实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定
（一）实验目的要求
1. 制备芦丁，供药用。
2. 通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。 3. 熟悉重结晶技巧。
4. 了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
（二）实验的基本原理
1. 芦丁的提取原理
利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。
2. 芦丁的分离原理
利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。 3. 芦丁的鉴定原理
（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。
（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。
(三) 实验内容
1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。 2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。 3. 溶剂重结晶精制芦丁。
4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁
(四) 实验药材仪器与试剂
1. 实验药材 槐米20g 。
2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml 烧杯，1000ml 烧杯，50ml 烧杯，250ml 园底烧瓶、500ml 园底烧瓶、100ml 量筒、50ml 量筒、100ml 锥形瓶、50ml 锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。
3. 试剂：硼砂、氧化钙、 HCI 、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH 试纸等。 （五）实验步骤
1. 提取（水提取法）
称取槐米粗粉20g ，在研钵中研碎后放入500ml 烧瓶中，加水200ml ，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min ，趁热过滤。残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。
2. 精制（醇-水重结晶法）
取粗制芦丁1g ，置于250ml 园底烧瓶中，加80%乙醇30ml 加热回流15分钟，趁热抽滤。滤液置250ml 烧杯中，向滤液中加蒸馏水（约3~4倍量）至溶液呈明显混浊，室温放置，抽滤得精致芦丁。用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，晾干，称重。
(六) 过程与现象记录
Day 1 （2011-05-07）
1. 提取
①称取研碎的粗槐米20.02g ，组装仪器。
②原料放入500mL 烧瓶中加水200mL （1-2），磁力搅拌加热。烧瓶中为咖啡色悬浮液，有甘苦气味，沸腾前不断产生小气泡上，液体中有明显漩涡（1-3）。102℃沸腾，产生大量气泡，药渣翻滚，漩涡被气泡遮盖（1-4）。加热过程中时常停止沸腾，续略升温2~3℃。随着时间的延长，液体颜色加深。煮沸觃程中应控制液量，过少难以提出药品，过多容易喷出瓶口。
③最初用抽滤法分离残渣（1-5），但是溶液很稠且含糖分较多，难以流下（1-6），并且易阻塞和冲破滤纸，还渐渐冷却。后改用离心法，5000r,15min(1-7)，效果略好，但是溶液还是冷却，溶解的提取物较少。滤液为深黄色色，粘稠，气味浓厚甘甜。
④再次将滤渣至于放入500mL 烧瓶中加水200mL 磁力搅拌加热30min ，液体颜色略比第一次深。 ⑤将两次得到的浸液（约300mL ）收集放入冰箱备用。
Day 2 （2011-05-08）
2．精制
1. 将粗提物抽滤（1-7）（1-8）（1-9），干燥得粗制芦丁（1-10）。
2. 取粗制芦丁1.008g ，置于250ml 园底烧瓶中，加80%乙醇30ml ，加热回流15分钟（1-11），加热前没有充分分散固体粗提物，趁热抽滤（1-12），得到黄色油状液体（1-13）。
2. 另旋转蒸发粗提物的滤液（1-14），没有产物。
Day 3（2011-05-14）
3. 鉴定
（1）点滴显色反应 从放置一周的粗提物中取芦丁的甲醇溶液（供试液）分别点在滤纸上，挥去溶
剂，紫外照射，光吸收明显（1-15），然后分别添加供试液芦丁的甲醇溶液和显色剂2%三氯化铝乙醇溶液，显黄色（1-16），在紫外灯下λ365nm 观察有明显亮斑（1-17）。
（2） 薄层色谱鉴定
吸附剂： 硅胶GF254薄层板（5.0cm X 10.0cm）。 样 品： 自制芦丁（用甲醇溶解，浓度约1mg/ml） 对照品： 芦丁对照品的甲醇溶液。 展开剂： 三氯甲烷-甲醇-甲酸（7∶3∶0.5）
显 色： a.先在可见光下观察，然后在紫外光下观察，有明显紫外吸收。（365nm 紫外灯下观
察）
b. 遮挡硅胶板左侧喷三氯化铝试剂（1-18）， 365nm 紫外灯下观察，右侧有显色剂呈
黄色，左侧有明显紫外吸收（1-19）。
4 .注意事项
(1) 硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用。实验证明，提取时加入硼砂，产品的质量会好些。
(2) 石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但PH 不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物，影响产品的质量和产率。
(3) PH过低（酸性太强）会使芦丁形成洋盐而收率降低。
(4) 称量芦丁时，先将带滤纸的漏斗称重，再将盛样品的带滤纸的漏斗称重，差重即为样品的重量。
（丂）结果计算及分析 产率 小漏斗+滤纸重29.69g
抽滤后小漏斗+滤纸+样品重30.20g 样品净重0.51g
产率=（0.51/1.008）×100%=50.60% 比移值 Rf=3/5.75=0.522
分析：1、水提法不能充分溶解芦丁；
2、精制时粗提物聚集成固体颗粒，没有充分溶解； 3、抽滤、转移等过程的损失。 （八）心得体会
第一次做这样长时间的实验，渐渐喜欢上了实验室这样安静的气氛，在这里做实验，只需要关注操作和实验过程，思考、分析反应机理和得到某个结果的原因，不需要考虑实验之外的那些世俗和喧嚣。
实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定
（一）实验目的要求
1. 制备芦丁，供药用。
2. 通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。 3. 熟悉重结晶技巧。
4. 了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。
（二）实验的基本原理
1. 芦丁的提取原理
利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。
2. 芦丁的分离原理
利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。 3. 芦丁的鉴定原理
（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。
（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。
(三) 实验内容
1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。 2. 用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。 3. 溶剂重结晶精制芦丁。
4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁
(四) 实验药材仪器与试剂
1. 实验药材 槐米20g 。
2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml 烧杯，1000ml 烧杯，50ml 烧杯，250ml 园底烧瓶、500ml 园底烧瓶、100ml 量筒、50ml 量筒、100ml 锥形瓶、50ml 锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。
3. 试剂：硼砂、氧化钙、 HCI 、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH 试纸等。 （五）实验步骤
1. 提取（水提取法）
称取槐米粗粉20g ，在研钵中研碎后放入500ml 烧瓶中，加水200ml ，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min ，趁热过滤。残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。
2. 精制（醇-水重结晶法）
取粗制芦丁1g ，置于250ml 园底烧瓶中，加80%乙醇30ml 加热回流15分钟，趁热抽滤。滤液置250ml 烧杯中，向滤液中加蒸馏水（约3~4倍量）至溶液呈明显混浊，室温放置，抽滤得精致芦丁。用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，晾干，称重。
(六) 过程与现象记录
Day 1 （2011-05-07）
1. 提取
①称取研碎的粗槐米20.02g ，组装仪器。
②原料放入500mL 烧瓶中加水200mL （1-2），磁力搅拌加热。烧瓶中为咖啡色悬浮液，有甘苦气味，沸腾前不断产生小气泡上，液体中有明显漩涡（1-3）。102℃沸腾，产生大量气泡，药渣翻滚，漩涡被气泡遮盖（1-4）。加热过程中时常停止沸腾，续略升温2~3℃。随着时间的延长，液体颜色加深。煮沸觃程中应控制液量，过少难以提出药品，过多容易喷出瓶口。
③最初用抽滤法分离残渣（1-5），但是溶液很稠且含糖分较多，难以流下（1-6），并且易阻塞和冲破滤纸，还渐渐冷却。后改用离心法，5000r,15min(1-7)，效果略好，但是溶液还是冷却，溶解的提取物较少。滤液为深黄色色，粘稠，气味浓厚甘甜。
④再次将滤渣至于放入500mL 烧瓶中加水200mL 磁力搅拌加热30min ，液体颜色略比第一次深。 ⑤将两次得到的浸液（约300mL ）收集放入冰箱备用。
Day 2 （2011-05-08）
2．精制
1. 将粗提物抽滤（1-7）（1-8）（1-9），干燥得粗制芦丁（1-10）。
2. 取粗制芦丁1.008g ，置于250ml 园底烧瓶中，加80%乙醇30ml ，加热回流15分钟（1-11），加热前没有充分分散固体粗提物，趁热抽滤（1-12），得到黄色油状液体（1-13）。
2. 另旋转蒸发粗提物的滤液（1-14），没有产物。
Day 3（2011-05-14）
3. 鉴定
（1）点滴显色反应 从放置一周的粗提物中取芦丁的甲醇溶液（供试液）分别点在滤纸上，挥去溶
剂，紫外照射，光吸收明显（1-15），然后分别添加供试液芦丁的甲醇溶液和显色剂2%三氯化铝乙醇溶液，显黄色（1-16），在紫外灯下λ365nm 观察有明显亮斑（1-17）。
（2） 薄层色谱鉴定
吸附剂： 硅胶GF254薄层板（5.0cm X 10.0cm）。 样 品： 自制芦丁（用甲醇溶解，浓度约1mg/ml） 对照品： 芦丁对照品的甲醇溶液。 展开剂： 三氯甲烷-甲醇-甲酸（7∶3∶0.5）
显 色： a.先在可见光下观察，然后在紫外光下观察，有明显紫外吸收。（365nm 紫外灯下观
察）
b. 遮挡硅胶板左侧喷三氯化铝试剂（1-18）， 365nm 紫外灯下观察，右侧有显色剂呈
黄色，左侧有明显紫外吸收（1-19）。
4 .注意事项
(1) 硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用。实验证明，提取时加入硼砂，产品的质量会好些。
(2) 石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但PH 不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物，影响产品的质量和产率。
(3) PH过低（酸性太强）会使芦丁形成洋盐而收率降低。
(4) 称量芦丁时，先将带滤纸的漏斗称重，再将盛样品的带滤纸的漏斗称重，差重即为样品的重量。
（丂）结果计算及分析 产率 小漏斗+滤纸重29.69g
抽滤后小漏斗+滤纸+样品重30.20g 样品净重0.51g
产率=（0.51/1.008）×100%=50.60% 比移值 Rf=3/5.75=0.522
分析：1、水提法不能充分溶解芦丁；
2、精制时粗提物聚集成固体颗粒，没有充分溶解； 3、抽滤、转移等过程的损失。 （八）心得体会
第一次做这样长时间的实验，渐渐喜欢上了实验室这样安静的气氛，在这里做实验，只需要关注操作和实验过程，思考、分析反应机理和得到某个结果的原因，不需要考虑实验之外的那些世俗和喧嚣。