影响更大；离心转速在 4000rpm～6000rpm范围内增大，可以有效地减少菌体随上清液地流失，且对菌体造成的死亡影响较小；离心转速在 6000rpm～8000rpm范围内增大，对菌体造成的死亡影响大于减少菌体流失的影响。因此，酵母菌适宜离心的离心时间为 10min，离心转速为 6000rpm（菌体初始活菌数浓度 5.43×109cfu/ml，离心腔温度－8～4℃）。
本实验中选择的保护剂有：甘油、蔗糖、L－半胱氨酸盐酸盐、脱脂奶粉、阿拉伯胶、β－环状糊精、吐温－80。虽然有报道说明，海藻糖与侧金盏花醇为很多菌体的最佳冷冻干燥保护剂，后来确定酵母菌的复合冻干保护剂配方组成为 5％脱脂奶粉、5％甘油、10％蔗糖、15％β－环状糊精。
2．3．2．4注意事项
加入酒精时要注意均衡缓速，同时充分震荡，否则溶液将出现乳白色絮状物，后期变色观察造成影响。
制备橄榄油乳化液时，尽可能提高乳化程度，会比较有利于橄榄油在脂肪酶的作用下分解。 指示剂显色不太明显，当滴定接近终点时，需要仔细观察溶液颜色的变化，以防超过滴定终点。 pbs的作用
PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称，不仅伪狂犬病毒要用它稀释，一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。
原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，蒸馏水不具有盐平衡作用，可以破坏生物蛋白的结构及生物特性；生理盐水不具有调整pH的作用，对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应，所以使用PBS是首选。