逆转录反应，作为分子生物学研究的基本技术之一，已经广泛应用到多个研究领域，可以说是科研人员进行RNA功能研究的看家本事。
众所周知，逆转录的应用领域有以下6种：
逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）
定量RT-PCR（RT-qPCR）
cDNA克隆和文库构建
cDNA末端快速扩增（RACE）
基因表达芯片
RNA测序（RNA-Seq）
今天，小编就整理了一些贴士，帮助大家在面对6种不同的应用时，如何正确选择逆转录酶。
逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）
在RT-PCR中，逆转录酶将RNA转化为cDNA，然后通过PCR反应扩增cDNA,为下游实验提供研究模板，因而逆转录酶是实验成功的关键步骤之一（如下图）。选定的逆转录酶应对所有样本均具有最高效率，即便是难转录RNA样本，如降解、抑制剂残留或具有高度二级结构的RNA样本。
图. 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）。RT =逆转录，RTase =逆转录酶
常用的RT-PCR方法分为一步法和两步法，每种方法都各有优缺点，简要概述如下：
表. 对比一步法和两步法RT-PCR
想要直观、生动的了解这两种方法的不同，可以点击“阅读原文”观看如下视频
定量RT-PCR（RT-qPCR）
定量RT-PCR（RT-qPCR）的最常见应用之一是通过对细胞和组织一段时间或事件后（如，药物治疗）实时mRNA水平的定量分析。RT-qPCR比RT-PCR的灵敏度更高， RT-qPCR基因表达定量的准确性在很大程度上取决于cDNA模板的质量和数量。因此，逆转录对于RT-qPCR的成功至关重要。所选择的逆转录酶应该具有以下特点：
高效合成cDNA的能力，即使是对低丰度基因以及次优质和/或难转录RNA样本。
在宽的RNA起始量范围内，cDNA的动态范围或线性度最佳，可确保基因表达定量的准确性。
所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的cDNA得率，以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。
RT-qPCR的一个特殊程序是从未经RNA分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验，可考虑使用直接RT-qPCR法来防止可能的样本损失和低RNA回收。
逆转录反应，作为分子生物学研究的基本技术之一，已经广泛应用到多个研究领域，可以说是科研人员进行RNA功能研究的看家本事。
众所周知，逆转录的应用领域有以下6种：
逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）
定量RT-PCR（RT-qPCR）
cDNA克隆和文库构建
cDNA末端快速扩增（RACE）
基因表达芯片
RNA测序（RNA-Seq）
今天，小编就整理了一些贴士，帮助大家在面对6种不同的应用时，如何正确选择逆转录酶。
逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）
在RT-PCR中，逆转录酶将RNA转化为cDNA，然后通过PCR反应扩增cDNA,为下游实验提供研究模板，因而逆转录酶是实验成功的关键步骤之一（如下图）。选定的逆转录酶应对所有样本均具有最高效率，即便是难转录RNA样本，如降解、抑制剂残留或具有高度二级结构的RNA样本。
图. 逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）。RT =逆转录，RTase =逆转录酶
常用的RT-PCR方法分为一步法和两步法，每种方法都各有优缺点，简要概述如下：
表. 对比一步法和两步法RT-PCR
想要直观、生动的了解这两种方法的不同，可以点击“阅读原文”观看如下视频
定量RT-PCR（RT-qPCR）
定量RT-PCR（RT-qPCR）的最常见应用之一是通过对细胞和组织一段时间或事件后（如，药物治疗）实时mRNA水平的定量分析。RT-qPCR比RT-PCR的灵敏度更高， RT-qPCR基因表达定量的准确性在很大程度上取决于cDNA模板的质量和数量。因此，逆转录对于RT-qPCR的成功至关重要。所选择的逆转录酶应该具有以下特点：
高效合成cDNA的能力，即使是对低丰度基因以及次优质和/或难转录RNA样本。
在宽的RNA起始量范围内，cDNA的动态范围或线性度最佳，可确保基因表达定量的准确性。
所选试剂在扩增过程中应产生较高且一致的cDNA得率，以获得具有高灵敏度和低变异性的基因表达结果。可考虑预混液形式的逆转录酶用以可以减少实验误差。
RT-qPCR的一个特殊程序是从未经RNA分离的粗细胞裂解物直接进行逆转录。在使用稀缺样本或选用群体内特定细胞的实验，可考虑使用直接RT-qPCR法来防止可能的样本损失和低RNA回收。