学号：[1**********]0
本 科 学 年 论 文
题 目： 植物总RNA提取技术简介 学 院： 生命科学学院 专 业： 生物技术
年 级： 2013级 姓 名： 贾 凯 指导教师： 张继星（教授） 完成日期： 2015年4月29日
目 录
中文摘要及关键词 .......................................................................................................... 1 英文摘要及关键词 .......................................................................................................... 2 前 言 ........................................................................................................................................ 3
1实验试剂及原理 ......................................................................................................... 4
1.1提取试剂（提取液） ........................................................................................... 4 1.2氯仿 ........................................................................................................................... 4 1.3异丙醇........................................................................................................ 4 1.4降糖物质.................................................................................................... 4 1.5终浓度75%的乙醇（DEPC处理）和DEPC水 .................................... 4
2实验基本操作过程 .................................................................................................... 5
2.1植物组织研碎和破碎................................................................................ 5 2.2蛋白质分离过程........................................................................................ 5 2.3 RNA沉淀 .................................................................................................. 5 2.4 RNA沉淀清洗 .......................................................................................... 5 2.5 RNA溶解 .................................................................................................. 5
3实验结果检测 ............................................................................................................... 6
3.1 RNA完整性的检测 .................................................................................. 6 3.2 RNA结果成像分析 .................................................................................. 6
4 实验注意事项 ............................................................................................................. 6
4.1实验准备灭菌............................................................................................ 6 4.2实验中避免与外界过多接触.................................................................... 6
结束语 ........................................................................................................................................ 8 参考文献 ................................................................................................................................ 10 致 谢 ........................................................................................................................................ 9
摘 要
植物的RNA是分子生物学研究的前提。在进行Northern杂交分析、纯化mRNA、以用于体外翻译或建立cDNA文库、RT-PCR及差示分析等分子生物学研究时，都需要高质量的RNA。而我们在提取RNA的过程中往往得到的是植物个体的全部RNA(mRNA、tRNA、rRNA等)。因此，我们一般也常常直接提取植物组织的总RNA。这样方便、快捷地提取出植物组织中的RNA并可以直接利用。对于植物总RNA的提取技术的了解将有助于我们对分子生物技术更加了解，对分子生物学研究更加明确。
关键词：植物；RNA；分子生物学
Abstract
The RNA is the precondition of molecular biology of plants. In Northern hybridization analysis, purification mRNA, for in vitro translation or build a cDNA library, rt-pcr and the molecular biology research such as differential analysis, require high quality of the RNA. And we are in the process of extracting RNA tend to get the plant individual total RNA (mRNA, tRNA, rRNA, etc.). Therefore, we usually also often directly the total RNA extraction of plant tissue. So convenient and quick to extract RNA from plant tissues and can be used directly. Knowledge of plant total RNA extraction technology will help us more understanding of molecular biotechnology, more clear for molecular biology research.
Key words：plants;RNA;molecular biology
前 言
RNA分子分离和提取是分子生物学中的基本内容，是进行基因表达分析的基础。我们都知道不论是基因克隆，还是转基因首先都得有目的基因。而目的基因的来源主要有两种手段，一是通过DNA的复制来获取目的基因；二是通过RNA的反转录来获取目的基因。但因真核生物基因组DNA非常庞大，而且含有大量重复序列，无论用电泳分离技术还是用杂交方法都难以直接分离靶基因片段。而cDNA则来自反转录的mRNA，不含冗余序列，通过特异性探针筛选cDNA文库，可以较快地分离到相关基因。所以对于目的基因的提取一般选用总RNA提取法。目前实验室提RNA的常用方法有异硫氰酸胍-苯酚抽提法、SDS/酚抽提法、氯化锂沉淀法以及商品化的试剂盒等【1】。这些方法的基本原理都是先将细胞结构破坏掉，使细胞内的物质流露出来，然后通过氯仿、异丙醇等化学试剂将杂质去除，这样才能得到较为高质量的RNA，只是每种方法各有偏重，使所得RNA的纯度不同。另外，对于不同物种乃至同一物种不同部位RNA的提取方法也不尽相同，但其都具有相同的实验原理。不同物种或同种物种不同部位的组织的蛋白质、多糖、酚类、脂类等成分的含量具有较大差异，不同部位的组织的幼嫩程度也不一样【2】，因此从不同部位的材料或相同材料不同部位提取RNA时难点各异。对于实验结果的检验主要通过对RNA电泳后的三条带的观察，分别为28S、18S、5S。一般情况下，28S和18S条带清晰明亮，5S条带浅，表明提取的总RNA完整型好。
1实验试剂及原理
1.1提取试剂（提取液）
目前广泛用于抽提RNA的试剂是Trizol试剂，还有一种是RNAiso Plus（Total
【3】
RNA提取试剂）。Trizol试剂提取效果较好，但价格较为昂贵；RNAiso Plus
提取效果不如Trizol，但价格相对便宜。但它们的原理是相同的。即都可以破坏细胞结构，使存在于细胞质基质及核内的RNA释放出来，并使核糖体蛋白与RNA分子分离，还能保证RNA的完整。但不同厂家生产的提取试剂提取出来的效果不同，这是因为每种试剂内添加的成分含量不同，在破会细胞结构时侧重点不同。例如Trizol试剂对物质筛选高，因此得出的RNA含量较低，但纯度一般较高。因此，选取合适的提取试剂对于实验结果是很重要的。 1.2氯仿
不论何种方法对于氯仿的要求基本都是一致的。都加上清液体积的1/5。这是因为氯仿可以与上清液中的蛋白质发生等量的化学反应形成白色沉淀。我们通过实验可以很清楚的观察到，在加入氯仿离心后EP管中会清楚的出现三层液相，上层为水相，中层为蛋白质变性相，下层为有机相。RNA是溶于水相的。在实验过程中对于氯仿的抽提可以重复多次，进而把蛋白质分离。 1.3异丙醇
异丙醇是整个RNA提取过程中沉淀RNA的物质。异丙醇通过与糖类发生反应使糖类与RNA沉淀下来。在每个实验中加入异丙醇的量与上清液是等量的。 1.4降糖物质
因为植物组织中含有大量淀粉或其他糖类物质，而RNA也是由五碳糖构成，因此糖类物质的大量存在会影响RNA的含量，对于含糖物质高的植物组织有必要降糖。降解糖类物质的方法有好多种，如氯化锂沉淀、醋酸钠沉淀多糖法、高浓度氯化钠沉淀RNA法、低浓度乙醇沉淀多糖法等【4】。但这种方法易减少RNA的含量，在除多糖的过程中会除掉一部分RNA，导致实验结果得到的RNA含量大大减少。在提取含糖量较少组织的RNA时，不采用该步骤。 1.5终浓度75%的乙醇（DEPC处理）和DEPC水
这里要求一定要是DEPC处理过的（用DEPC配制的）乙醇,DEPC水会与RNA溶解，这时的乙醇会达到清洗RNA的作用，除去RNA中的杂质，保证RNA
的纯度。在实验过程中可重复多次。
DEPC水和RNase-free水都是可以将RNA溶解的试剂。
2实验基本操作过程
每一个过程对于实验的结果都有重要的影响。实验的基本步骤共分为五步，植物组织研碎和破碎、蛋白质分离过程、RNA沉淀、沉淀清洗、RNA溶解【5】。 2.1植物组织研碎和破碎
取新鲜植物组织材料置于高压过的玻璃培养皿中或一次性培养皿中，冷藏在-80℃冰柜中，研磨时先将研钵用液氮预冷，然后将冷冻好的材料转移到研钵中仔细研磨，在研磨过程中要不断的加入液氮，控制研磨的温度，直至磨碎为止（无明显颗粒，如果没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量）。
研磨好的材料分装与EP管中，要求每管大约2克，然后向每管中加入1ml提取试剂，充分震荡，静置、离心。 2.2蛋白质分离过程
不同的方法在这个过程中也不尽相同。关键步骤是加1/5体积的氯仿。这一步在每种方法中都有出现。在上一步离心好的混合物中，抽取上清液体于新的EP管中再加入氯仿，剧烈震荡使两相液体彻底混匀（如若需要除去多糖也可在这一步加试剂）、静置、离心。 2.3 RNA沉淀
仔细取上述混合液的上清液于新的EP管中，切不可抽取中间层的任何沉淀，然后加入等体积的异丙醇用来沉淀RNA与多糖，然后轻轻上下颠倒混匀、静置、离心。
2.4 RNA沉淀清洗
离心后会发现管底会有小片白色沉淀，这时抽出上清液体，向其内顺着管壁
【6】缓缓加入1ml的75%乙醇（75%的乙醇要用0.75ml和0.25ml的DEPC水配制）。
用乙醇液体捶打起沉淀进行洗涤，然后离心。为了得到纯度更高的RNA可以多次重复此步骤，这一步对于RNA的质量不起主要作用。 2.5 RNA溶解
经上步得到的沉淀出去上清后舱盖干燥，一般干燥1-2min，若干燥时间长了容易使RNA不溶于DEPC水。一般DEPC水的填加量为0.02-0.2ml（需要根
据沉淀的量和所需浓度来定）。将提出的RNA保存到-80℃中待用【7】。
3实验结果检测
3.1 RNA完整性的检测
一般实验室都用琼脂糖凝胶电泳检测所提出的RNA的完整性。吸取5微升RNA溶解液与1微升染色指试剂混合点样。待电泳结束于凝胶成像系统观察带的成像【8】。
3.2 RNA结果成像分析
要看所得RNA是否完整首先观察凝胶成像系统中是否呈现的是三条带，且自上而下的28S和18S 条带清晰明亮，28S比18S条带明亮，5S条带浅，这时的RNA是完整的；若加样孔和泳道有明显杂质，同时RNA条带不清晰，28S比18S条带弱，5S条带较亮，表明RNA有一定的降解；点样孔不清亮，且提取RNA呈弥散状，说明RNA降解十分严重；若紫外光检测点样孔不清晰，RNA电泳检测不明显，说明没有提出RNA【9】。
以上几种介绍就是判别RNA完整性的方法。因实验都要求高纯度的RNA，因此对于所得RNA的筛选也是非常严格的。
4 实验注意事项
在整个实验过程中最忌讳的就是外源污染，因RNA所得RNA含量少而外
【10】界降解RNA的酶（RNase）比较多，在实验过程中严格的控制外界酶的进入
显得是十分必要的，这也是决定实验成功的关键因素之一。而防止酶的干扰一般从以下方面做起。 4.1实验准备灭菌
实验所使用的一切玻璃器皿要经过DEPC水的浸泡处理，晾干后再高压处理方可使用。同时在实验开始前要仔细清洁超净工作台和所使用的各种仪器和材料，并提前放进去开紫外线杀毒。
实验中所使用的枪头和离心管都是专用的，切勿与其他实验用具混用。实验前后对已开盒的枪头要严密包装。所使用的试剂也不能与其他实验混用。若有混用的仪器，在实验前一定要仔细消毒。 4.2实验中避免与外界过多接触
在研磨过程中，首先从-80℃中取出处理过研钵用液氮预冷。在研磨时要戴
口罩，戴手套，尽量避免讲话。在转移到离心管的过程中一定要迅速。
在实验过程中一定要勤换手套，且拒绝向外界交换实验器具，也尽量避免离开超净工作台，最好是两个人配合做实验，一个人负责超净里工作，另一个负责外部工作。
实验结束后要将RNA冷藏于-80℃冰箱中。凝胶电泳检测时，提前对电泳槽进行灭菌处理。
结束语
RNA是生物遗传、分子生物等重大课题研究的基础，因此对于RNA提取技术的了解也是十分必要的。首先从提取RNA的各种材料试剂入手，对每种试剂的作用及原理的了解有助于清晰实验的结构。进而再了解主要的实验步骤，这样对于整个实验有了一个基本的框架了解，再从实验结果检测和实验注意事项方面继续丰富、深化，对于整个实验有了一个彻底的认识。这样便有助于未来基础课程的学习，对于相关专业的学习也比较易接受。
参考文献
[1]杜运鹏,李双,何恒斌,杨爽,贾桂霞.百合鳞片总RNA提取方法的比较[J].分子植物育种,2010,04:832-836.
[2]陈高,单雷,周丽侠,唐桂英,毕玉平.花生总RNA提取方法比较研究[J].中国农学通报,2011,01:214-218.
[3]吕晋慧,陈阳,康红梅.一种有效的菊花总RNA提取方法[J].中国农学通报,2011,25:113-116.
[4]王玉成,张国栋,姜静.一种适用范围广的总RNA提取方法[J].植物研究,2006,01:85-88.
[5]赵锦,刘中成,代丽,刘孟军.枣不同器官和组织RNA提取方法的研究[J].植物遗传资源学报,2009,01:111-117.
[6]淳俊,郑彦峰,王胜华,陈放.一种广泛适用的RNA提取方法[J].生物化学与生物物理进展,2008,05:591-597.
[7]吴田,蓝增全.茶梅花瓣总RNA提取方法的比较和分析[J].中国农学通报,2013,28:129-133.
[8]冯立国,李婷琳,陈陈,栾晓芳,丁晗,张健.玫瑰花组织总RNA提取方法研究[J].扬州大学学报(农业与生命科学版),2013,04:104-107.
[9]王杰,王全,田娜,王瑜,王爱香,张克中,崔金腾.不同植物组织RNA提取方法的比较分析[J].北京农学院学报,2015,01:76-80.
[10]董姻然,陈湘宁,常希光,黄健.3种芹菜茎组织总RNA提取方法的比较研究[J].安徽农业科学,2014,08:2273-2275+2314.
致 谢
本篇学年论文是在我的导师张继星老师的指导下完成的，感谢老师的付出。在这两年里老师严格要求，使我在对待事物的态度上发生了很大的变化，尤其是在任何事物上表现出的一种严谨的态度。
对于实验室生活，我尤其感谢研一、大四、大三的师哥师姐们，是他们的耐心传授，使我们学到了更多的实验知识，不只是在实验上，在生活中，他们也一样毫不吝啬的教我一些知识。同时，也感谢和我一起并肩作战的同学们，谢谢你们的陪伴。
生命科学学院本科学年论文指导教师评分表
注：1、请参照上表标准，对学年论文分项打分，并填写在相应项目评分栏中。
2、计算出总分。若总分
评阅。
学号：[1**********]0
本 科 学 年 论 文
题 目： 植物总RNA提取技术简介 学 院： 生命科学学院 专 业： 生物技术
年 级： 2013级 姓 名： 贾 凯 指导教师： 张继星（教授） 完成日期： 2015年4月29日
目 录
中文摘要及关键词 .......................................................................................................... 1 英文摘要及关键词 .......................................................................................................... 2 前 言 ........................................................................................................................................ 3
1实验试剂及原理 ......................................................................................................... 4
1.1提取试剂（提取液） ........................................................................................... 4 1.2氯仿 ........................................................................................................................... 4 1.3异丙醇........................................................................................................ 4 1.4降糖物质.................................................................................................... 4 1.5终浓度75%的乙醇（DEPC处理）和DEPC水 .................................... 4
2实验基本操作过程 .................................................................................................... 5
2.1植物组织研碎和破碎................................................................................ 5 2.2蛋白质分离过程........................................................................................ 5 2.3 RNA沉淀 .................................................................................................. 5 2.4 RNA沉淀清洗 .......................................................................................... 5 2.5 RNA溶解 .................................................................................................. 5
3实验结果检测 ............................................................................................................... 6
3.1 RNA完整性的检测 .................................................................................. 6 3.2 RNA结果成像分析 .................................................................................. 6
4 实验注意事项 ............................................................................................................. 6
4.1实验准备灭菌............................................................................................ 6 4.2实验中避免与外界过多接触.................................................................... 6
结束语 ........................................................................................................................................ 8 参考文献 ................................................................................................................................ 10 致 谢 ........................................................................................................................................ 9
摘 要
植物的RNA是分子生物学研究的前提。在进行Northern杂交分析、纯化mRNA、以用于体外翻译或建立cDNA文库、RT-PCR及差示分析等分子生物学研究时，都需要高质量的RNA。而我们在提取RNA的过程中往往得到的是植物个体的全部RNA(mRNA、tRNA、rRNA等)。因此，我们一般也常常直接提取植物组织的总RNA。这样方便、快捷地提取出植物组织中的RNA并可以直接利用。对于植物总RNA的提取技术的了解将有助于我们对分子生物技术更加了解，对分子生物学研究更加明确。
关键词：植物；RNA；分子生物学
Abstract
The RNA is the precondition of molecular biology of plants. In Northern hybridization analysis, purification mRNA, for in vitro translation or build a cDNA library, rt-pcr and the molecular biology research such as differential analysis, require high quality of the RNA. And we are in the process of extracting RNA tend to get the plant individual total RNA (mRNA, tRNA, rRNA, etc.). Therefore, we usually also often directly the total RNA extraction of plant tissue. So convenient and quick to extract RNA from plant tissues and can be used directly. Knowledge of plant total RNA extraction technology will help us more understanding of molecular biotechnology, more clear for molecular biology research.
Key words：plants;RNA;molecular biology
前 言
RNA分子分离和提取是分子生物学中的基本内容，是进行基因表达分析的基础。我们都知道不论是基因克隆，还是转基因首先都得有目的基因。而目的基因的来源主要有两种手段，一是通过DNA的复制来获取目的基因；二是通过RNA的反转录来获取目的基因。但因真核生物基因组DNA非常庞大，而且含有大量重复序列，无论用电泳分离技术还是用杂交方法都难以直接分离靶基因片段。而cDNA则来自反转录的mRNA，不含冗余序列，通过特异性探针筛选cDNA文库，可以较快地分离到相关基因。所以对于目的基因的提取一般选用总RNA提取法。目前实验室提RNA的常用方法有异硫氰酸胍-苯酚抽提法、SDS/酚抽提法、氯化锂沉淀法以及商品化的试剂盒等【1】。这些方法的基本原理都是先将细胞结构破坏掉，使细胞内的物质流露出来，然后通过氯仿、异丙醇等化学试剂将杂质去除，这样才能得到较为高质量的RNA，只是每种方法各有偏重，使所得RNA的纯度不同。另外，对于不同物种乃至同一物种不同部位RNA的提取方法也不尽相同，但其都具有相同的实验原理。不同物种或同种物种不同部位的组织的蛋白质、多糖、酚类、脂类等成分的含量具有较大差异，不同部位的组织的幼嫩程度也不一样【2】，因此从不同部位的材料或相同材料不同部位提取RNA时难点各异。对于实验结果的检验主要通过对RNA电泳后的三条带的观察，分别为28S、18S、5S。一般情况下，28S和18S条带清晰明亮，5S条带浅，表明提取的总RNA完整型好。
1实验试剂及原理
1.1提取试剂（提取液）
目前广泛用于抽提RNA的试剂是Trizol试剂，还有一种是RNAiso Plus（Total
【3】
RNA提取试剂）。Trizol试剂提取效果较好，但价格较为昂贵；RNAiso Plus
提取效果不如Trizol，但价格相对便宜。但它们的原理是相同的。即都可以破坏细胞结构，使存在于细胞质基质及核内的RNA释放出来，并使核糖体蛋白与RNA分子分离，还能保证RNA的完整。但不同厂家生产的提取试剂提取出来的效果不同，这是因为每种试剂内添加的成分含量不同，在破会细胞结构时侧重点不同。例如Trizol试剂对物质筛选高，因此得出的RNA含量较低，但纯度一般较高。因此，选取合适的提取试剂对于实验结果是很重要的。 1.2氯仿
不论何种方法对于氯仿的要求基本都是一致的。都加上清液体积的1/5。这是因为氯仿可以与上清液中的蛋白质发生等量的化学反应形成白色沉淀。我们通过实验可以很清楚的观察到，在加入氯仿离心后EP管中会清楚的出现三层液相，上层为水相，中层为蛋白质变性相，下层为有机相。RNA是溶于水相的。在实验过程中对于氯仿的抽提可以重复多次，进而把蛋白质分离。 1.3异丙醇
异丙醇是整个RNA提取过程中沉淀RNA的物质。异丙醇通过与糖类发生反应使糖类与RNA沉淀下来。在每个实验中加入异丙醇的量与上清液是等量的。 1.4降糖物质
因为植物组织中含有大量淀粉或其他糖类物质，而RNA也是由五碳糖构成，因此糖类物质的大量存在会影响RNA的含量，对于含糖物质高的植物组织有必要降糖。降解糖类物质的方法有好多种，如氯化锂沉淀、醋酸钠沉淀多糖法、高浓度氯化钠沉淀RNA法、低浓度乙醇沉淀多糖法等【4】。但这种方法易减少RNA的含量，在除多糖的过程中会除掉一部分RNA，导致实验结果得到的RNA含量大大减少。在提取含糖量较少组织的RNA时，不采用该步骤。 1.5终浓度75%的乙醇（DEPC处理）和DEPC水
这里要求一定要是DEPC处理过的（用DEPC配制的）乙醇,DEPC水会与RNA溶解，这时的乙醇会达到清洗RNA的作用，除去RNA中的杂质，保证RNA
的纯度。在实验过程中可重复多次。
DEPC水和RNase-free水都是可以将RNA溶解的试剂。
2实验基本操作过程
每一个过程对于实验的结果都有重要的影响。实验的基本步骤共分为五步，植物组织研碎和破碎、蛋白质分离过程、RNA沉淀、沉淀清洗、RNA溶解【5】。 2.1植物组织研碎和破碎
取新鲜植物组织材料置于高压过的玻璃培养皿中或一次性培养皿中，冷藏在-80℃冰柜中，研磨时先将研钵用液氮预冷，然后将冷冻好的材料转移到研钵中仔细研磨，在研磨过程中要不断的加入液氮，控制研磨的温度，直至磨碎为止（无明显颗粒，如果没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量）。
研磨好的材料分装与EP管中，要求每管大约2克，然后向每管中加入1ml提取试剂，充分震荡，静置、离心。 2.2蛋白质分离过程
不同的方法在这个过程中也不尽相同。关键步骤是加1/5体积的氯仿。这一步在每种方法中都有出现。在上一步离心好的混合物中，抽取上清液体于新的EP管中再加入氯仿，剧烈震荡使两相液体彻底混匀（如若需要除去多糖也可在这一步加试剂）、静置、离心。 2.3 RNA沉淀
仔细取上述混合液的上清液于新的EP管中，切不可抽取中间层的任何沉淀，然后加入等体积的异丙醇用来沉淀RNA与多糖，然后轻轻上下颠倒混匀、静置、离心。
2.4 RNA沉淀清洗
离心后会发现管底会有小片白色沉淀，这时抽出上清液体，向其内顺着管壁
【6】缓缓加入1ml的75%乙醇（75%的乙醇要用0.75ml和0.25ml的DEPC水配制）。
用乙醇液体捶打起沉淀进行洗涤，然后离心。为了得到纯度更高的RNA可以多次重复此步骤，这一步对于RNA的质量不起主要作用。 2.5 RNA溶解
经上步得到的沉淀出去上清后舱盖干燥，一般干燥1-2min，若干燥时间长了容易使RNA不溶于DEPC水。一般DEPC水的填加量为0.02-0.2ml（需要根
据沉淀的量和所需浓度来定）。将提出的RNA保存到-80℃中待用【7】。
3实验结果检测
3.1 RNA完整性的检测
一般实验室都用琼脂糖凝胶电泳检测所提出的RNA的完整性。吸取5微升RNA溶解液与1微升染色指试剂混合点样。待电泳结束于凝胶成像系统观察带的成像【8】。
3.2 RNA结果成像分析
要看所得RNA是否完整首先观察凝胶成像系统中是否呈现的是三条带，且自上而下的28S和18S 条带清晰明亮，28S比18S条带明亮，5S条带浅，这时的RNA是完整的；若加样孔和泳道有明显杂质，同时RNA条带不清晰，28S比18S条带弱，5S条带较亮，表明RNA有一定的降解；点样孔不清亮，且提取RNA呈弥散状，说明RNA降解十分严重；若紫外光检测点样孔不清晰，RNA电泳检测不明显，说明没有提出RNA【9】。
以上几种介绍就是判别RNA完整性的方法。因实验都要求高纯度的RNA，因此对于所得RNA的筛选也是非常严格的。
4 实验注意事项
在整个实验过程中最忌讳的就是外源污染，因RNA所得RNA含量少而外
【10】界降解RNA的酶（RNase）比较多，在实验过程中严格的控制外界酶的进入
显得是十分必要的，这也是决定实验成功的关键因素之一。而防止酶的干扰一般从以下方面做起。 4.1实验准备灭菌
实验所使用的一切玻璃器皿要经过DEPC水的浸泡处理，晾干后再高压处理方可使用。同时在实验开始前要仔细清洁超净工作台和所使用的各种仪器和材料，并提前放进去开紫外线杀毒。
实验中所使用的枪头和离心管都是专用的，切勿与其他实验用具混用。实验前后对已开盒的枪头要严密包装。所使用的试剂也不能与其他实验混用。若有混用的仪器，在实验前一定要仔细消毒。 4.2实验中避免与外界过多接触
在研磨过程中，首先从-80℃中取出处理过研钵用液氮预冷。在研磨时要戴
口罩，戴手套，尽量避免讲话。在转移到离心管的过程中一定要迅速。
在实验过程中一定要勤换手套，且拒绝向外界交换实验器具，也尽量避免离开超净工作台，最好是两个人配合做实验，一个人负责超净里工作，另一个负责外部工作。
实验结束后要将RNA冷藏于-80℃冰箱中。凝胶电泳检测时，提前对电泳槽进行灭菌处理。
结束语
RNA是生物遗传、分子生物等重大课题研究的基础，因此对于RNA提取技术的了解也是十分必要的。首先从提取RNA的各种材料试剂入手，对每种试剂的作用及原理的了解有助于清晰实验的结构。进而再了解主要的实验步骤，这样对于整个实验有了一个基本的框架了解，再从实验结果检测和实验注意事项方面继续丰富、深化，对于整个实验有了一个彻底的认识。这样便有助于未来基础课程的学习，对于相关专业的学习也比较易接受。
参考文献
[1]杜运鹏,李双,何恒斌,杨爽,贾桂霞.百合鳞片总RNA提取方法的比较[J].分子植物育种,2010,04:832-836.
[2]陈高,单雷,周丽侠,唐桂英,毕玉平.花生总RNA提取方法比较研究[J].中国农学通报,2011,01:214-218.
[3]吕晋慧,陈阳,康红梅.一种有效的菊花总RNA提取方法[J].中国农学通报,2011,25:113-116.
[4]王玉成,张国栋,姜静.一种适用范围广的总RNA提取方法[J].植物研究,2006,01:85-88.
[5]赵锦,刘中成,代丽,刘孟军.枣不同器官和组织RNA提取方法的研究[J].植物遗传资源学报,2009,01:111-117.
[6]淳俊,郑彦峰,王胜华,陈放.一种广泛适用的RNA提取方法[J].生物化学与生物物理进展,2008,05:591-597.
[7]吴田,蓝增全.茶梅花瓣总RNA提取方法的比较和分析[J].中国农学通报,2013,28:129-133.
[8]冯立国,李婷琳,陈陈,栾晓芳,丁晗,张健.玫瑰花组织总RNA提取方法研究[J].扬州大学学报(农业与生命科学版),2013,04:104-107.
[9]王杰,王全,田娜,王瑜,王爱香,张克中,崔金腾.不同植物组织RNA提取方法的比较分析[J].北京农学院学报,2015,01:76-80.
[10]董姻然,陈湘宁,常希光,黄健.3种芹菜茎组织总RNA提取方法的比较研究[J].安徽农业科学,2014,08:2273-2275+2314.
致 谢
本篇学年论文是在我的导师张继星老师的指导下完成的，感谢老师的付出。在这两年里老师严格要求，使我在对待事物的态度上发生了很大的变化，尤其是在任何事物上表现出的一种严谨的态度。
对于实验室生活，我尤其感谢研一、大四、大三的师哥师姐们，是他们的耐心传授，使我们学到了更多的实验知识，不只是在实验上，在生活中，他们也一样毫不吝啬的教我一些知识。同时，也感谢和我一起并肩作战的同学们，谢谢你们的陪伴。
生命科学学院本科学年论文指导教师评分表
注：1、请参照上表标准，对学年论文分项打分，并填写在相应项目评分栏中。
2、计算出总分。若总分
评阅。