植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定
作者:《果蔬贮藏加工学实
验指导》 来源:华南农大 浏览数:2949 录入:2007-6-16 14:53:40
植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定
一、原理
抗坏血酸氧化酶能利用空气中的氧氧化抗坏血酸成为脱氢抗坏血酸； 多酚氧化酶可催化
空气中的氧氧化多酚，成为相应的醌，形成的醌能被抗坏血酸还原。
因此， 在酶提取液中加入抗坏血酸，可测定抗坏血酸氧化酶的活性，加入抗坏血酸及焦
儿茶酚， 可测定抗坏血酸及多酚氧化酶两者的活性，相减即可求出多酚氧化酶的活性。抗坏
血酸的消耗量， 可用碘液滴定剩余的抗坏血酸。碘酸钾在酸性条件下与碘化钾反应放出碘，
放出的碘与抗坏血酸作用，将之氧化成脱氢抗坏血酸，多余的碘能使淀粉变为蓝色。
二、材料与设备
材料：马铃薯块茎
设备：水浴锅、台秤、离心机
试剂：pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液、0.1％抗坏血酸、0.02mol/L焦儿茶酚、10％三氯乙
酸、1％淀粉。
0.05mol/L碘液： 碘化钾2.5g溶于200ml蒸馏水， 加冰醋酸1ml， 再加0.1mol/L碘酸钾
12.5ml，定容至250ml。
三、试验步骤
（一） 酶液制备：
称取马铃薯块茎10.0g， 用预冷pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液，研磨匀浆，定容至50ml，
在18-20℃水浴浸提30分钟，中间摇动数次，再于3000×g离心10分钟，取上清液，4℃保存备
用。
（二） 酶活性测定：
１. 取6个三角瓶(50-100ml)，标上号码，分别加入下列试剂(ml)：
┌──┬────┬───────┬─────────┬──┬─────┐
│瓶号│ 蒸馏水 │0.1％抗坏血酸 │0.02mol/L焦儿茶酚 │ 酶 │煮5分钟酶 │
├──┼────┼───────┼─────────┼──┼─────┤
│ 1 │ 4 │ 2 │ │ 2 │ │
│ 1' │ 4 │ 2 │ │ 2 │ │
│ 2 │ 4 │ 2 │ │ │ 2 │
│ 3 │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ │
│ 3' │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ │
│ 4 │ 3 │ 2 │ 1 │ │ 2 │
└──┴────┴───────┴─────────┴──┴─────┘
1、3瓶各作一次重复，2、4瓶作空白
将6个三角瓶放入18-20℃水浴反应5分钟,立即分别加入10％三氯乙酸1ml，摇匀，终止酶
反应。
２. 滴定
冷却后， 分别加入3滴1％淀粉（马铃薯可不加，因其本身含的淀粉已足够），用碘液滴
定至蓝色。
３. 计算
A. 抗坏血酸氧化酶活性＝[2号瓶滴定毫升数－1号瓶滴定毫升数]×Ｋ
B. 多酚氧化酶活性＝[(4号瓶滴定毫升数－3号瓶滴定毫升数)×Ｋ]－A 酶提取液总量(ml)×0.44
Ｋ＝ ---------------------------------------------
测定时酶液用量(ml)×样品重(g)×测定时间(min)
0.44为每毫升0.005mol/L碘液氧化抗坏血酸的毫克数， 两种酶的活性单位均用每克干重
每分钟氧化抗坏血酸的毫克数来表示。
植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定
作者:《果蔬贮藏加工学实
验指导》 来源:华南农大 浏览数:2949 录入:2007-6-16 14:53:40
植物抗坏血酸氧化酶及多酚氧化酶活性的测定
一、原理
抗坏血酸氧化酶能利用空气中的氧氧化抗坏血酸成为脱氢抗坏血酸； 多酚氧化酶可催化
空气中的氧氧化多酚，成为相应的醌，形成的醌能被抗坏血酸还原。
因此， 在酶提取液中加入抗坏血酸，可测定抗坏血酸氧化酶的活性，加入抗坏血酸及焦
儿茶酚， 可测定抗坏血酸及多酚氧化酶两者的活性，相减即可求出多酚氧化酶的活性。抗坏
血酸的消耗量， 可用碘液滴定剩余的抗坏血酸。碘酸钾在酸性条件下与碘化钾反应放出碘，
放出的碘与抗坏血酸作用，将之氧化成脱氢抗坏血酸，多余的碘能使淀粉变为蓝色。
二、材料与设备
材料：马铃薯块茎
设备：水浴锅、台秤、离心机
试剂：pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液、0.1％抗坏血酸、0.02mol/L焦儿茶酚、10％三氯乙
酸、1％淀粉。
0.05mol/L碘液： 碘化钾2.5g溶于200ml蒸馏水， 加冰醋酸1ml， 再加0.1mol/L碘酸钾
12.5ml，定容至250ml。
三、试验步骤
（一） 酶液制备：
称取马铃薯块茎10.0g， 用预冷pH6.0 1/15mol/L磷酸缓冲液，研磨匀浆，定容至50ml，
在18-20℃水浴浸提30分钟，中间摇动数次，再于3000×g离心10分钟，取上清液，4℃保存备
用。
（二） 酶活性测定：
１. 取6个三角瓶(50-100ml)，标上号码，分别加入下列试剂(ml)：
┌──┬────┬───────┬─────────┬──┬─────┐
│瓶号│ 蒸馏水 │0.1％抗坏血酸 │0.02mol/L焦儿茶酚 │ 酶 │煮5分钟酶 │
├──┼────┼───────┼─────────┼──┼─────┤
│ 1 │ 4 │ 2 │ │ 2 │ │
│ 1' │ 4 │ 2 │ │ 2 │ │
│ 2 │ 4 │ 2 │ │ │ 2 │
│ 3 │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ │
│ 3' │ 3 │ 2 │ 1 │ 2 │ │
│ 4 │ 3 │ 2 │ 1 │ │ 2 │
└──┴────┴───────┴─────────┴──┴─────┘
1、3瓶各作一次重复，2、4瓶作空白
将6个三角瓶放入18-20℃水浴反应5分钟,立即分别加入10％三氯乙酸1ml，摇匀，终止酶
反应。
２. 滴定
冷却后， 分别加入3滴1％淀粉（马铃薯可不加，因其本身含的淀粉已足够），用碘液滴
定至蓝色。
３. 计算
A. 抗坏血酸氧化酶活性＝[2号瓶滴定毫升数－1号瓶滴定毫升数]×Ｋ
B. 多酚氧化酶活性＝[(4号瓶滴定毫升数－3号瓶滴定毫升数)×Ｋ]－A 酶提取液总量(ml)×0.44
Ｋ＝ ---------------------------------------------
测定时酶液用量(ml)×样品重(g)×测定时间(min)
0.44为每毫升0.005mol/L碘液氧化抗坏血酸的毫克数， 两种酶的活性单位均用每克干重
每分钟氧化抗坏血酸的毫克数来表示。